肥胖对大鼠前列腺炎性反应的影响及其相关机制＊

刘世学，李 可，谢 斌，张厚彬

（重庆市巴南区人民医院泌尿外科 401320）

慢性前列腺炎（chronic prostatitis，CP）是泌尿外科男性的常见疾病，50岁以下青壮年男性患病率较高。泌尿外科门诊中前列腺炎患者约占8%～25%，男性一生中曾经出现过CP症状者约占50%［1－2］。CP严重影响患者的生活质量，但发病机制、病理生理改变尚不十分清楚。肥胖是指体内脂肪组织过量储存，脂肪细胞增多和（或）增大的一种状态。国内外的研究表明，肥胖患者体内炎症因子水平高于健康人群，肥胖与慢性炎症反应和慢性疾病密切相关［3－5］。流行病学研究发现，高热量饮食及肥胖可能是CP的一个危险因素之一［6］。但目前肥胖与CP的关系尚不明确，因此本文采用动物实验来探讨肥胖与CP的关系及其相关机制。

1 材料与方法

1.1 材料 选用健康成年雄性SD大鼠60只，8周龄，体质量200～250g。普通饲料：能量10%由脂肪提供；高脂饲料：能量45%由脂肪提供（中国上海斯莱克实验动物有限责任公司）。Trizol（美国Invitrogen公司），RNA反转录试剂盒（宝生物工程大连有限公司），SYBR Green（美国Bio－Rad公司）。白细胞介素（IL）－6和IL－8酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（美国Cusabio公司）。CFX 96TM PCR仪（美国Bio－Rad公司），奥林巴斯BX51显微镜（日本奥林巴斯公司）。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的建立 清洁级雄性SD大鼠饲养于重庆医科大学动物实验中心。保持饲养条件为温度（25±1）°C，湿度60%±5%，照明12h。实验分为3组：普通饲料组（15只）、高脂饲料组（30只）、阳性对照组（15只）。阳性对照组喂养普通饲料，从第6周开始给予皮下注射苯甲酸雌二醇0.2mg／kg，每日注射1次，连续注射4周［7］。各组大鼠每周记录其体质量，共喂养10周。

1.2.2 前列腺液分析 动物处死后取前列腺组织挤出前列腺液，吸取10μL进行白细胞计数。另取1滴涂片镜检卵磷脂小体密度。并对其分级：满视野为4级，3／4视野为3级，2／4视野为2级，1／4视野为1级［8］。

1.2.3 ELISA检测炎症因子水平 各组大鼠取前列腺液后采用IL－6、IL－8ELISA试剂盒进行检测。根据试剂盒说明书步骤，在酶标包被板上将标准品及各组前列腺稀释液上样，每孔体积50μL。在37℃孵育2h，洗涤后各孔加入酶标抗体37℃中孵育1h；洗涤后各孔加入生物素抗体37℃孵育1h；加显色液37℃孵育20min；终止液终止反应，采用酶标仪A450nm测定各孔吸光值。

1.2.4 实时定量－聚合酶链反应（RT－PCR）检测mRNA表达水平 3组大鼠处死后，取前列腺组织，浸泡于RNA保护液。提取细胞总mRNA，反转录试剂盒转为cDNA。用RT－PCR法检测IL－6和IL－8的mRNA表达水平。IL－6上游序列为：5′－CCA CGG CCT TCC CTA CTT C－3′；下游序列为：5′－TTG GGA GTG GTA TCC TCT GTG A－3′。IL－8上游序列为：5′－CCT GCT GGC TGT CCT TAA CC－3′；下游序列为：5′－GAC ATC GTA GCT CTT GAG TGT CAC A－3′。采用 RT－PCR分析软件Bio－Rad CFX manager分析结果。

1.3 统计学处理 采用GraphPad Prism5统计软件进行分析作图。计量资料以s表示，结果采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 动物模型的建立 各组大鼠喂养饲料5周之后，高脂饲料组体质量开始明显高于普通饲料组，差异有统计学意义（P＜0.05），见图1。

图1 各组大鼠从喂养第1～10周的体质量变化

2.2 前列腺液分析 与普通饲料组相比，高脂饲料组和阳性对照组前列腺液中的白细胞数显著增多，卵磷脂小体密度显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 各组大鼠前列腺液中卵磷脂小体密度和白细胞计数±s）

表1 各组大鼠前列腺液中卵磷脂小体密度和白细胞计数±s）

分组 n 白细胞数（106 L－1） 卵磷脂小体密度（分级）15 3.54±0.65 3.65±0.49高脂饲料组 30 5.47±0.54 2.40±0.50阳性对照组普通饲料组15 6.44±0.82 2.15±0.67

2.3 炎症因子分泌 与普通饲料组相比，高脂饲料组和阳性对照组前列腺液中的IL－6和IL－8释放水平明显著增多，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 各组大鼠前列腺液中IL－6和IL－8的释放水平（ng／mL±s）

表2 各组大鼠前列腺液中IL－6和IL－8的释放水平（ng／mL±s）

分组 n IL－6释放水平 IL－8释放水平普通饲料组15 0.18±0.08 2.42±0.35高脂饲料组 30 0.35±0.12 4.66±1.74阳性对照组15 0.41±0.18 5.84±1.98

2.4 各组大鼠前列腺IL－6和IL－8的mRNA表达水平 与普通饲料组相比，高脂饲料组和阳性对照组前列腺组织IL－6和IL－8的 mRNA表达明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 各组大鼠前列腺IL－6和IL－8的mRNA表达水平±s）

表3 各组大鼠前列腺IL－6和IL－8的mRNA表达水平±s）

分组 n IL－6相对表达水平 IL－8相对表达水平普通饲料组15 1.00±0.00 1.00±0.00高脂饲料组 30 2.46±0.55 1.97±0.48阳性对照组15 3.13±0.98 2.36±0.76

3 讨 论

CP是一种十分常见的疾病，常表现为尿频、尿急、尿痛、排尿不尽、排尿困难等排尿异常，会阴部、下腹部等部位不适或疼痛。其发病机制、病因、发病机理尚不明确。有研究表明免疫反应参与了CP的发生、发展。

近年来的研究表明，前列腺被认为是一种免疫源性器官，如果其受到外源性致病因子的刺激，就会有相关细胞因子与炎性反应［9］。其中，活化的巨噬细胞产生前炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）、IL－1和趋化细胞因子IL－8，IL－8对中性粒细胞有趋化作用［10］。T细胞原性的细胞因子如IL－6作用为减弱炎性反应。IL－6下调IL－1和TNF等前炎症因子合成，促进糖皮质激素和可溶性TNF受体释放，此外IL－6还抑制GM－CSF、IFN－C和 MIP－2等前炎症因子的产生［10－11］。

国内外研究已经证明，肥胖是由不同炎症因子诱导产生的一种全身性的慢性低度炎性反应，肥胖患者的血液中的炎症标志物IL－6、TNF－α等都明显高于普通人群［12］。肥胖与代谢综合征等慢性疾病密切相关，最近流行病学研究发现高脂饮食和肥胖可能对CP的发生、发展有不利影响［6］。本研究表明，高脂饲料诱发的肥胖大鼠其前列腺液中卵磷脂小体密度和白细胞数量分别低于和高于普通饲料组，差异有统计学意义（P＜0.05），提示肥胖与CP的发病具有一定的联系。在进一步的实验中，肥胖大鼠的前列腺液中炎症因子IL－6和IL－8的分泌和基因表达都明显高于普通饲料组，提示肥胖大鼠对增加前列腺组织的炎症因子释放有明显的影响。国内外文献报道，肥胖介导的炎性反应涉及IκB／NF－κB信号通路和JNK通路［13］，在今后的研究中有待进一步探讨。

综上所述，肥胖介导的慢性炎性反应在CP的发生、发展中可能起了重要作用，可能是男性发生CP的一个高风险因素。因此，努力改善自身代谢状况、加强健康监测、控制肥胖，对于预防CP具有重要意义。

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