GC-MS法测定中江县产藿香挥发油

张慧慧，陈继兰，黄秀深，高必兴，卢先明，王吉娥(成都中医药大学，四川成都 611137)

藿香为唇形科藿香属植物藿香Agastache rugosa(Fisch.et.Mey.)O.Kuntze.的全草，俗称“土藿香”。据报道［1］，藿香挥发油中主要含有甲基胡椒酚。冉蓉［2］分析了四川省成都市郫县产藿香，发现川产藿香挥发油主要含有薄荷酮类化合物。本次测验进一步研究了中江县产藿香不同部位的挥发油，发现胡薄荷酮为中江县产藿香的主要成分，故建立了测定中江县产藿香挥发油中胡薄荷酮的方法，为川产藿香的深入开发利用提供参考。

1 材料、试剂与仪器

1.1 材料 藿香采自2013年8月四川省德阳市中江县，并经成都中医药大学中药鉴定教研室卢先明教授鉴定确认为唇形科藿香Agastache rugosa(Fisch.et Mey.)O.Kuntze.的植物。

1.2 试剂 无水硫酸钠 (分析纯)，萘 (分析纯)，二次蒸馏水，正己烷 (色谱纯)，胡薄荷酮对照品，购于中国药品生物制品检定所 (批号111706-201205)。

1.3 仪器 美国Agilent 7890A/5975C气相色谱/质谱联用仪，挥发油提取器，十万分之一电子天平(德国 Sartorius BP211D)，微型植物试样粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司，FZ102)。

2 方法

2.1 内标物溶液的制备 取萘适量，精密称定，用正己烷配制成2.501 mg/mL的溶液作为内标溶液。

2.2 挥发油供试品溶液的制备［3］取藿香药材，干燥，分开其花、叶、茎、全草粉碎，称取药材适量 (花、叶、全草各10 g，茎50 g)，分别加入10倍量水，浸泡8 h，水蒸气蒸馏提取6 h，得黄色透明挥发油约0.1 mL，用1 mL正己烷溶解，用无水硫酸钠干燥，置10 mL量瓶中，再加入1 mL内标物溶液，正己烷定容，为加入内标的供试品溶液。

2.3 色谱条件 毛细管气相色谱柱HP-5 MS(5%Phenyl Methyl Silox，30 m ×250 μm ×0.25 μm);载气为氦气，体积流量1.84 mL/min;分流比为100 ∶1;进样量 1 μL。

程序升温方法 初始温度60℃，保持3 min;以4℃/min速率升至150℃;再以10℃/min速率升至260℃，保持10 min。

2.4 质谱条件 电离方式:离子源EI源，电子能量70 eV;离子源温度230℃，四级杆温度150℃，电子倍增器电压1729 V。溶剂延迟:3 min。

通过Agilent 5975C MSD化学工作站检索NIST标准质谱图库，同时结合有关质谱图文献解析，确认中江产藿香挥发油化学成分，相对含有量的确定为面积归一化法。

2.5 线性关系考察 精密称取胡薄荷酮对照品73.20 mg，置10 mL量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度制成含对照品7.32 mg/mL的对照品贮备液。从该贮备液中各精密量取 5、2.5、1.25、0.5、0.25、0.125、0.0625 mL，置 10 mL量瓶中，加内标物溶液，再加正己烷稀释至刻度，分别制成含内标物萘0.25010 mg/mL，对照品3.66、1.83、0.915、0.366、0.183、0.0915、0.04575 mg/mL的系列对照品溶液。分别吸取上述溶液各1 μL，注入气相色谱仪，按内标法以峰面积计算，以对照品与内标峰面积比值为纵坐标 (Y)，对照品质量浓度 (mg/mL)为横坐标 (X)，绘制标准曲线，得回归方程Y=3.7719X－0.0281(r=0.9999)，表明胡薄荷酮在0.04575～3.66 mg/mL之间呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取同一含内标物的供试品溶液1 μL，重复进样6次，测得胡薄荷酮与内标物峰面积比值的RSD为3.5%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.7 稳定性试验 取同一含内标物的供试品溶液，放置0、2、4、6、8、12 h依法测定，胡薄荷酮与内标物峰面积比值的RSD为1.3%(n=6)，表明本品在12 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验 取同一批藿香的花药材6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，测定挥发油中胡薄荷酮的量，结果挥发油中胡薄荷酮含有量的RSD为3.8%(n=6)，表明本方法重复性良好。

2.9 回收率试验 采用加样回收法，取同一批藿香的花药材6份，按“2.1”项下方法提取挥发油，分别将6份挥发油置于10 mL量瓶中，精密加入胡薄荷酮对照品适量，精密加入内标物溶液1 mL，加正己烷至刻度，摇匀，0.22 μm微孔滤膜过滤，精密吸取1 μL注入气相色谱仪中测定。胡薄荷酮回收率为99.6%，RSD为2.6%(n=6)。

2.10 样品的测定 取各供试品溶液，0.22 μm微孔滤膜过滤，精密吸取1 μL注入气相色谱仪中测定。

3 结果

3.1 藿香不同部位挥发油含有量及GC-MS比较中江县产藿香不同部位挥发油的主要成分基本相同，为薄荷酮类化合物，其中含有量较高的化合物为胡薄荷酮 (8)和薄荷酮 (5)，其次为异薄荷酮(4)，吉玛烯 (14)，右旋萜二烯 (3)，异胡薄荷酮 (6)，1-石竹烯 (13)等。中江产藿香挥发油化学成分和相对百分含有量见表1。在花及叶中含挥发油较高，茎中极低，色谱图见图1。总离子流面积百分比结果表明:不同部位挥发油中均以含胡薄荷酮最高，达55%以上，薄荷酮在花及全草中含有量相对较高，茎中最低;异薄荷酮在花及全草中含有量相对较高，结果见表2。

表1 中江县产藿香全草挥发油的化学成分和各化学成分峰面积占峰总面积的比例Tab.1 Components and proportions between oils character peaks area and total peaks area in the herb of Agastache rugosa from Zhongjiang County

图1 不同部位藿香挥发油色谱图Fig.1 Chromatograms of volatile oil in different parts of Agastache rugosa

表2 藿香不同部位出油率及油中主要化合物的相对含有量Tab.2 Oil yield and relative contents of the main compounds in different parts of Agastache rugosa

3.2 藿香不同部位挥发油中胡薄荷酮测定 精密吸取含内标物的供试品溶液1 μL注入气相色谱-质谱联用仪中测定，按内标法以相对峰面积计算胡薄荷酮的量。其叶和花中胡薄荷酮的量较高，结果见表3。藿香的茎挥发油及对照品溶液色谱图见图2、图3。

表3 胡薄荷酮测定结果Tab.3 Determination results of pulegone

图2 胡薄荷酮对照品 (加内标)色谱图Fig.2 Chromatogram of pulegone reference substance with internal standard substance

图3 藿香的茎挥发油 (加内标)色谱图Fig.3 Chromatogram of volatile oil substance in the stem of Agastache rugosa with internal standard substance

4 讨论

藿香是一味常用中药，具有祛暑解表、芳香化湿和胃之功效，主治夏令感冒，寒热头痛，胸脘痞闷，呕吐泄泻，妊娠呕吐，鼻渊［4］。关于藿香挥发油的化学成分组成，国外文献报道以甲基胡椒酚为主［5］，国内文献报道藿香挥发油的主要成分不尽一致:有报道以甲基胡椒酚［1，6-8］、甲基丁香酚［9］、甲氧基苯丙烯［10］、β-杜松烯［3］、百里香醌［11］或薄荷酮类化合物［2，12-13］为主。本实验用 GCMS法检测藿香不同部位挥发油，结果表明中江产藿香挥发油的主要成分为薄荷酮类，主要又以胡薄荷酮和薄荷酮为主，与文献报道的有差异，这可能主要受地域影响。因此，植物种名一样的情况下，其主要化学成分也可能存在很大差异，进而引起原药材的性味、归经与功效的不同，这一点在中药的鉴定研究中需要加以注意。

胡薄荷酮具有抗炎［14］、抗组胺的作用，本实验建立了中江产藿香挥发油胡薄荷酮的定量测定方法，该方法简单易行，准确，为中江产藿香挥发油提供了一种可靠性强的定量分析方法，也为川产藿香资源开发利用提供基础理论参考。

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