TGF－β1、Smad2、CyclinD1在胃癌中的表达及其临床意义

李 建，李春辉，秦博文，吕瑞芳

（1.承德护理职业学院护理系，河北承德 067000；2.承德医学院附属医院病理科，河北承德 067000）

我国胃癌的发病率位居所有恶性肿瘤的第2位，研究提示细胞周期调控在肿瘤发生、发展中发挥重要作用，因此，探讨胃癌细胞周期调控的作用机制对临床胃癌的诊治与预防具有重要意义。目前有关TGF－β1、Smad2、CyclinD1三者在胃癌中表达的研究较少，本研究通过免疫组织化学的方法检测胃癌组织中TGF－β1、Smad2、CyclinD1蛋白的表达状况，探讨三者与胃癌临床病理指标间的关系，为后续研究胃癌的发病机制提供一定的理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集承德医学院附属医院2007年1月至2012年1月腔镜活检正常胃黏膜20例为对照组，手术切除胃癌标本60例为试验组。

1.2 方法

1.2.1 标本处理 标本切除后均立即浸入10%中性甲醛固定液中，取大小2cm×2cm、厚3mm的组织块，经常规石蜡包埋切片，切片厚4μm。放至70℃热水中展平，再捞至载玻片的一端，置80℃恒温箱中烘干。

1.2.2 脱蜡染色，切片置于85%乙醇20s、90%乙醇30s、95%乙醇Ⅰ中1min、95%乙醇Ⅱ中1min、无水乙醇Ⅰ中2 min、无水乙醇Ⅱ中2min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各1min，封固。

1.2.3 免疫组化结果判定 在光学显微镜下观察正常胃黏膜及胃癌标本的免疫组化染色结果、定位及初步分析判断。应用CMIAS真彩色医学图像分析系统，随机选择5个高倍（×400）视野，分别对5个不同视野中的各组免疫组化结果进行积分光密度（IOD）测定，然后计算平均IOD值。

1.3 统计学处理 采用SPSS11.5统计学软件进行统计学处理。计量资料用x±s表示。两组间均数比较用t检验，多组间均数的比较用方差分析。并将各因子IOD进行相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

TGF－β1蛋白在试验组和对照组中表达的IOD分别为12.25±5.12和8.13±2.01，差异有统计学意义（P＜0.05）；Smad2蛋白表达的IOD分别为6.42±2.13和13.31±3.25，差异有统计学意义（P＜0.05）；CyclinD1蛋白表达的IOD分别为16.02±4.32、9.45±2.29，差异有统计学意义（P＜0.05）。

TGF－β1、Smad2、CyclinD1 蛋白表达与年龄、性别无关（P＞0.05）；在分化程度、有无淋巴转移、TNM分期中差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 TGF－β1、Smad2和CyclinD1蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

表1 TGF－β1、Smad2和CyclinD1蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

项目 n clinD1年龄（岁）IOD TGF－β1 Smad2 Cy≥60 28 16.41±4.20 15.51±1.37 14.41±3.10＜60 32 17.14±3.27 13.21±1.83 14.01±4.35

续表1 TGF－β1、Smad2和CyclinD1蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系s）

续表1 TGF－β1、Smad2和CyclinD1蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系s）

项目 n IOD TGF－β1 Smad2 CyclinD1 37 17.26±4.23 16.02±3.41 15.34±3.32女23 18.24±2.83 15.65±3.21 14.51±2.11分化程度高中分化 28 10.62±2.35 16.12±2.32 13.41±1.81低分化 32 13.24±3.81 12.52±1.57 15.17±2.36淋巴结转移无27 10.34±6.53 16.52±2.13 13.32±3.54有33 14.51±2.34 9.35±2.24 17.52±3.42 TNM分期Ⅰ＋Ⅱ 29 16.01±5.33 19.23±4.12 16.10±3.01Ⅲ＋Ⅳ性别男31 22.24±4.42 13.13±3.07 22.21±3.24

3 讨 论

TGF－β1对正常细胞及早期的肿瘤转化细胞通过调控细胞周期抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等来调控对它们的抑制作用，而在进展期肿瘤的过程中则促进细胞增殖进而促进肿瘤的侵袭、转移等［1］。TGF－β是一种重要的细胞因子，具有抑制细胞分裂和增殖的作用。有研究表明，肿瘤的发生和恶性细胞对TGF－β产生抵抗作用关系密切，当TGF－β信号通路改变，其对靶细胞失去效应，甚至可促进肿瘤的演进［2－3］。本实验结果显示TGF－β1在正常胃黏膜中正常表达或弱表达，在胃癌中表达上调，且随着胃肿瘤细胞分化降低、淋巴结转移、TNM分期增高而表达加强，但是与患者的年龄以及性别无关，该结果与Naef等［4］的报道基本一致。

在肿瘤细胞中，大多数的错义突变位于MH2结构域内，Smad2通过错义突变、移码突变等基因位点的改变导致失活，肿瘤的错义突变使得Smads蛋白关键位点上的氨基酸发生互换，这样一些同源或异源复合物形成必然受阻，而R2Smads依赖受体的磷酸化作用发生障碍，或形成不稳定的Smads蛋白［5］。本实验结果发现Smad2蛋白在正常胃黏膜中IOD很高，在肿瘤发展的过程中，临床病理特征上表现为低分化者Smad2蛋白的IOD值偏小，而高中分化者Smad2蛋白的IOD值比低分化者高很多，二者差异有统计学意义。同样，在有淋巴结转移者中，Smad2蛋白的IOD值低于无淋巴结转移者，TNM分期Ⅲ＋Ⅳ期的Smad2蛋白的IOD值低于TNM分期Ⅰ＋Ⅱ期。从以上结果中不难看出随着胃癌的进展、恶化，Smad2的表达呈现下降的趋势，该结果与上述的研究结论基本一致。

CyclinDl基因是一种非显性致癌基因，许多学者认为，在细胞生长周期进程中，CyclinD1的水平受生长因子等许多因素的调控，呈周期性变化［6］。在 G1期CyclinD1与CDK4或CDK6结合形成复合物，随后通过N末端的LECXE基序与视网膜母细胞瘤（Rb）编码蛋白pRb结合，使pRb的Ser和Tyr残基发生磷酸化，转录因子E2F被释放进而活化后，细胞周期就会由G1期进入S期，细胞增殖旺盛，如果CyclinD1表达失控，细胞增殖周期将会失调，从而导致肿瘤发生［7－8］。目前对胃癌的发生、发展与CyclinDl关系的研究并不明确，CyclinDl表达异常引起的细胞周期失控是细胞异常增殖和癌变的原因，可能是胃癌发生的早期分子事件［9］。Stelow等［10］发现胃癌中CyclinDl的表达率与患者的性别、年龄及胃癌临床病理学指标如分化程度、淋巴结转移、浸润深度、分期及肿瘤大小均无相关性，认为CyclinDl在早期胃癌中的表达起到重要的作用，可以作为一个潜在的早期肿瘤标记，对肿瘤预后的判断无关。本研究发现，CyclinD1在胃癌中的表达明显高于正常胃黏膜，低分化胃癌的表达高于高中分化胃癌，而且在分化程度越低的癌肿表达率越高，该研究结果同样支持CyclinD1与胃癌的分化程度、侵及深度及淋巴结转移密切相关。

本实验为探讨胃癌的发病机制的研究提供了新的思路，为TGF－β1、Smad2、CyclinD1成为靶向药物作用的潜在靶点提供一定的实验数据。

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