气相色谱法同时测定小儿感冒颗粒中百秋李醇、薄荷脑、α-蒎烯、β-蒎烯的含量

江苏省连云港市药品检验所 （222006） 张小龙

江苏省连云港市第一人民医院 （222002）孙晓

南京中医药大学 （210023）马新飞 孙思

小儿感冒颗粒是纯中药制剂，处方成分为广藿香、菊花、连翘、大青叶、板蓝根、地黄、地骨皮、白薇、石膏。具有疏风解表，清热解毒的功效，用于小儿风热感冒、症见发热、头胀痛、咳嗽痰黏、咽喉肿痛。其质量标准仅对靛蓝进行薄层色谱鉴别，无有效成分或指标成分的含量测定[1]。广藿香、薄荷、连翘是小儿感冒颗粒的有效成分，不可或缺。我们为控制产品质量，保证临床疗效，对其含有的α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷脑、百秋李醇这四种挥发性成分的含量进行了测定。结果表明，采用气相色谱法（GC）分析，灵敏度高，重现性好，便于对小儿感冒颗粒进行质量控制。

1 仪器与试药

Agilent 7890B气相色谱仪；α-蒎烯对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110897-200502）；β-蒎烯对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号111827-201202）；薄荷脑对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110728-200506）；百秋李醇对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110772-200404）；小儿感冒颗粒（厂家提供，规格6g/袋，批号：1312283，1401121，1402203），氮气为高纯氮，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：HP-5柱（30m×0.32mm×0.25μm）；柱温采用程序升温：起始40℃，保持5min，8℃/min升至180℃，保持2.5 min；进样口温度：250℃；检测器（FID）温度：300℃；载气为氮气，流速为2.0ml/min；进样量为1μl,分流比为20∶1。

2.2 对照品溶液制备 分别精密称取α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷脑、百秋李醇对照品适量，用乙酸乙酯溶解制成101.2μg/ml、201.1μg/ml、100.7μg/ml、382.1μg/ml的储备液；分别精密量取上述储备液适量，加甲醇稀释成30.36μg/ml、60.33μg/ml、30.21μg/ml、114.63μg/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 称取本品30g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入乙酸乙酯40ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率80KHz）30分钟，放冷，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液为供试品溶液。

2.4 线性范围 各精密量取上述四种对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、8.0ml，分别置10ml量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1μl注入气相色谱仪进行测定，测量峰面积。以对照品浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，经线性回归。结果表明：α-蒎烯在5.060～80.96μg/ml范围内与峰面积线性关系良好，其回归方程为：Y=1.1287X+0.0698，r=0.9999；β-蒎烯在10.06～160.9μg/ml范围内与峰面积线性关系良好，其回归方程为：Y=1.0056X+0.6105，r=0.9997；薄荷脑在5.035～80.56μg/ml范围内与峰面积线性关系良好，其回归方程为：Y=0.8889X+1.8609，r=0.9997；百秋李醇在19.10～305.7μg/ml范围内与峰面积线性关系良好，其回归方程为：Y=0.8872X+29.036，r=0.9998。

2.5 干扰试验 将除去连翘、薄荷、广藿香的其它几味药按处方所述方法制成阴性供试品，照“2.3”项下操作，精密量取对照品溶液，供试品溶液及阴性对照溶液各1μl，在相同色谱条件下进样测定。色谱图见附图。

附图 小儿感冒颗粒色谱图 A.对照品 B.供试品 C.阴性对照

2.6 精密度试验 精密吸取上述同一供试品溶液1μl，连续进样6次，记录峰面积，结果α-蒎烯峰面积RSD=1.2%（n=6）；β-蒎烯峰面积RSD=1.4%（n=6）；薄荷脑峰面积RSD=0.8%（n=6）；百秋李醇峰面积RSD=1.1%（n=6）。

2.7 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液（批号：1312283）溶液1μl，分别在0、3、6、12、18、24h进样，结果24h内升麻素苷峰面积RSD=1.5%（n=7）；β-蒎烯峰面积RSD=0.8%（n=7）；薄荷脑峰面积RSD=1.1%(n=7)；百秋李醇峰面积RSD=1.3%(n=7)。结果表明，供试液待测组分在24h内稳定。

2.8 重复性试验 取同一样品（批号：1312283）6份，按样品测定法操作，测定α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷脑、百秋李醇的含量。结果表明，本方法重复性良好，α-蒎烯含量RSD=1.5%（n=6）；β-蒎烯含量RSD=1.2%（n=6）；薄荷脑含量RSD=1.0%（n=6）；百秋李醇含量RSD=1.2%（n=6）。

2.9 加样回收率试验 取同一样品（批号：1312283）6份，每份15g，分别加入α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷脑、百秋李醇对照品适量，按“2.3”项操作，进样，测得回收率。结果表明：α-蒎烯平均回收率为101.75%，RSD为1.3%（n=6）；β-蒎烯平均回收率为102.26%，RSD为1.1%（n=6）；薄荷脑平均回收率为98.32%，RSD为0.8%（n=6）；百秋李醇平均回收率为99.69%，RSD为1.5%（n=6）。

2.10 样品测定按“2.3”项下条件，分别测定3批小儿感冒颗粒样品含量，结果见附表。

3 讨论

3.1 提取方法的选择 在样品前处理时，参照相关文献[2][3][4][5]，分别考察了提取方法和提取时间对于样品含量的影响。经过测定比较，超声提取所用的提取时间较短，且超声提取的时间不宜过长，以30min为宜，超声1h、2h的样品中α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷脑、百秋李醇的含量均有所下降，故采取超声处理30min的提取方法。

附表 样品含量测定（n=6）

考虑到α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷脑、百秋李醇是挥发性成分，故样品超声过滤后滤液的处理方法对其含量有着直接影响，比较滤液自然挥干、水浴蒸干后加乙酸乙酯溶解及直接取续滤液作为供试品溶液这三种不同方法，发现自然挥干后α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷脑、百秋李醇的损失量分别为22%、16%、5%、0.7%，仅百秋李醇损失较少；水浴蒸干后四种成分的损失量分别为97%、93%、55%、14%，α-蒎烯和β-蒎烯的含量极少，故为了减少供试品溶液制备过程中的损失，直接采用超声处理后的续滤液作为供试品溶液。

3.2 色谱条件的选择 柱温是气相色谱分离的重要参数, 在色谱条件的摸索过程中发现百秋李醇出峰时间较晚, α-蒎烯和β-蒎烯出峰时间又较接近, 比较多种恒温和程序升温方法,在满足系统适应性试验要求下, 尽可能使样品中各种成分不在色谱柱中残留和缩短分析时间，结果表明，设定较低的初始温度可保证α-蒎烯和β-蒎烯色谱峰达到分离, 采用程序升温方式可促使百秋李醇较快出峰。因此，本实验采用起始40℃，保持5min，8℃/min升至180℃，保持2.5 min的程序升温方式，分离效果较好。