甲基红褪色光度法测定琥乙红霉素

王晓玲，张 萍，陈 燕

(咸阳师范学院化学与化工学院，陕西咸阳 712000)

琥乙红霉素商品名利君沙，属大环内酯类抗生素，水溶性小，无味，在胃酸中稳定，在体内水解释放出红霉素(EES)而起抗菌的作用，临床广泛应用于扁桃体炎、上呼吸道感染、支原体肺炎、咽喉部炎症、中外耳炎、猩红热、皮肤软组织感染的治疗。目前报道的分析方法有荷移光度法［1-2］、HPLC［3-4］、分光光度法［5-6］、流动注射化学发光法［7］、毛细管电泳法［8］等，褪色光度分析法还未见报道。实验发现，在常温下，在水-乙醇介质中，琥乙红霉素能使甲基红显著褪色，据此建立了快速、灵敏、简便的测定药物中琥乙红霉素的分析方法。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

珀乙红霉素，对照品;甲基红、无水乙醇均为分析纯。

722型分光光度计。

1.2 溶剂配制

1.2.1 2 mg/mL琥乙红霉素标准液 在分析天平上准确称取化学对照品琥乙红霉素0.200 4 g，用无水乙醇溶解并定容到100 mL容量瓶内。

1.2.2 2.0 ×10－3mol/L 甲基红溶液 准确称取甲基红0.053 86 g于烧杯中，用无水乙醇使之完全溶解并用无水乙醇定容至100 mL。

1.3 实验方法

取2支刻度一致的25 mL具塞比色管，分别加入甲基红溶液0.4 mL，无水乙醇0.5 mL，向其中一支加入一定量的琥乙红霉素标准溶液，另一支不加，用蒸馏水稀释至10 mL，摇匀。以水为参比，用1 cm比色皿在分光光度计上，于520 nm处，测定吸光度值A。

2 结果与讨论

2.1 吸收光谱

测定不同波长下的吸光度A0和A，绘制吸收光谱图，见图1。

图1 吸收光谱图Fig.1 Absorption spectra

由图1可知，试剂空白曲线和褪色体系曲线的最大吸收波长均为520 nm，褪色体系曲线表明，琥乙红霉素的加入能使甲基红显著褪色。

2.2 试剂用量的选择

2.2.1 最佳介质条件 按实验方法，试验了 HCl、H2SO4、H3PO4、氨基乙酸-浓 HCl、KCl-HCl、邻苯-HCl、KH2PO4-NaOH(pH=7.2)、硼砂-NaOH(pH=9.94)、无水乙醇等不同介质溶液对反应体系的影响。结果表明在无水乙醇介质中褪色效果最好、最稳定。

2.2.2 无水乙醇的用量 随着无水乙醇的用量的改变，见图2，当无水乙醇用量在0.5 mL时，ΔA最大。故实验选用无水乙醇的用量为0.5 mL。

图2 无水乙醇的用量Fig.2 The amount of anhydrous ethanol

2.2.3 甲基红的用量 改变甲基红的用量，见图3。随着甲基红用量的增加，ΔA逐渐增大，当甲基红用量在0.4 mL时，ΔA值达到最大，此后，随着甲基红用量的增加，ΔA迅速降低，实验选择甲基红的最佳用量为0.4 mL。

图3 甲基红的用量Fig.3 The amount of methyl red

2.2.4 反应时间、温度和稳定性 实验发现，褪色反应瞬间完成，分别试验了不同温度下ΔA值的变化，发现在常温下ΔA最大且稳定，在20 min后ΔA发生变化。

2.2.5 工作曲线 分别取不同量的琥乙红霉素标准液，按照实验方法测定吸光度ΔA值，绘制工作曲线，见图4。其线性回归方程为 y=4.362 7x－0.189 5，相关系数为0.999 9，表观摩尔吸光系数为1.53 ×104L/(mol·cm)，琥乙红霉素的量在 150～600μg/10 mL范围内与ΔA呈良好的线性关系。

图4 工作曲线Fig.4 Working curve

2.2.6 干扰离子的影响 按实验方法对0.2 mg/mL盐酸氯丙嗪进行测定，当相对误差控制±5%时，考察了常见离子和药物赋形剂的干扰情况。结果表明，常见的物质:葡萄糖、乳糖、果糖、糊精和淀粉均不干扰测定。

2.3 样品分析

2.3.1 样品1 取琥乙红霉素片(125 mg/片)一片于50 mL的小烧杯中，用无水乙醇溶解，过滤，用无水乙醇定容至50 mL容量瓶中。每次取0.1 mL样品进行测定。

2.3.2 样品2 取琥乙红霉素胶囊(250 mg/粒)1粒，倾出内容物，加适量乙醇，使其溶解完全，过滤，滤液用乙醇定容至100 mL容量瓶中。每次取0.1 mL琥乙红霉素样品液进行测定。

表1 样品中琥乙红霉素的测定结果Table1 Analytical results enoxacin in samples

3 结论

本实验研究了在无水乙醇介质中，琥乙红霉素能使甲基红显著褪色，且褪色的程度和琥乙红霉素的量呈正比例关系，据此建立了琥乙红霉素光度分析法。实验最大吸收波长为520 nm，表观摩尔吸光系数为1.53 ×104L/(mol·cm)，琥乙红霉素的量在150～600μg/10 mL范围内服从朗伯-比尔定律，和同类方法相比较，该方法简便、快速、可靠、选择性高、重现性好，用于测定药物中琥乙红霉素的含量，结果满意。

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