不育症患者体内酞酸酯类的测定及意义探讨

于 扬，耿可亭，孙 玲，屠丽回，赵明光，李 蓓，全吴敏

1.广州市妇女儿童医疗中心(广东广州510623)

2.广州市人口和计划生育科学研究所(广东 广州510600)

酞酸酯类化合物(Phthalatic acid esters，PAEs)为芳香话二羧ss酸酯，广泛应用于食品包装、容器、医疗用品、香味剂、化妆品等领域，由于并未以化学键与塑料结合，这些酞酸酯类增塑剂会向外渗出，成为环境污染物［1］。各种动物试验表明，其生殖毒性和生育毒性对雄性生殖系统与生育力有一定的损害作用。而这并未引起人们足够的重视［2］。本次研究选择2012年10月－2013年10月来我院就诊的100例男性不育患者和100例健康男性为观察对象，测定血清和精液中酞酸二酯、酞酸二丁酯及酞酸二辛酯的含量，分析其与男性精液质量的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2012年10月－2013年10月来我院就诊的100例男性不育患者为观察组，年龄22～56岁，平均年龄(39.2±4.2)岁，体质量56～78 kg，平均体质量(65.4±4.3)kg;同时选择100例健康体检为对照组，年龄23～58岁，平均年龄(38.4±3.8)岁，体质量55～68 kg，平均体质量(64.7±5.3)kg，两组年龄、体质量等一般资料比较差异无显著性(P＜0.05)。

1.2 纳入标准 观察组不育男性:婚后性生活正常，性生活中未采取任何避孕措施，结婚3年后妻子仍未怀孕;对照组已育男性:婚后2年内妻子已经怀孕或足月待产或已经分娩。

1.3 测定方法

1.3.1 测定仪器 GLAMOUR1800全自动生化仪;HP5890GC－HP5972MS气相色谱－质谱联用仪;高纯度氦气;721分光光度计;TGL－16G高速冷冻离心机;R－205旋转蒸发仪;DHG鼓风干燥箱TJ－360超声波发生器。分析纯级别的正己烷、酞酸二酯(DEHP)、酞酸二丁酯(DBP)、DOP经蒸馏纯化;以正己烷为溶剂配制1 g/L的DEHP、DBP、DOP标准储备液。超声波清洗后，依次用自来水、蒸馏水冲洗，再放100℃烘箱中烘干［3］。

1.3.2 样本选取 GC－MS用样品前处理步骤:①取300 μL血清样本;②加入1 mL正己烷;③在旋涡震荡器上剧烈震荡3～5 min;④以10000 rpm，4℃离心8 min;⑤取离心液上层(正己烷溶剂层)⑥ 重复②至⑤总计3次，合并3次所得的正己烷溶剂层，以旋转蒸发仪浓缩至2 mL，转入气象色谱专用样品管［4］。

样品GC－MS参数设定方法为:氦气流量为0.8 mL/min［5］;色谱柱为 HP－5 MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);进样方式为自动、不分流;进样量为5 μL;进样口温度为280℃;检测器温度为300℃;柱温程序为初温150℃，2 min后以15℃/min升温至300℃，保持4 min;离子化方式为EI;离子化能量为70 eV;离子化电流为300 μA。

1.4 方法及观察指标 精液参数以及生化指标:采用计算机电脑行精液分析，对精液中果糖、肉毒硷等进行检测，采用气－质联用法搭配SIM对精液中的三种酞酸酯进行定量，计算其浓度，分析酞酸酯在精液中的分布情况。

测定血清中 DBP、DOP、DEHP的浓度:采用气－质联用法搭配SIM对样品中的三种酞酸酯进行定量，计算其浓度，记录阳性数量，分析酞酸酯在血清样品中的分布情况。再测定各研究对象血液生化指标:肝功能(GPT、GOT)采用全自动生化仪进行检测［5］;脂质过氧化指标(SOD、MDA、GSH －Px)则采用专用试剂盒以及分光光度计测定。

1.5 数据分析 采用 SPSS13.0统计软件，DBP、DEHP含量等计量资料用(±)表示，检出率用［n(%)］表示，分别进行 t检验和卡方检验，以 P＜0.05表示差异有显著性。

2 结果

2.1 精液与血清中BDP、DEHP含量比较 观察组精液及血清中BDP、DEHP含量均明显高于对照组(P＜0.01)，见表1。

表1 两组精液与血清中BDP、DEHP含量比较(mg/L)(±s)

表1 两组精液与血清中BDP、DEHP含量比较(mg/L)(±s)

DEHP观察组组别 精液DBP 精液DEHP 血清DBP 血清0.09±0.020.13 ±0.040.12 ±0.05 0.38 ±0.04对照组 0.03±0.010.04 ±0.010.04 ±0.01 0.12 ±0.03 t 26.833 21.838 15.689 52 P ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.2 精液与血清中BDP、DEHP检出率比较 观察组精液与血清中BDP、DEHP检出率均显著高于对照组(P＜0.01)，见表2。

表2 两组精液与血清中DBP、DEHP检出率比较［n=100，(%)］

3 讨论

一次性塑料制品的广泛使用，使得增塑剂接触食品的机会增多。由于塑料制品中的PAEs可以不断释出，造成对环境、生物以及食品的潜在危害。食物中的酞酸酯类通过摄食途径进入人体，从而在人体内蓄积，对人体的生长发育造成危害［6］。大量动物试验研究表明，DBP、DEHP对生物体有拟雌激素作用与慢性毒性危害，主要表现为生殖毒性，可导致睾丸体重降低、结构变化、精子密度与活力下降，而且与PAEs剂量呈相关性［7］。Carlsen报道近年来男性生育能力逐渐降低，精液数量也在不断减少。作为环境内分泌干扰物的一类，酞酸酯类由于未以化学键结合，随着时间的推移，酞酸酯类会逐渐从塑料中释放出来，进入环境和生物体内［8］。

本组结果表明，观察组血清和精液中的DEHP和DBP的检出率及含量水平均高于对照组，说明该疾病人群体内酞酸酯类暴露水平高于正常人，提示PAEs可能是导致男性不育的原因之一，应当引起高度重视，避免或减少接触此类化合物，以降低对人体产生的潜在危害，并对其在疾病发展中所发挥的作用做更进一步的探究［9］。

进一步研究发现，两组人群血清、精液中DEHP含量水平均高于DBP，导致这一结果的原因可能与酞酸酯在生产和生活中的产量和使用量有关。在我国，DEHP是最常用的酞酸酯类增塑剂，约占酞酸酯总量的50%，生产量和使用量均超过DBP，故人群DEHP暴露水平要高于DBP［10］。此外，结果还显示血清中酞酸酯含量高于精液，这可能与酞酸酯代谢特性有关。动物实验资料表明，大部分的酞酸酯在体内会迅速代谢成稳定的单体(MBP、ME肿)，与葡糖苷酸结合48h后随尿排出，因此较少会蓄积于体内组织器官中，故精液中酞酸酯含量理论上应低于血清中，与本次测定结果相符。

综上所述，男性不育患者精液与血清中DBP、DEHP含量与检出率均明显高于健康人群，应加强环境中酞酸酯类化合物的监控与干预，以降低其对人群的危害。

［1］ Andrade AJ，Grande SW，Talsness CE，et al.A doseresponse study following in utero and lactational exposure to di－(2－ethylhexyl)－phthalate(DEHP):nonmonotonic dose－response and low dose effects on rat brain aromatase activity［J］.Toxicology，2006，227(3):185－92.

［2］ Cobellis L，Latini G，De Felice C，et al.High plasma concentrations of di－(2－ethylhexyl)phthalate in women with endometriosis［J］.Hum Reprod，2003，18(7):1512－1515.

［3］ 陈建明.实用不孕不育诊断与治疗［M］.广州:广东科技出版社，2013:88.

［4］ 牛焕村.人类生殖与不孕不育［M］.济南:山东大学出版社，2010:51－52.

［5］ 水利部.气相色谱法测定水中酞酸酯类化合物［M］.北京:中国水利水电出版社，2012:8－10.

［6］ Silva MJ，Barr DB，Reidy JA，et al.Urinary levels of seven phthalate metabolites in the U.S.population from the NationalHealth and Nutrition Examination Survey(NHANES)1999 －2000［J］.Environ Health Perspect，2004，112(3):33338.

［7］ 万曙光，杨科峰，赵文红，等.酞酸脂类增塑剂对果蝇寿命的影响［J］.毒理学杂志，2006，20(1):40－41.

［8］ 王炜，魏光辉，邓永继.环境内分泌干扰因子DEHP与隐睾发病相关性的实验研究［J］.中华小儿外科杂志，2004，25(6):550－554.

［9］ 厉曙光.酸酯类对果蝇的毒反应［D］.上海:复旦大学，2006:8－10.

［10］ 陈科，厉曙光，张志强.420名大学生血清酞酸酯水平及其与性激素的关系研究［J］.环境与职业医学，2009(3):222－223.