褐藻寡糖对杏鲍菇菌丝体生长的影响

毕旺华 冯晓梅 李建杰 周鲁宁

摘要 [目的] 为了研究海洋活性物质褐藻寡糖对杏鲍菇的影响。[方法] 在培养基中加入不同浓度的褐藻寡糖，测定杏鲍菇固体平板培养菌丝体的生长速度、液体发酵菌丝体干重及发酵过程中纤维素酶活力。[结果] 褐藻寡糖浓度为0.001 mg/ml的试验组菌丝体生长速度、菌丝体生物量、纤维素酶活性较其他试验组差异极显著。[结论] 低浓度的褐藻寡糖对杏鲍菇生长具有明显的促进作用。

關键词 褐藻寡糖；杏鲍菇；菌丝体；纤维素酶

中图分类号 S646 文献标识码

A 文章编号 0517-6611（2014）31-10841-01

Influence of Algae Oligose on Growth of Pleurotus eryngii

BI Wanghua，FENG Xiaomei，LI Jianjie，ZHOU Luning*

（National Engineering Research Center for Marine Drugs， Qingdao， Shandong， 266000）

Abstract [Objective] The research aimed to study the influence of the marine active substances of algae oligose on Pleurotus eryngii. [Method] By adding different concentrations of alage oligosaccharides into medium， the growth rate of mycelium which grew on the solid plate culture of Pleurotus eryngii， dry weight of fermentation mycelium， and the cellulase activity in fermentation were measured. [Result] When the concentration of the algae oligosaccharide was 0.001 mg/ml， the growth rate of mycelium， the biomass of mycelium and the cellulase activity were more different than other group.[Conclusion]The effect of algae oligosaccharide with low concentration on the growth of Pleurotus eryngii was great.

Key word Brown alage oligosaeeharides； Pleurotus； Mycelium； Cellulase

杏鲍菇（Pleurotus eryng）学名刺芹侧耳，菌肉肥厚，质地脆嫩，其主要营养成分较齐全，蛋白质、纤维素、多糖及矿物质含量较高，脂肪含量低，有降血压、降血脂、预防肿瘤、增强肌体免疫力的功效。褐藻寡糖是海洋大型经济藻类海带细胞壁多糖褐藻酸钠提取降解得到的低分子寡糖，其分子结构是由βD甘露糖醛酸（ManA）和其C5差向异构体αL古洛糖醛酸（GulA）通过1-4糖苷键连接而成。褐藻寡糖分子量低，水溶性强，稳定性高，具有很多生物活性，如抗肿瘤^[1-2]、抑菌^[3]、抗逆性^[4]等。褐藻寡糖在食品、医药等领域有广阔的研究前景^[5]。笔者通过添加不同浓度的褐藻寡糖，检测相关指标，探讨褐藻寡糖对杏鲍菇菌丝体生长的影响^[6]。

1 材料与方法

1.1 试验材料 供试菌种为杏鲍菇，由章丘市食用菌研究所提供；供试褐藻寡糖由国家海洋药物工程技术研究中心制备提供。

PDA基础培养基组成为马铃薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 000 ml；

平板培养基组成为马铃薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，磷酸二氢钾2 g，硫酸镁1 g，琼脂20 g，水1 000 ml；

液体菌种活化培养基组成为：马铃薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，磷酸二氢钾2 g，硫酸镁1 g，水1 000 ml；

液体培养基组成为：马铃薯（去皮）50 g，葡萄糖10 g，磷酸氢二钾0.05 g，磷酸二氢钾0.3 g，硫酸镁0.3 g，玉米粉15 g，水1 000 ml。

1.2 试验方法

1.2.1 杏鲍菇固体菌丝体生长。将杏鲍菇菌种于PDA基础培养基25 ℃活化3～5 d，至菌丝体长满平板，取5 mm×5 mm大小的杏鲍菇菌块接种于菌丝体生长的平板培养基中，每组5个重复，25 ℃培养直至菌丝体生长到整个平板的2/3为止，每天记录1次，观察菌丝体生长情况。

1.2.2 杏鲍菇液体培养。将杏鲍菇菌种接种于液体活化培养基，在25 ℃恒温培养箱中120 r/min活化5 d后，按照5%的比例添加到试验组液体培养基中培养7 d，测定发酵液中菌丝体生物量、发酵液中纤维素酶活力。

1.2.3 纤维素酶活测定。

准确量取1 mg/ml葡萄糖标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml于25 ml试管中，并且加蒸馏水至1 ml，再加入3，5二硝基水杨酸显色液3 ml，摇匀后在沸水浴中加热显色 10 min，取出，冷却至室温，再加蒸馏水至25 ml，摇匀后在550 nm波长下测定其吸光值，以葡萄糖浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线^[7-8]。

将发酵液在3 000 r/min下离心1 min后，取离心后上清液1 ml，并用蒸馏水定容到100 ml容量瓶中，取定容后发酵液1 ml于试管中，对照取定容后发酵液1 ml后沸水浴加热5 min，然后均分别加入浓度0.5%羟甲基纤维素钠水溶液（CMC）3 ml，摇匀后在50 ℃水浴锅中加热30 min，取出后立即于沸水浴中加热10 min，使酶失活，冷卻后加入3，5二硝基水杨酸显色液3 ml，摇匀后在沸水浴中加热显色10 min，取出冷却至室温，再加蒸馏水至25 ml，摇匀后在550 nm波长下测定其吸光值。每个样品3个平行。

纤维素酶活力单位=（纤维素酶吸光值所对应的标准曲线的葡萄糖含量×稀释倍数）/（糖化所用时间×反应酶液体积）

2 结果与分析

2.1 不同浓度的褐藻寡糖对杏鲍菇菌丝体生长的影响

纤维素酶标准曲线见图1。由表1可知，不同浓度的褐藻寡糖对杏鲍菇菌丝体的生长均有促进作用；褐藻寡糖浓度为0.001 mg/ml时菌丝体生长最快，为0.56 cm/d，菌丝茂盛，与对照组差异在0.01水平显著，而添加量为0.100与0.010 mg/ml的褐藻寡糖的试验组对杏鲍菇的菌丝体有促进作用，但是彼此之间差异不显著。

2.2 不同浓度的褐藻寡糖对杏鲍菇液体发酵菌丝体生物量的影响

由表1可知，不同浓度的褐藻寡糖对杏鲍菇液体发酵菌丝体生物量的影响差异在0.05水平显著，其中添加量为0.001 mg/ml的试验组菌丝体生物量与对照组相比差异在0.01水平显著，菌丝体干重为9.1 g/L，添加量为0.100 mg/ml的试验组与对照组相比对菌丝体生长的有一定的抑制作用，菌丝体干重为4.8 g/L。

2.3 不同浓度的褐藻寡糖对杏鲍菇液体发酵纤维素酶活的影响

由表1可知，试验组与对照组之间存在0.01水平显著性差异，添加量为0.001 mg/ml的试验组褐藻寡糖对杏鲍菇产纤维素酶的促进作用最明显，纤维素酶活为36.42 U/ml，添加量为0.100 mg/ml的试验组相比空白对照组对杏鲍菇纤维素酶的分泌有一定的抑制作用，纤维素酶活只有11.93 U/ml，相对于空白对照组下降48.19%。由此可知，高浓度的褐藻寡糖对杏鲍菇产纤维素酶有一定的抑制作用，随着浓度的降低，对纤维素酶分泌的促进作用越明显。

3 结论与讨论

研究表明，褐藻寡糖对杏鲍菇菌丝体生长、液体发酵菌丝体生物量及发酵液中纤维素酶活在一定的浓度下具有促进作用，如平板培养浓度为0.001 mg/ml褐藻寡糖试验组杏鲍菇菌丝体生长速度最快，而0.100与0.010 mg/ml的试验组菌丝体生长速度无明显差异；在液体培养中添加0.001 mg/ml试验组液体发酵培养菌丝体生长最快，菌丝体生物量较其他试验组差异在0.01水平显著，为9.1 g/L，而0.100 mg/ml的试验组对液体发酵菌丝体的生长有一定的抑制作用，菌丝体干重为4.8 g/L；添加0.010 mg/ml的褐藻寡糖可明显提高杏鲍菇产纤维素酶的活性；添加0.001 g/ml的褐藻寡糖对杏鲍菇生长的各个性能指标均有明显的促进作用。由此可知，褐藻寡糖对杏鲍菇菌丝体生长速度、菌丝体生物量、纤维素酶活性具有促进作用，低浓度的试验组较高浓度的试验组的促进作用明显。目前，褐藻寡糖对杏鲍菇菌丝体作用机理尚在研究中，但褐藻寡糖在食药用菌的应用中具有较好的前景。

参考文献

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