丙肝抗原的检测与抗-HCV及HCV-RNA定量的关系探讨

申爽，奉淼



丙肝抗原的检测与抗-HCV及HCV-RNA定量的关系探讨

申爽，奉淼

125001 辽宁省葫芦岛市中心医院检验科

丙型肝炎呈世界性分布，各国丙型肝炎病毒（HCV）感染率为 0.1% ~ 10%，平均为 3%，1.7 亿 ~ 2 亿人感染了 HCV。我国一般人群 HCV 感染率为 3.2%[1]。成人感染 HCV 后，50% ~ 80% 发展成慢性肝炎，其中约 20% 可发展为肝硬化。肝硬化患者中，每年 1% ~ 4% 可发展为肝癌[2]。由于目前对丙型肝炎已有有效的治疗方法，因此对 HCV 感染者的病毒检测，既有利于控制丙肝的传播和预防，又有利于丙肝患者的治疗。

现行的 HCV 检测技术主要为 HCV 抗体检测及核酸（HCV-RNA）检测，两者均存在一定的局限性。HCV 核心抗原检测是 20 世纪 90 年代发展起来的新型技术，对 HCV 感染具有诊断意义，国内 HCV 游离抗原检测已有不少报道，但丙型肝炎病毒核心抗原与抗体和 RNA 之间的关系与临床意义未见报道，本文通过调查抗-HCV 阳性反应血清的 HCV 核心抗原状况，并结合 HCV-RNA 定量检测情况探讨 HCV 核心抗原检测的临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 收集 2013 年 1 月 1 日至 6 月30 日在葫芦岛市中心医院就诊的门诊和住院疑似丙型肝炎患者的血清样本，每天以丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒（电化学发光法，CIA）检测抗-HCV，共收集初筛结果呈阳性（S/CO > 1.0）的血清 125 例，其中包括 1.0 < S/CO < 8.0 的样本64 例，S/CO ≥ 8.0 的样本 61 例。对初筛结果为阳性的血清于–80 ℃保存。

1.1.2 仪器与试剂 E601 电化学发光免疫分析仪购自德国 Roche Diagnostics GmbH 公司；MKIII 酶标仪购自美国 Thermo Fisher 公司；ABI 3700 荧光定量 PCR 仪购自美国 ABI 公司。

丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒为美国罗氏公司产品；丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（酶联免疫法）为山东莱博生物科技有限公司产品；丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）为凯杰生物工程（深圳）有限公司产品。

1.2 方法

各检测项目严格按照上述各试剂盒说明书进行操作。①抗-HCV 抗体：以 > 20 IU/L 为阳性；②HCV 核心抗原：检测样品≥临界值（cutoff 值= 0.06 + 阴性对照平均值，小于 0.06，按照 0.06 计算）为阳性；③HCV RNA 荧光定量：以 > 1.0 × 103IU/ml 为阳性。

1.3 统计学分析

采用 SPSS17.0 进行统计学处理，两个样本率比较采用2检验，< 0.05 为差异有统计学意义。

HCV 核心抗原检测与 HCV RNA 检测一致性比较采用 κ 检测，两者相关性进行回归性分析。

2 结果

在 64 例 1.0 < S/CO < 8.0 的丙肝抗体样本中，检出 HCV 核心抗原阳性 3 例；采用 HCV 核酸检测进行补充实验，该 3 例 HCV 核心抗原阳性样本核酸检测也为阳性，其余 61 例样本 HCV 核酸检测均为阴性。

在 61 例 S/CO ≥ 8.0 的丙肝抗体样本中，检出 HCV 核心抗原阳性 38 例；经 HCV 核酸检测进行补充实验，该 38 例 HCV 核心抗原阳性样本核酸检测也为阳性；另外在 HCV 核心抗原检测为阴性的 23 例样本中，检出 5 例 HCV-RNA 结果 > 103IU/ml 的样本。

对上述结果进行统计，HCV 核心抗原检测与 HCV-RNA 检测呈很好的相关性（= 0.9989）及一致性（κ = 0.95607）。统计结果见表 1 ~ 3。

表 2 抗-HCV 检测（CIA）与 HCV-RNA PCR 检测结果

表 3 HCV 核心抗原 ELISA 检测与 HCV-RNA PCR 检测结果

注：*：两组检测比较，κ = 0.96 > 0.75，说明两种检测一致性较好；= 0.9989，说明两种检测相关性较好。经统计，2= 0.567，> 0.05，说明两者差异无统计学意义。

3 讨论

对 125 例抗-HCV 阳性血清的 HCV 核心抗原检测，抗-HCV 阳性，HCV 核酸检测也呈阳性者，为HCV 感染者无疑，抗-HCV 阳性而 HCV 核心抗原检测阴性者，而且 HCV 核酸检测也为阴性则可能与抗-HCV 检测试剂的特异性、病毒血症消退有关。

虽然 CIA 检测方法被普遍认为具有较高的灵敏度，其检测结果阳性率也高于第三代丙肝抗体 ELISA 诊断试剂盒，但美国疾病控制与预防中心（CDC）的研究指出，高 S/CO 比值的标本常被确证为丙肝抗体阳性（≥ 95%），但尚有 < 5%的标本可能为假阳性。美国 CDC 分析了 HCV 感染率人群中化学发光免疫检测（CIA）试剂（Ortho 公司的 VITROS anti-HCV assay）与确证试验（RIBA）结果的相关性，VITROS anti-HCV 筛查结果 S/CO 比值≥ 8.0 时，可预测≥ 95% 的真阳性结果[3]。在本次研究中也表明，在化学发光免疫检测中 S/CO 比值≥ 8.0 时，HCV 核心抗原及 HCV-RNA 的阳性检出率也很高，分别为 62.30% 和 70.49%，远高于 1.0 < S/CO < 8.0 这一组，后者的 HCV 核心抗原及 HCV-RNA 的阳性检出率均仅为 4.69%。

美国 CDC认为，抗-HCV 阳性只能提示患者是既往感染或现症感染，却无法对两者进行区分[3-4]。对于抗-HCV 阳性而 HCV 核心抗原及 HCV-RNA 检测均为阴性的样本，其抗-HCV 可能是假阳性，也有可能提示为既往感染，只是此时病毒已停止复制，因此 HCV 核心抗原和 HCV RNA 检测显示为阴性。

此外，RIBA 检测试剂昂贵，因此我国临床实验室及采供血机构很少或不对抗-HCV EIA 检测结果进行确证试验。由于抗-HCV 检测假阳性问题的存在，且抗-HCV 检测与 RIBA 检测均无法区分既往感染及现症感染等问题，势必会引起相当一部分就医者或献血者不必要的心理负担。

HCV-RNA 检测可以直接反映体内丙型肝炎病毒（HCV）的活动性和复制情况，本研究中，在 S/CO 比值≥ 8.0 的抗-HCV 阳性血清中，HCV-RNA 检测的阳性率为 70.48%（43/61），这一数值很接近相关报道[4-5]。HCV RNA 的检测虽具有早期检测、灵敏度高等特点，但其检测样本为核酸水平，在常温条件下易降解，样本质量控制难以保证，而且在技术、人员、环境和设备上要求高，不易大规模推广。

HCV 核心抗原检测技术反映了 HCV 复制的间接指标，本文研究显示 HCV 核心抗原检测与HCV-RNA 检测无显著性差异（χ= 0.567，> 0.05），且两者呈现出很好的相关性（= 0.9989）及一致性（κ = 0.96）。另外，HCV 核心抗原与 HCV 抗体检测样本均为蛋白水平，检测方法均是酶联免疫法，在常温条件下检测结果稳定、不受环境、人员及检测时间的影响，便于常规检测。

因此，在我国若采用抗-HCV 与 HCV 核心抗原联合检测，再对可疑样本（如单一抗-HCV 阳性或 HCV 核心抗原阳性）进行 HCV-RNA PCR 检测，结果就更加可靠，能很好地控制丙肝传播及指导丙型肝炎患者治疗前后的疗效评价，还可降低就医者和献血者的心理负担及经济负担，具有重要的社会效益和经济效益。

[1] Zhuang H. Towards research on hepatitis C. Chin J Hepatol, 2004, 12(2):65-66. (in Chinese)

庄辉. 重视丙型肝炎的研究. 中华肝脏病杂志, 2004, 12(2):65-66.

[2] Flamm SL. Chronic hepatitis C virus infection. JAMA, 2003, 289(18): 2413-2417.

[3] Alter MJ, Kuhnert WL, Finelli L, et al. Guidelines for laboratory testing and result reporting of antibody to hepatitis C virus. Centers for Disease Control and Prevention. MMWR Recomm Rep, 2003, 52(RR-3):1-13, 15; quiz CE1- CE4.

[4] Recommendations for prevention and control of hepatitis C virus (HCV) infection and HCV-related chronic disease. Centers for Disease Control and Prevention. MMWR Recomm Rep, 1998, 47(RR-19): 1-39.

[5] Wang H, Li BA, Li YL, et al. Study on the comparison of different methods in testing HCV antibodies and the relationship among anti- HCV, HCV RNA and ALT. Infect Dis Info, 2007, 20(5):293-295. (in Chinese)

王晗, 李伯安, 李永利, 等. 丙型肝炎抗体的检测与HCV RNA定量及ALT的关系探讨. 传染病信息, 2007, 20(5):293-295.

申爽，Email：ss00450678@163.com

2014-04-09

10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.05.016