玉郎伞提取物平喘镇咳作用的研究

曾 嵘，焦 杨，张士军，陈兆霓，黄仁彬*

0 引言

玉郎伞是一种尚未开发利用的民间草药，为蝶形花科植物疏叶崖豆Millettia pulchra Kurz var.laxior(Dunn)Z.Wei的块根，用于治疗高血压、跌打损伤、消化不良、病后虚弱等。研究表明，本品具有扩张血管、降低血压、增加冠脉流量、抑制心肌收缩力、抑制肠道平滑肌活动、保肝及抗自由基作用［1-3］。本课题组在前期预实验中发现，玉郎伞水提物有较好的平喘作用。本实验从玉郎伞中分离提取3种有效成份:黄酮、皂苷、多糖，以进一步探讨玉郎伞的平喘作用，并确定其平喘的活性成份。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 402AL型超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备有限公司)、磷酸组织胺(上海生化研究所)、氯化乙酰胆碱 (sigma公司)、地塞米松磷酸钠注射液(天津药业集团新郑股份有限公司)、浓氨水(白银化学试剂厂)，复方甘草片(青海制药有限公司)、玉郎伞水提物、黄酮、皂苷、多糖均由本实验室自制。

1.2 动物 豚鼠150～200 g，小鼠20～25 g，雌雄兼用，由本校动物实验中心提供。试验动物生产许可证:SCXK桂2003-0003，试验动物使用许可证:SYXK桂2003-0005。

1.3 方法

1.3.1 豚鼠整体引喘实验 按喷雾致喘法［4］选用豚鼠，置入20 cm×20 cm×150 cm的有机玻璃箱内，超声雾化喷入2%乙酰胆碱和0.2%磷酸组胺混合液15 s，进行筛选，引喘潜伏期超过120 s者不予选用。次日，豚鼠随机分成10组，每组10只，分别为空白组(生理盐水，10 mL/kg);阳性组(地塞米松，5 mg/kg);玉郎伞水提物、黄酮、皂苷、多糖(以上4种药物大剂量均为30 g生药/kg，小剂量均为15 g生药/kg)，灌胃给药1次。用药后1 h超声雾化喷入2%乙酰胆碱和0.2%磷酸组胺混合液15 s测定引喘潜伏期(即从喷雾开始到哮喘发作，呼吸困难，直至抽搐倒地的时间)。

1.3.2 对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响［5］取小鼠100只，随机分为空白组(生理盐水，10 mL/kg);阳性组(复方甘草片组，136 mg/kg);玉郎伞水提物、黄酮、皂苷、多糖(分设大剂量、小剂量组，剂量同上)。灌胃给药，每日1次，连续2 d，末次给药1 h后，将小鼠分别置于自制喷雾箱内，开动雾化器以18.7 kPa恒压使氨水呈雾状喷入箱内30 s，取出小鼠，置于清洁大烧杯内，观察记录咳嗽潜伏期(以小鼠腹肌收缩并张口吐舌作为咳嗽指标)和3 min内的咳嗽次数。

1.4 统计方法 采用SPSS 10.0统计软件进行数据处理，计量资料用±s表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 玉郎伞水提物及各成份对豚鼠引喘潜伏期的影响 实验结果如表1所示，除多糖低剂量组外，其余各组与空白组比较，豚鼠引喘潜伏期均有明显延长。说明玉郎伞水提物及从玉郎伞中提取的3种成份-黄酮、皂苷、多糖均能明显延长豚鼠的引喘潜伏期，并呈剂量依赖关系。其中YLS黄酮高剂量组的引喘潜伏期最长，平喘效果最好，作用强于地塞米松(5 mg/kg)组。

表1 玉郎伞水提物及各成份对豚鼠引喘潜伏期的影响( ±s，n=10)

表1 玉郎伞水提物及各成份对豚鼠引喘潜伏期的影响( ±s，n=10)

注:其中黄酮、皂苷、多糖高剂量相当于30 g生药/kg，低剂量相当于15 g生药/kg(下同)。与空白组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别 剂量 引喘潜伏期(s)空白组10 mL/kg 73.3±22.1地塞米松组 5 mg/kg 150.1±26.1＊＊水提物高剂量组 30 g生药/kg 128.7±27.8＊＊水提物低剂量组 15 g生药/kg 115.8±28.4*黄酮高剂量组 0.14 g/kg 153.3±17.2＊＊黄酮低剂量组 0.07 g/kg 122.2±21.7*皂苷高剂量组 2.7 g/kg 114.2±35.3*皂苷低剂量组 1.35 g/kg 108.1±33.9*多糖高剂量组 25 g/kg 99.3±33.0*多糖低剂量组12.5 g/kg 89.3±25.3

2.2 玉郎伞水提物及各成份对小鼠咳嗽潜伏期的影响 实验结果如表2所示，除多糖低剂量组外，其余各组与空白组比较，小鼠咳嗽潜伏期均有明显延长且咳嗽次数减少。说明玉郎伞水提物及从玉郎伞中提取的3种成份-黄酮、皂苷、多糖均能显著减少氨水致小鼠的咳嗽次数，延长咳嗽潜伏期，呈剂量依赖关系。其中YLS黄酮高剂量组的咳嗽潜伏期最长，镇咳效果最好，作用强于复方甘草片组。

表2 玉郎伞水提物及各成份对小鼠咳嗽潜伏期的影响( ±s，n=10)

表2 玉郎伞水提物及各成份对小鼠咳嗽潜伏期的影响( ±s，n=10)

注:与空白组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别 剂量 咳嗽潜伏期(s)3 min内咳嗽次数(次/3 min)空白组10 mL/kg 47.2±17.1 10.5±3.0复方甘草片组 136 mg/kg 102.1±35.1＊＊ 4.5±2.0＊＊水提物高剂量组 30 g生药/kg 98.7±27.8＊＊ 4.9±2.3＊＊水提物低剂量组 15 g生药/kg 85.8±28.4* 6.8±2.6*黄酮高剂量组 0.14 g/kg 110.3±37.2＊＊ 3.5±1.5＊＊黄酮低剂量组 0.07 g/kg 95.2±31.7* 6.3±2.6*皂苷高剂量组 2.7 g/kg 94.2±35.3* 6.6±2.8*皂苷低剂量组 1.35 g/kg 80.1±33.9* 6.9±2.9*多糖高剂量组 25 g/kg 67.3±33.0* 7.3±2.6*多糖低剂量组12.5 g/kg 55.2±25.3 9.3±3.0

3 讨论

支气管哮喘(哮喘)是由多种细胞包括气道的炎症细胞和结构细胞(如嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病，这种慢性炎症导致气道高反应性［6-8］。通常表现广泛多变的可逆性气道受限、并引起反复发作性喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状。支气管哮喘病情反复发作导致气道平滑肌收缩、粘液分泌过多、血管渗漏引起黏膜水肿和神经活性增加等病理变化，最终引起气道重塑［9-10］。在上述病情演变过程中，嗜酸性粒细胞浸润是其基本特征，EOS的浸润程度始终与气道重塑、肺功能的衰退及威胁生命发作性哮喘的严重程度有关［11］。目前治疗哮喘常用药物有肾上腺素受体激动药、茶碱、M胆碱受体阻断药、肾上腺皮质激素、肥大细胞膜稳定药等，在哮喘的药物治疗中，糖皮质激素、β2受体激动剂等是主要的治疗药物，但因有剂量相关的副作用，不宜长期使用［12-14］。中草药因其多成份、多靶点及重视整体调理，且副作用相对较小，越来越受到医学专家的重视。

本课题组在前期预实验中发现，玉郎伞水提物有较好的平喘作用。为了进一步探讨玉郎伞提取物的平喘镇咳作用，为临床疾病的治疗提供指导，笔者采用豚鼠喷雾致喘法、小鼠氨水引咳法，观察玉郎伞水提物及3种成份对豚鼠引喘潜伏期、小鼠咳嗽潜伏期的影响。在本实验中，观察到除了YLS多糖低剂量组外，其余各组药物均可明显延长豚鼠的引喘潜伏期、减少氨水致小鼠的咳嗽次数并延长咳嗽潜伏期，说明YLS水提物以及从YLS中提取的3种活性成份-黄酮、皂苷、多糖有较好的平喘镇咳作用。本实验组将在后期进一步对YLS水提物、黄酮、皂苷、多糖治疗支气管哮喘的药效学及作用机制做进一步研究。

［1］简洁，刘曦，黄仁彬，等.玉郎伞两种黄酮单体对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用［J］.中国药理学通报，2009，25(7):942-945.

［2］郭又嘉，文坎，张仕军，等.玉郎伞皂苷对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响［J］.中国药理学通报，2012，28(4):554-558.

［3］蔡文娥，张绪东，黄仁彬，等.玉郎伞多糖对小鼠免疫功能的调节作用［J］.时珍国医国药，2011，22(7):1681-1683.

［4］陈奇.中药药理研究方法学［M］.第3版.北京:人民卫生出版社，2011:324，639.

［5］徐叔云，卞如廉.药理实验方法学［M］.第2版.北京:人民卫生出版社，1991:722.

［6］张晓萍，邵润霞，赵铭琴.支气管激发试验诊断支气管哮喘的漏诊率分析［J］.实用医学杂志，2013，29(18):3039-3040.

［7］中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南(支气管哮喘的定义、诊断、治疗管理方案)［J］.中华结核和呼吸杂志，2008，31(3):177-185

［8］李中燕，王宋平.气道上皮细胞在支气管哮喘发病机制中的研究进展［J］.实用医学杂志，2012，28(20):3485-3487.

［9］Moore WC，Meyers DA，Wenzel SE，et al.Identification of asthma phenotypes using cluster analysis in the Severe Asthma Research Program［J］.Am J Respir Crit Care Med，2010，181(4):315-323.

［10］赵立宇，徐贵华，陈春凤.辛芩雾化剂对支气管哮喘患者肺功能及其生命质量的影响［J］.中国医药，2013，8(7):931-933.

［11］Fabbri LM，Romagnoli M，Corbctta L，et al.Differences in airway inflammation in patients with fixed airflow obstruction due to asthma or chronic obstructive pulmonary disease［J］.Am J Respir Crit Care Med，2003，167(3):418-424.

［12］Nelson HS，Carr W，Nathan R，et al.Update on the safety of long-acting beta-agonists in combination with inhaled corticosteroids for the treatment of asthma.Ann Allergy［J］.Asthma Immunol，2009，102(1):11.

［13］丁娟娟，时军.吸人糖皮质激素联合茶碱与联合长效β2受体激动剂治疗哮喘的临床对照研究［J］.实用医学杂志，2012，28(18):3124-3125.

［14］郝璐，崔丽英.阿奇霉素联合布地奈德福莫特罗在支气管哮喘治疗中的治疗［J］.中国医药，2013，8(9):1231-1233.