芹菜提取液的GC/MS分析及致敏性试验研究

阮柯凡

(越州中学，浙江 绍兴 312000)

芹菜提取液的GC/MS分析及致敏性试验研究

阮柯凡

(越州中学，浙江 绍兴 312000)

采用超声波提取方法提取芹菜的有效活性成分，利用气相色谱-质谱联用仪对提取样品进行化学成分分析；以豚鼠作为试验对象，用芹菜提取液对其皮肤进行致敏性试验，根据GB15670—1995得出芹菜提取液对豚鼠的皮肤变态反应强度属弱致敏物的结果.

超声波提取；芹菜；豚鼠；皮肤；致敏

芹菜营养十分丰富，芹菜的鲜、干品和种子均可入药，有健神经、促食欲、健胃、驱风、排毒和通经之功效.历代医学文献都有论述，认为芹菜有“甘凉清胃、利口齿、利咽喉、明目、养精益气、补血健脾、止咳利尿、降压镇静”等功效[1-2].我们发现，芹菜在生长过程中，几乎不受病与虫的侵害，一般不需要喷洒农药.于是，便有了从芹菜中提取有效活性成分研制绿色农药的设想.为此，我们对芹菜提取液作了生物活性和皮肤致敏性试验，以及经皮毒性试验和刺激试验等毒理学研究.本文用豚鼠作为试验动物，以芹菜提取液对其皮肤进行致敏性试验，并对芹菜提取液的成份用GC/MS进行分析，旨在为“芹菜源绿色农药”的进一步研究及推广应用提供实验数据.

1 实验部分

1.1芹菜提取液的提取与检测

采用超声波提取技术从芹菜中提取有效成分，超声波提取条件如下：室温(在提取过程中，水温上升10℃左右，该温度不会对超声波提取有机物的结果造成影响)；溶剂为丙酮和乙醇，体积比1∶1；时间为5 h/次[3-4].得“芹源素”原液

采用气相色谱-质谱联用仪 (6890N Network GC Systerm )检测“芹源素”的化学成分.气质联谱工作条件如下：色谱柱HP-5 ms,0.25 mm×30 m×0.25 μm；载气He；载气流量1 ml/min；进样温度220℃；分流进样，分流比为80∶1；柱温50℃(2 min)15℃/min,200℃(5 min)；进样量1 μL.EI离子源；离子源温度280℃[5].

1.2试验动物及饲养条件

健康豚鼠30只，雄性，由浙江省医学科学院实验动物中心提供(医动字第22-2001001号).豚鼠着地圈养，底层覆盖木屑及稻草，每天更换一次，以保持清洁和干燥.豚鼠以全价营养颗粒饲料喂养，每天给予一定量的干净蔬菜.豚鼠饲养室保持通风、干燥，室温控制在20℃左右.

1.3检验方法

将豚鼠分为受试组、阳性对照组、阴性对照组3个组别，每组10只.采用经皮肤染毒的方法进行检验.

1.3.1 致敏接触

实验前24 h，将受试组背部左侧去毛2 cm×2 cm，将配制浓度为400 mg/ml“芹源素”药液0.1 ml涂在2 cm×2 cm滤纸上，贴敷在剪毛区，用两层纱布，一层塑料膜覆盖，再以胶布固定，持续6 h.第7d和第14d以同样方法重复1次.

阳性对照组用2，4-二硝基氯代苯10 mg/ml的浓度0.1 ml以同样方法致敏接触3次.

阴性对照组不做致敏接触.

1.3.2 激发试验

实验前24 h，将受试组背部右侧去毛2 cm×2 cm，于末次致敏接触后14 d，将配制浓度为200 mg/ml“芹源素”药液0.1 ml先涂在2 cm×2 cm滤纸上，然后贴敷在动物剪毛区，覆盖方法同致敏接触，接触持续6 h，最后去掉斑贴及受检样品，每日观察染毒皮肤，记录观察结果至12 d.

阳性对照组以2，4-二硝基氯代苯5 mg/ml的浓度0.1 ml以同样方法做激发接触，并观察染毒皮肤，记录观察结果至第12 d.

阴性对照组以吐温80和蒸馏水0.1 ml ，采用同样方法做激发接触，观察染毒皮肤结果至第12 d.

1.4观察时间与观察指标

观察时间为接触致敏的整个发病过程，即包括致敏和激发两个过程.观察染毒皮肤是否出现红斑与水肿(不讨论程度轻重).

2 结果与讨论

2．1化学成分分析

在6890Network GC systerm中检测样品提取液，结果见图1，并利用NIST 2002 MS数据检索系统对其进行分析，可得芹菜的化学成分(匹配度均在60%以上)，见表1.

图1 芹菜超声波提取液的总离子流图

表1 芹菜的化学成分

续表1

2.2致敏性试验结果

“芹源素”对豚鼠皮肤致敏试验的数据见表2.

表2 “芹源素”对豚鼠皮肤致敏试验结果

按照GB15670—1995《农药登记毒理学试验方法》中的皮肤变态反应(致敏)试验结果评定标准，从表2的试验数据可以得出，阳性对照组在激发接触后，染毒皮肤出现程度不一的红斑、水肿，致敏率为100%.阴性对照组在激发接触后，染毒皮肤均未出现红斑、水肿，致敏率为0.“芹源素”试验组在激发接触后，染毒皮肤均未出现红斑、水肿，致敏率为0.

[1]孙斌,瞿伟菁,张晓玲.芹菜素的药理作用研究进展[J].中药材，2004,27(7)：531-534.

[2]金阳.“芹源素”对小菜蛾和小白菜蚜虫的药效试验[J].中国蔬菜，2008(4)：89-91

[3]何书美,刘敬兰.芹菜中黄酮类物质的提取和测定[J].分析试验室，2006,25(8)：84-87.

[4]许琦.芹菜总黄酮的提取及含量测定[J].食品科技，2006,31(7)：241-243.

Analysis of Celery Extract with GC-MS and Its Allergic Test

Ruan Kefan

(Yuezhou High School, Shaoxing, Zhejiang 312000)

Ultrasonic extraction was adopted to extract celery, whose chemical composition was analyzed by GC-MS. Skin sensitivity test of the celery extract was then carried out on the guinea pig. According to GB15670—1995 standard, it is concluded that celery extract is a weak skin allergic sensitizer on guinea pigs.

ultrasonic extraction; GC-MS; celery; guinea pig; skin; allergy

2014-08-10

阮柯凡(1996-)，男，浙江绍兴人.

TQ450.2+6;O657.63

A

1008-293X(2014)09-0041-03

(责任编辑邓颖)