HPLC法测定卡托普利片含量不确定度分析

北京市大兴区食品药品安全监控中心（102600）苗立红

卡托普利片为血管紧张素转化酶抑制药，其适用于各型高血压，是治疗轻、中度原发性或肾性高血压的首选药物之一。卡托普利的降压特点是能降低高血压患者的外周血管阻力，预防和逆转血管平滑肌增殖及左心室肥厚，显著改善高血压患者的生活质量。为《中国药典》2010版二部[1]收载的品种。采用高效液相色谱法测定其含量，根据《测定不确定度评定与表示》（JJF1059-1999）, 本文对HPLC法测定不确定度进行计算和评定，最终给出检测结果、置信区间；和置信水平，建立适合于HPLC法测定含量的不确定度方法，以提高HPLC法含量测定结果的准确性。

1 仪器与试药

岛津LC-20AT 高效液相色谱仪；AE-100电子天平；赛多利斯CP225D电子天平；卡托普利对照品（中国药品生物制品检定所，批号100318-2006含量为99.5%）。

2 溶液的制备

2.1 对照品溶液的制备 精密称取卡托普利对照品约10.55mg、10.53mg两份，分别置100ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 取卡托普利片20片，精密称定，研细，精密称取细粉0.0581g、0.0578g两份样品，分别置100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

3 测定方法

3.1 色谱条件 用十八烷基键和硅胶为填充剂；以0.01mol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇-乙腈（70∶25∶5）（用磷酸调pH值至3.0）为流动相；检测波长为215nm；柱温为40℃。

3.2 方法 分别精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪测定，按外标法计算，即为卡托普利（C9H15NO3S）的含量。

4 数据

20片总片重2.8313g;平均片重0.1416g。

5 测定不确定度

6 不确定度来源

卡托普利片含量测定不确定度的来源由对照品和供试品两方面所构成，对照品的不确定度包括：对照品的称量引入的不确定度，对照品稀释引入的不确定度，对照品色谱峰面积引入的不确定度。同理，供试品的不确定度也包括在称量、稀释和色谱峰面积三个方面。

6.1 对照品称量引入的不确定度

6.1.1 对照品称量引入的不确定度由对照品质量和纯度构成。

赛多利斯CP225D电子天平分辨率为0.01mg，按矩形分布，取包含因子则天平称量不确定度U=0.0058mg,天平称量重复性的不确定度：检定证书给出的重复性误差为±0.02mg,按矩形分布，则不确定度U(M2)=0.02/=0.0115mg,由于称量使用减重法，则U对照品称样分别为10.55mg、10.53mg,样1为U(W1)=0.0182/10.55=0.00173，样2为U(W2)=0.0182/10.53=0.00173，即合成

对照品纯度的不确定度：卡托普利对照品纯度为99.5%，未给出限度标识，假定其分布区间为±0.05%，按矩形分布，其不确定度U（P纯）=0.05%/=0.000289。

6.1.2 对照品定容不确定度U(VS) 校准：因A级100ml容量瓶的允值为（100±0.1）ml，按矩形分布，取包含因子K=,则100ml容量瓶引入的标准不确定度U(容

环境温度：实验室环境温度在空调调节下，设置（20±5）℃，水的体积膨胀系数为2.1×10-4℃-1按矩形分布，取包含因子K=，标准不确定度：5×2.1×10-4/=0.000606ml。

6.1.3 对照品溶液浓度引入的合成相对不确定度U(CS)

6.1.4 对照品溶液色谱峰面积引入的不确定度 试验中对照品S1 S2,分别进样5次、2次，取峰面积平均值计算。

第一份对照品溶液测量5次，峰面积分别为2906480、2904908、2904464、2899933、2899596。平均峰面积为2903076，标准差为3117，RSD(%)为0.1%，其引入的不确定度U×2903076）=0.000480。第二份对照品溶液测量2次，峰面积分别为2887773、2890410，平均峰面积为2889092，标准差为1864 ，RSD(%)为0.06%，采用极差法计算，n=2,C=1.13，其引入的不确定度U(AS2)=S1-2/(C×(AS)平）=(2890410-2887773)/(1.13×2889092)=0.000807。对照品溶液峰面积引入相对不确定度：

6.2 供试品引入的不确定度

6.2.1 供试品溶液峰面积引入的不确定度试验中供试品R1 R2,分别进样2次，取峰面积平均值计算。

第一份供试品溶液峰面积为2833625、2832697，平均峰面积为2833161，RSD(%)为0.02%,采用极差法计算，n=2,C=1.13，其引入的不确定度U(AR1)=R1-2/(C×(AS)平）=0.000290。 第二份供试品溶液峰面积为2847930、2845111，平均峰面积为2846520，RSD(%)为0.07%,采用极差法计算，n=2,C=1.13，其引入的不确定度U(AR2)=R1-2/(C×(AS)平）=0.000876。供试品溶液峰面积引入的相对不确定度：

6.2.2 供试品溶液浓度引入的合成相对不确定度包括：对照品溶液的浓度、对照品溶液峰面积、供试品溶液峰面积，U（CR）==0.00285。

6.2.3 供试品称量引入的不确定度U(WR)，供试品称量分别为0.0581g、0.0578g。使用电子天平AE100，检定证书给出的最大允值为±0.2mg,按矩形分布，则不确定度为：天平称量重复性的不确定度，检定证书给出的重复性误差为±0.1mg，按矩形分布，则不确定度为则合成：供试品称样分别为0.0581g、0.0578g,样1为U(W1)=0.1833/0.0581×103=0.00315，样2为U(W2)=0.1833/0.0578×103=0.00317，即合成U(WR)=

6.2.4 供试品定容引入不确定度 校准：因A级100ml容量瓶的允值为（100±0.1）ml,按矩形分布，取包含因子K=,则100ml容量瓶引入的标准不确定度U(容100)=0.1/=0.0577。

环境温度：实验室环境温度在空调调节下，设置（20±5）℃，水得体积膨胀系数为2.1×10-4℃-1，按矩形分布，取包含因子K=，标准不确定度：5×2.1×10-4/

6.3 平均片重0.1416g,使用电子天平AE100，检定证书给出的最大允值为±0.2mg,按矩形分布，则不确定度为：天平称量重复性的不确定度，检定证书给出的重复性误差为±0.1mg，按矩形分布，则不确定度为则合成：U(WR)=U(W平)=0.1833/0.1416×103=0.00129。

6.4 合成不确定度 供试品溶液浓度，供试品称样量，供试品的定容，平均片重等影响因素合成不确定度为U(X供)试验测得X=100.5%,则标准不确定度U(X)=U(X供)×X=0.00549×100.5%=0.55%

6.5 扩展不确定度 取包含因子K=2，则含量测定结果的扩展不确定度为U(X)=K×U(X)=1.10%。

6.6 报告 卡托普利片含量测定结果：标示含量（%）=（100.5±1.1）%（P=95%,K=2）。

7 讨论

本方法测定结果不确定度主要来源色谱峰面积因素、溶液的定容及称量。由于高效液相色谱仪本身影响因素很多，可通过加强对仪器的保养维修，保持其稳定的工作状态，选用较大的定容体积，严格控制实验条件，规范其操作。