HPLC测定清咳平喘颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

宋玉国，张新茹，李秀芬，彭振宇

(1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.吉林大学 第二医院,吉林 长春 130041)

*

宋玉国，主管药师，研究方向：药品质量标准；E-mail:songyuguo.813@163.com

HPLC测定清咳平喘颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

宋玉国1*，张新茹2，李秀芬1，彭振宇1

(1.吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033；2.吉林大学 第二医院,吉林 长春 130041)

目的建立测定清咳平喘颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)分析柱，流动相为乙腈-0.2%磷酸(5∶95)；流速为0.8 mL·min-1,检测波长为210 nm。结果盐酸麻黄碱线性范围0.051 8～0.518 μg，r=0.999 8，平均回收率为94.5%；RSD=0.64%(n=6)；盐酸伪麻黄碱线性范围0.019 58～0.19 58 μg,r=0.999 4,平均回收率为90.6%；RSD=0.95%(n=6)。结论该法操作简便、准确、分离度与稳定性好、专属性强，可作为控制该药品的质量方法。

清咳平喘颗粒；高效液相色谱法；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；含量测定；质量控制

清咳平喘颗粒为长春远大国奥制药有限公司(原长春海王生物制药有限公司)与山西神泉保健品有限公司太原分公司合作开发的中药三类新药，药品标准号为YBZ02472004-2009。其方是由石膏、金荞麦、鱼腥草、蜜麻黄、炒苦杏仁、川贝母、矮地茶、枇杷叶、炒紫苏子、炙甘草等10味中药组成；具有清热宣肺，止咳平喘功能。用于急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作属痰热郁肺证，症见：咳嗽气急，甚或喘息，咯痰色黄或不爽，发热，咽痛，便干，苔黄或黄腻等。方中蜜麻黄润肺止咳，多用于表证已解，气喘咳嗽，其主要成分为盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱。原标准只对盐酸麻黄碱进行含量测定，为严格控制其含量，以控制该制剂内在质量,保证其安全、可靠。采用高效液相色谱法同时对方中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量进行测定，并以二者为指标来控制本品的质量。

1 仪器、试药与试剂

AgiLent1200高效液相色谱仪；天平：Sartorius BS 124S；Sartorius BT-125D；KQ-500E超声仪(500 W,40 Hz)；Cary50紫外光分光光度计；MILLIPORE超纯水器。

盐酸麻黄碱对照品(批号：171241-200506，含量测定用)、盐酸伪麻黄碱对照品(批号：171237-200807，纯度99.9%，含量测定用)，购自中国食品药品检定研究院。清咳平喘颗粒(长春远大国奥制药有限公司，批号：110501，110503，110601，111201，111202，111203)。缺蜜麻黄的阴性样品(自制)。乙腈、磷酸为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为ApoLLo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈-0.2%磷酸(5∶95)为流动相；流速0.8 mL·min-1,；检测波长为210 nm。柱温为35 ℃。进样量为10 μL；分离度大于1.5；理论塔板数定为以盐酸麻黄碱计不得低于5 000。色谱图见图1～3。

图1 盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品HPLC图

图2 清咳平喘颗粒供试品HPLC图

图3 缺蜜麻黄的阴性对照品HPLC图

2.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品适量，加盐酸-甲醇(1∶100)制成每1 mL含盐酸麻黄碱50 μg和盐酸伪麻黄碱20 μg的溶液,摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品，研细，取约5.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入1 moL·L-1的盐酸溶液50 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)40 min，放冷，用上述盐酸溶液补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10 mL，置分液漏斗中，加入6 moL·L-1氢氧化钠溶液2 mL，加入氯化钠2 g，用乙醚提取5次(20，10，10，10，10 mL)，合并提取液，加入酸性乙醇(盐酸1→20)1 mL，低温蒸干，残渣加盐酸-甲醇(1∶100)使溶解，移至10 mL量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)至刻度，摇匀，即得。

2.4 阴性对照品溶液的制备

取不含蜜麻黄的阴性对照样品，按2.3项下方法制备。

2.5 线性关系考察

精密称取盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品适量，加盐酸-甲醇(1∶100)制成每1 mL含0.051 8，0.019 6 mg的溶液，分别精密吸取1，3，5，7，9 μL测定，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的回归方程分别为：Y= 266 2.7X+6.037 2(r=0.999 8)；Y= 266 4.9X+2.298(r=0.999 4)。结果表明，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱进样量分别在0.051 8～0.518 μg和0.019 58～0.195 8 μg呈良好线性关系。

2.6 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液(批号：110503)5 μL，注入液相色谱仪，重复6次，测定其色谱峰面积，计算盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD分别为0.26%，0.40%，结果表明精密度良好。

2.7 稳定性试验

精密称定同一批样品(批号：110503)适量，按2.3制备供试品溶液后，按含量测定方法，分别在0，8，16，24，36，48 h测定，记录色谱峰面积，计算盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD分别为0.98%，结果表明供试品溶液在48 h内基本稳定。

2.8 重复性试验

精密称取同一批样品(批号：110503)样品5.0 g，共6份，分别置具塞锥形瓶中；按供试品溶液制备方法制备，测定，二者总含量平均值为0.869 9 mg·g-1，RSD=0.98%(n=6)，结果表明重复性良好。

2.9 回收率试验

2.9.1 加样回收用的对照品贮备液制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品15.09 mg和盐酸伪麻黄碱对照品6.26 mg，置500 mL量瓶，加1 moL·L-1的盐酸适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

2.9.2 回收率测定 精密称取同一样品(批号：110503)样品2.5g(含盐酸麻黄碱0.596 2 mg·g-1；盐酸伪麻黄碱0.276 9 mg·g-1)，共6份，分别置具塞锥形瓶中；精密加入上述加样回收用的对照品贮备液50 mL，按供试品溶液制备方法制备，测定，结果见表1、2。

表1 清咳平喘颗粒中盐酸麻黄碱回收率试验

注：盐酸麻黄碱对照品加入量均为1.509 mg

表2 清咳平喘颗粒中盐酸伪麻黄碱回收率试验

注：盐酸伪麻黄碱对照品加入量均为0.626 mg

2.10 样品测定结果

取6批样品，按拟定含量测定方法操作，测定，结果见表3。

表3 清咳平喘颗粒中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱含量测定 /mg·g-1

3 讨论

3.1 色谱柱的选择

实验中比较了Apollo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、Capcell PAK-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Dimasil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)4种色谱柱，按拟定含量测定方法操作，在使用不同色谱柱的情况下，结果均能较好地将盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱碱两种成分分离，且主峰前后无杂峰，结果选用ApoLLo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱。参照《中国药典》2010年版麻黄项下【含量测定】的规定[1]，理论塔板数定为以盐酸麻黄碱计不得低于5 000。

3.2 测定波长的选择

精密称取盐酸麻黄碱对照品5.36 mg和盐酸伪麻黄碱对照品5.42 mg，分别置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，在紫外区190～400 nm扫描，结果表明，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱在205 nm处有最大吸收，与《中国药典》2010版一部麻黄项下所采用的检测波长(210 nm)基本一致。故选定210 nm作为本品的测定波长。

3.3 流动相的选择

考察了5种流动相系统：①乙腈-含0.2%三乙胺的0.02 moL·L-1磷酸二氢钾溶液(3∶97)，用磷酸调节pH值至2.7[1]，②甲醇-磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH为2.5)(6∶94)[2]，③乙腈-0.2%磷酸(5∶95)[3]，④乙腈-含0.3%三乙胺的0.02 moL·L-1磷酸二氢钾溶液(5∶95)，用磷酸调节pH值至3.0[4]，⑤ 乙腈-0.1%磷酸(3∶97)[5]；结果①④盐酸伪麻黄碱和盐酸麻黄碱分离度不好；②⑤色谱条件下保留时间长，故未采用；③色谱条件出峰时间快，分离度好；故选择其作为流动相。

3.4 提取方法的考察[1-2]

分别考察了提取方法溶剂种类(加氨水2 mL,再加入三氯甲烷40 mL超声；加水50 mL,再加入浓氨试液1 mL，超声后用乙醚提取；加1 moL·L-1的盐酸溶液50 mL，超声后加入6 moL·L-1氢氧化钠溶液调pH值，乙醚提取)及提取时间(30，40，50 min)对测定结果的影响，结果表明，采用加入1 moL·L-1的盐酸溶液50 mL，超声处理40 min，加入6 moL·L-1氢氧化钠溶液2 mL调pH值，用乙醚提取，提取率相对较高。故作为含量提取方法。

实验建立的清咳平喘颗粒中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱含量测定方法，操作简便、准确、分离度与稳定性好、专属性强，可用于该药品的质量控制。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010：300,1055-1056.

[2] 国家药品监督管理局.中成药地方标准上升国家标准部分[S].内科肺系一分册.2002：504-506.

[3] 太成梅,那微,赵晓霞，等.HPLC法测定小儿肺热咳喘口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量[J].中国药品标准,2010,11(5)：380-383.

[4] 李娜，周爱军，黄鹤归，等.HPLC法测定大青龙汤颗粒剂中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量[J].中国药师,2012,15(12)：230-232.

[5] 付莉，张淼.HPLC法测定麻黄浸膏中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量[J].中国药事,2012,26(6)：611-616.

DeterminationofEphedrineHydrochLorideandPseudophedrineHydrochLorideinQingkePingchuanGrainsbyHPLC

SONGYuguo1*,ZHANGXinru2,LIXiufen1,PENGZhenyu1

(1.JilinInstituteforFoodandDrugControl,Changchun130033,China;2.TheSecondHospitalofJilinUniversity,Changchun130041,China)

Objective：To establish quality control methed of Ephedrine hydrochloride and Pseudophedrine hydrochloride in Qingke Pingchuan Grains.MethedsThe column was Apollo C18(Φ250 mm ×4.6 mm,5μm)and a mixture of acetonitrile and 0.2% phosphoric acid as the mobile phase was adopted.The flow rate was 0.8 mL·min-1and The UV detection wavelength was 210 nm.ResultsThe linear range of Ephedrine hydrochloride was 0.0518～0.518 μg(r=0.999 8),the average recovery was 94.5%,RSD=0.64%(n=6).The linear range of Pseudophedrine hydrochloride was 0.019 58～0.195 8 μg(r=0.999 4),the average recovery was 90.6%；RSD=0.95%(n=6);ConclusionThe method was simple,accurate,applicable and can be used for the quality control of Qingke Pingchuan Grains.

Qingke Pingchuan Grains;HPLC;Ephedrine hydrochloride;Pseudophedrine hydrochloride;Determination;Quality control

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.04.015

2013-06-13)