赖诺普利片近红外光谱法定性模型的建立

江苏省盐城市药品检验所（224002）袁步娟 王梅娟

赖诺普利（lisinopril）属N-羧烷基取代的二肽类血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂，是继卡托普利、依那普利后第三个上市的口服有效的ACE抑制剂。适应于高血压、高血压肾病、急性心肌梗死、肾病内科、心血管内科。赖诺普利在1987年底首次在新西兰上市，1991年在美国ACE抑制剂市场中占24.4%的份额，与已上市的其他ACE抑制剂比较，本品具有长效、强效、治疗费用低等优点，应用日趋广泛。现用近红外光谱分析技术进行鉴定，具有分析速度快、效率高、分析成本低等特点。样品测量不需要进行预处理，光谱测量过程中也不消耗样品，是典型的无损和绿色分析技术。

1 仪器及样品

1.1 仪器 Matrix-F傅里叶变换近红外光谱仪( 德国BRUKER 公司)，手持光纤探头，半导体制冷 INGAAS检测器，Opus5.0光谱工作站,Agilent高效液相色谱仪 (美国Agilent公司)

1.2 样品 江苏黄河药业股份有限公司赖诺普利片12批（编号 1～12，批号分别是：120401、120304、120502、120303、120101、120203、121201、121202、120402、130301、130302、130201），假冒产品 2批（编号为：13和14，批号分别为130215、120720）。

2 实验方法

2.1 样品制备 除去药品的铝塑包装 即得

附图1 赖诺普利片原始光谱图

附图2 近红外光谱特征曲线

附图3 正品的一阶导数+矢量归一光谱

附图4 正品和假冒品的一阶导数+矢量归一光谱

2.2 近红外光谱的采集与处理 将近红外光谱仪的光纤探头贴紧药片，原始光谱波数范围为12000～4000cm-1, 分辨率为8cm-1，每批样品测定 3次，收集样品编号，1～12的光谱信息，在Opus的 Setup Conformity Test模块中，取9000～4200cm-1谱段范围对原始光谱进行一阶导数化(17 点平滑)加矢量归一化数据前处理后建立判别模型。

2.3 高效液相色谱图扫描 取编号为11、13、14的样品按国家标准赖诺普利片含量测定项下的方法[2]。取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量，（约相当于赖诺普利无水物20mg），置100ml量瓶中，加水适量，振摇使赖诺普利溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲溶液（0.02mol/L磷酸二氢钠溶液，用氢氧化钠溶液调节pH值至5.0）-乙腈（92：8）为流动相，检测波长为215nm；柱温为50℃。取赖诺普利与2-氨基-4-苯基丁酸适量，加水溶解并定量稀释制成每1ml中分别含1mg与0.01mg的混合溶液，取20ul，注入液相色谱仪，赖诺普利与2-氨基-4-苯基丁酸的分离度应大于3.0，理论板数按赖诺普利峰计算不低于700。

3 结果

3.1 正品与假冒品近红外光谱图的差异 样品编号1～12在波数范围为12000～4000cm-1的近红外光谱见附图1。

以Opus软件对赖诺普利片正品与假冒品的近红外原始光谱进行分析[3]，正品在波数范围为9000～4200cm-1的近红外光谱图有明显的特征曲线，与假冒品在8 0 0 0～6 0 0 0 c m-1有明显差异（见附图1）。将正品与假冒品的近红外原始图谱进行一阶求导+矢量归一，其光谱见附图2～4。

3.2 正品与假冒品高效液相色谱图的差异为进一步求证，取赖诺普利片正品与假冒品扫描高效液相色谱。

3.3 建立一致性检验模型进行筛查

在Opus的一致性检验模型设置模块[4]，取江苏黄河药业股份有限公司的12批赖诺普利片（编号1～12）的近红外光谱图作参考图谱，一阶导数（1 7点平滑）加矢量归一化预处理数据，取10000～4200cm-1波段范围。设定CI值为6，建立一致性检验模型。另取江苏黄河药业股份有限公司的2批样品（编号12、13），假冒品2批（编号14、15）对模型进行验证，结果见图5。由图可见，12批样品均在模型设定的CI限度范围内，而2批假冒品均在模型设定的CI限度范围外。见附图5。

3.4 模型耐用性验证 取在不同条件下近红外光谱作为验证光谱，结果见附图6。不同操作者、湿度、温度环境等变化下测定的光谱均在所设定的CI限度之下。验证结果说明上述因素变化对模型判别影响不大。

4 讨论

近红外光谱分析技术具有分析成本低、分析速度快、效率高等特点。光谱测量过程中也不消耗样品，样品测量一般不需要进行预处理，是典型的无损和绿色分析技术，近年该技术逐渐应用于药品的快筛，由附图1～4可见，正品在波数范围为9000～4200cm-1的近红外光谱图有明显的特征曲线，与假冒品在8000～6000cm-1有明显差异，结果为该品牌药品建立模型提供了可行性依据。实验中样品按法定标准扫描高效液相色谱图，发现正品在10.25和11.14min处有特征峰，进一步证明了该鉴别方法的可靠性。本文建立的定性模型,只适合江苏黄河药业股份有限公司生产的赖诺普利片。该方法容易收集正品样品，可快速建立模型，以针对市面上造假严重的品牌药品，使该模型覆盖其他厂家的赖诺普利片产品，还需定量收集全国各厂家有代表性的样品。建立该品种广泛的有效的模型。

附图5 一致性检验模型的检验结果

附图6 耐用性试验CI示意图