糖脂消对胰岛素抵抗高血压大鼠基因表达谱的影响

王波WANG Bo；李玉明LI Yu-ming；赵旭燕ZHAO Xu-yan；蔡绍皙CAI Shao-xi；张延威ZHANG Yan-wei

（①贵州师范学院实验教学管理中心，贵阳550018；②武警后勤学院平津医院心血管病研究所，天津 300162；③重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室，重庆400044；④贵州师范学院贵州省生物资源开发利用特色重点实验室，贵阳550018）

0 引言

本文在查阅国内外有关文献的基础上，利用基因芯片技术，进行了糖脂消治疗胰岛素抵抗高血压的作用机制实验，并得出了相关结论，从而验证了糖脂消可以用于糖尿病治疗。

1 研究材料与方法

1.1 药物 主要研究药物为糖脂消，本实验中所用到的糖脂消为由丹参、汉防以、黄芪等各种中药成分组成的胶囊，是由中国人民武装警察部队后勤学院平津医院中医科提供的，药品质量较高。

1.2 建立胰岛素抵抗动物模型 在建立模型时，研究人员要选取33只4-5周龄的雄性SD大鼠，并将其体重控制在130-140g之间。在实验环节，研究人员应将这些大鼠随机等分为3组，并按照一般标准喂食，并严格控制其饲料中的蛋白质、脂肪以及碳水化合物和淀粉的含量。而模型组中，研究人员则按照Reaven[9]要求喂其一些高果糖、高脂肪的饲料。

1.3 提取RNA和标记探针 各小组都选取5只密封完好的比目鱼肌，并在液氮低温的条件下，将其磨碎成粉状。磨碎完成后，研究人员要使用Trizol试剂提取RNA，再通过电泳分析、等量混合、逆转标记等一系列操作最终实现探针标记和提纯。

1.4 芯片杂交 本实验所使用的大鼠表达芯片是由上海联合基因公司研究和开发出来的，其生物功能较为稳定。在进行芯片杂交时，先将芯片和探针置于95℃的水浴中进行变性，待浸泡5min后，实验人员再将芯片加针密封，封片完成后浸入42℃的水浴中连续杂交16h。

1.5 检测与分析 使用Gene Pix 4100扫描，并分析和对比两种荧光信号Cy3和Cy5的强度值大小和比值，使用管家基因进行补充均衡。在检测和分析时须注意：①当二者的信号比值小于0.5时为下调，大于2.0则为上调，位于0.5至2.0之间时为不存在显著表达差异。②二者的信号比值至少有一个大于200。③在进行检测与分析时，必须保证同一基因点的两次检测结果相同，否则将不予采用。

2 结果

2.1 胰岛素抵抗大鼠模型的建立 通过实验对比，可以观察到普通组与高糖组大鼠的各项指标存在明显差异，这表明模型建立是较为科学合理的。（表1）

2.2 芯片杂交信号散点图由于芯片杂交时所使用的双探针分别是由普通组和高糖组的模板分析组合而成的，因此用Cy3代表普通组，用Cy5代表高糖组，并用斜率表示各自的基因上下调情况。其中，斜率小于0.5附近的信号表示基因下调，分布于斜率1.0附近的信号表示无表达差异，而斜率超过2.0附近的信号则表示基因上调。详见图1，图2。

表1

2.3 普通组和高糖组基因表达差异 通过对比可以发现，二者有140条基因进行了2次差异表达，新基因22条，已知基因61条，上调基因62条，功能不清的57条。

2.4 治疗组和高果糖组基因表达差异比较 经过治疗后，基因有了明显变化，重复差异表达的基因数量明显下降，下降至95条，而新基因和功能不清的基因则分别变为23条和38条。

图1 果糖组散点图

图2 糖脂消组散点图

3 讨论

本文在国内外大量研究结果的基础上，采用对比试验的方式建立起了一个胰岛素抵抗大鼠模型，研究了中药在抵抗胰岛素方面的具体作用，并得出了相关结论。但中药的具体作用机制以及基因芯片技术在治疗中的使用仍有待进一步研究。

[1]ovel 2-ethyl-5-phenylthiazole-4-carboxamide derivatives as protein tyrosine phosphatase 1B inhibitors with improved cellular efficacy[J].Eur JMed Chem,2013,9,69C:399-412.

[2]Aguilar DC,Strom J,Xu B,et al.Expression of glucocorticoid-induced leucine zipper(GILZ)in cardiomyocytes[J].Cardiovasc Toxicol.2013,13(2):91-99.

[3]赵旭燕，李玉明，王波.糖脂消对胰岛素抵抗高血压大鼠血脂水平的影响[J].中成药，2005（09）.