不同溶剂和提取方法对宣木瓜总黄酮提取率的影响＊

2014-11-08秦海军陈师农任燕茹

中国药业 2014年12期

张毅，秦海军，马玲，陈师农，任燕茹

(1．安徽省药物研究所，安徽合肥 230022;2．安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽合肥 230022;3．安徽中医药大学药学院，安徽合肥 230031)

木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠 Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果实，主产于安徽宣城、重庆綦江以及湖北资丘，分别习称为宣木瓜、川木瓜与资丘木瓜，历代本草以宣木瓜为道地药材。木瓜味酸、温，归肝、脾经，具有平肝舒筋、和胃化湿的功效[1]。其化学成分有糖、氨基酸、黄酮、有机酸、三萜和皂苷等，其中黄酮类物质具有稳定血管、保持毛细血管弹性、降低血压、抗溃疡的药理作用[2]。黄酮类化合物的提取，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水等作为溶剂，因此笔者分别选用水、50%乙醇、70%乙醇和乙酸乙酯作为提取溶剂[3]，考察其对总黄硐提取率的影响。

1 仪器与试药

LG-04型中药材粉碎机(瑞安市百信药机械厂);SHZ-D型循环水式真空泵(河南省巩义市英峪仪器厂);As3120B型超声清洗器(上海新芝生物技术研究所);可见-紫外分光光度计(UV-2550型，岛津);电子天平(Mettter AE240);Anke TDL80-2B型离心机(上海安亭科学仪器厂);DHG-9123A型电热鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100080-200306);乙醇为分析纯，水为重蒸馏水;宣木瓜药材购于宣城市开发区。

2 方法与结果

2．1 提取方法[4-6]

加水回流提取(方法1):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加10倍量水，提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液，取样测定含量。

加水索氏提取(方法2):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加300 mL水索氏提取至提取液无色，滤过，合并滤液，取样测定含量。

加水超声提取(方法3):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加10倍量水，超声提取3次，每次30 min，滤过，合并滤液，取样测定含量。

加50%乙醇回流提取(方法4):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加10倍量50%乙醇，回流提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液，取样测定含量。

加50%乙醇索氏提取(方法5):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加300 mL 50%乙醇索氏提取至提取液无色，滤过，取样测定含量。

加50%乙醇超声提取(方法6):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加10倍量50%乙醇，超声提取3次，每次30 min，滤过，合并滤液，取样测定含量。

加70%乙醇回流提取(方法7):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液，取样测定含量。

加70%乙醇索氏提取(方法8):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加300 mL 70%乙醇索氏提取至提取液无色，滤过，取样测定含量。

加70%乙醇超声提取(方法9):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加10倍量70%乙醇，超声提取3次，每次30 min，滤过，合并滤液，取样测定含量。

加乙酸乙酯回流提取(方法10):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加10倍量乙酸乙酯，回流提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液，取样测定含量。

加乙酸乙酯索氏提取(方法11):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加300 mL乙酸乙酯索氏提取至提取液无色，滤过，取样测定含量。

加乙酸乙酯超声提取(方法12):称取宣木瓜药材(过40目筛)10 g，加10倍量乙酸乙酯，超声提取3次，每次30 min，滤过，合并滤液，取样测定宣木瓜总黄酮含量。

2．2 总黄酮含量测定[7-9]

2．2．1 溶液制备

精密称取芦丁对照品5．0 mg，以70%乙醇为溶剂，定容至10 mL容量瓶中，配制成0．50 g/L芦丁对照品溶液。精密称取2．0 g宣木瓜粗粉，至具塞锥形瓶中，加入70%乙醇25 mL，超声30 min，过滤，续滤液定容置100 mL容量瓶中，摇匀，备用，即得供试品溶液。

2．2．2 测定波长确定

吸取2．0 mL对照品溶液和供试品溶液，分别置10 mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠1 mL放置6 min后，加5%三氯化铝1 mL放置6 min，再加4%的氢氧化钠5 mL，静置15 min，以70%乙醇定容，摇匀，离心(2 500 r/min，10 min)，取上清液，对照管以相应试剂做空白，样品管以未经显色的供试品溶液为空白，在400～700 nm波长范围内扫描，结果见图1。结果表明，两种溶液均在500nm波长处有最大吸收，故选择500nm为测定波长。

图1 紫外光谱扫描图

2．2．3 方法学考察

标准曲线制备:取 0．25，0．50，1．00，1．20，1．50 mL 对照品溶液，分别置10 mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠1 mL，放置6 min后，加5%三氯化铝1 mL放置6 min，再加4%的氢氧化钠5 mL，静置15 min，以70%乙醇定容，摇匀，离心(2 500 r/min，10 min)，取上清液，在500 nm处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标、芦丁质量浓度 C(g/L)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为 A=11．123 C+0．006 8，r=0．997 7(n=5)。结果表明，芦丁质量浓度在0．0125～0．075 g/L范围内与吸光度呈良好的线性关系。

精密度试验:取宣木瓜粗粉，按2．2．1项下方法制备供试品溶液6份，分别精密吸取2 mL，按标准曲线制备项下方法操作，测定吸光度，计算含量。结果含量的 RSD为1．15%，表明方法精密度良好。

重复性试验:精密吸取2．2．1项下芦丁对照品溶液1 mL，共6份，按标准曲线制备项下方法操作，分别测定吸光度，计算含量。结果的 RSD为0．18%，表明方法重复性良好。

稳定性试验:精密吸取2．2．1项下供试品溶液2 mL，按标准曲线制备项下方法操作，每隔10 min测定1次吸光度，计算含量。结果1 h内测得含量的 RSD为1．45%，表明供试品溶液在1 h内稳定性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品，精密称定，平行9份，再分别精密加入芦丁对照品溶液适量，按2．2．1项下方法制备供试品溶液，分别从中精密吸取2 mL，按标准曲线制备项下方法操作，测定吸光度，计算回收率。结果见表1。

表1 芦丁加样回收试验结果(n=9)

2．3 样品测定结果

以标准曲线方程计算宣木瓜总黄酮质量浓度 C(以芦丁计)，计算出总黄酮含量 Y=(C×N/宣木瓜质量)×100%(N为稀释倍数)。结果见表2。可见，在相同提取方法下，以70%乙醇作为溶剂，宣木瓜总黄酮含量较高，提取率较高;在相同溶剂下，超声和回流时宣木瓜总黄酮提取率较高，并相差不大。因此，选用70%乙醇作为溶剂，超声和回流都能使宣木瓜总黄酮有很高的提取率。