HPLC法测定维药罗补甫克比日丸中高良姜素的含量

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新疆维吾尔自治区喀什地区药品检验所，新疆 喀什 844000

HPLC法测定维药罗补甫克比日丸中高良姜素的含量

司马义江·阿布都热西提阿依努尔·阿木提

新疆维吾尔自治区喀什地区药品检验所，新疆 喀什 844000

目的：高效液相色谱法测定罗补甫克比日丸中高良姜素的含量。方法：甲醇-0.2%磷酸溶液(65∶35)；流速lml/min；检测波长266nm；柱温：25℃；进样量：l0μl；分析方法：外标法。结果：高良姜素在0.19～9.76μg范围内线性良好(r=1.0)，方法精密度RSD为0.7%(n=5)，平均回收率为98.65%，RSD为1.6%(n=6)。结论：该方法简便、准确，测得结果稳定性、重现性好，可作为该制剂中高良姜素的含量测定方法。

HPLC；高良姜素；罗补甫克比日丸；含量测定

〗罗补甫克比日丸是新疆维吾尔族名药之一，具有温补脑肾、益心填精的功效，主要用于阳痿、抑郁、早泄、滑精、体虚、消瘦、神经衰弱。配方主要由牛鞭、肉桂、苜蓿子、洋葱子、丁香、花椒、胡萝卜子、甜瓜子、巴丹仁、韭菜子等30味药材组成，属部颁标准维吾尔药分册收录品种[1]。多味药材组成制剂的药理作用，来自于每一味药材药理作用的互相协调的综合结果。考查多味药材组成的药物制剂质量的时候应考虑每一味组分的质量。研究测定高良姜素的含量测定方法可以为该制剂的质量控制提供依据。

1 仪器和试药

1.1 仪器 岛津高效液相色谱系统：包括LC20AT型双泵，SIL20AC型自动进样器，SPDM 20A型PDA检测器； BP211D型分析天平(德国Sartorius公司)。

1.2 试药 高良姜素对照品(批号：111699-200602)由中国食品药品检定院提供；罗补甫克比日丸(批号：20130830、20130836、20120419)由和田维吾尔药业有限责任公司生产;甲醇为色谱纯(美国TEDIA试剂公司)；水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：岛津VP-ODS(250×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(65∶35)；流速lml/min；检测波长266nm；柱温：25℃；进样量：l0μl；分析方法：外标法[2]。

2.2 系统适应性试验 按照对照品溶液制备方法及供试品溶液配制方法配分别制成对照品溶液及供试品溶液，按预定的色谱条件，分别进样10μl，采集光谱数据。结果显示，供试品溶液与对照品溶液的色谱峰一致。保留时间为10.3min。

2.3 对照品溶液的配制 精密称取高良姜素对照品，加甲醇溶解，摇匀并稀释制成97.60μg/ml的对照品溶液储备液。

2.4 供试品溶液的配制 取样品(批号：20130830、20130836、20120419)50粒，研碎，称取1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液即得。

2.5 线性关系考察 精密量取对照品储备液(97.6μg/ml)0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别取10μl，按“2.1”色谱条件下操作，以8次测定的峰面积平均值考察线性范围。线性方程为：A=4.68×106C-3.49×104(r=1.0)，结果表明，高良姜素在0.1952～9.760μg/ml范围内线性关系良好。

2.6 精密度实验 精密量取对照品溶液储备液(97.6μg/ml)2ml置50ml量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10μl，重复进样5次，以峰面积计算RSD(n=5) 为0.22%。证明本法有较高的精密度。

2.7 稳定性实验 取同一批号本品(20130830)，按“2.4”方法配制溶液，分别于0、1、2、4、6h进样，进样量为10μl，测定高良姜素的峰面积，RSD为1.42%。

2.8 重现性实验 取同一批号本品(20130830)，按“2.4”方法平行制备5份样品溶液，在按“2.2”的方法进行测定，并对所得数据进行处理，结果测得高良姜素平均含量(n=6)为256.1μg/g，RSD为1.2%。结果表明方法的重复性较好。见图1。

2.9 加样回收率实验 精密量取已知含量的样品(批号：20130830，含量256.1μg/g)，称取1g，精密称定，精密加入对照品溶液储备液2ml，再按“2.4” 方法平行制备6份样品溶液，用微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，作为加样回收率样品。按照样品测定项下的方法测定含量，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果(n=6)

2.10 样品测定 取3批样品按“2.4”方法制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件下测定，按外标法计算高良姜素的含量。结果见表2。

表2 罗补甫克比日丸中高良姜素的含量测定结果(mg/g，n=3)

3 讨论

3.1 检测波长的验证 取高良姜素对照品储备液(97.60μg/ml)用甲醇稀释成9.760μg/ml溶液，用紫外可见分光光度计于240～300nm处进行扫描，从其紫外图谱中可见其在266nm处有比较强的最大吸收，与有关参考文献[3]报道的266nm一致，故选择266nm为检测波长。

3.2 流动相的选择 根据参考文献报道的方法试验，流动相用甲醇-0.2%磷酸溶液(55∶45)[2]，甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)[3]，在该制剂中高良姜素的分离效果均不佳，通过不断改变甲醇与0.2%磷酸溶液的比例及流速，选定甲醇-0.2%磷酸溶液(65∶35)及流速lml/min比较合适，分离度好且保留时间适宜。

3.3 提取方法的选择 根据参考文献[2]甲醇作为溶剂采用加热回流1、2、4h，结果加热回流2h和4h的测定结果接近，为保证提取完全，确定加热回流4h。

本实验测定了和田维吾尔药业有限责任公司不同批号的罗补甫克比日丸中高良姜素的含量，结果表明所建立的方法简单，可靠，重现性好，结果准确，为罗补甫克比日丸的质量控制提供了有效的依据。

[1] 国家药典委员会．卫生部药品标准(维吾尔药分册)[S]．1998：194．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：270-271，附录36．

[3] 李智勇，孙冬梅．HPLC法测定高良姜中高良姜素和山奈素的含量[J].中华中医药杂志，2010，25(9)：1368-1370．

DeterminationofgalangalinUygurMedicinePreparationLuobupukebiriPillsbyHPLC

Simayijiang·Abudurexiti,Ayinuer·amuti

Kashi Institute for Drog Control，Kashi 844000，China

ObjectiveDetermination ofLuobupukebiri Pills solution of galangal.MethodsA Methanol-0.2% phosphoric acid(65:35); flow lml/min; detection wavelength 266 nm column temperature: 25℃; injection volume: l0μL; analysis methods: external standard method.ResultsIn 0.19～9.76μg. range of good linearity (r=1.0), method precision was RSD = 0.7% (n= 5), the average recovery was 98.65%,RSD was 1.6% (n= 6).ConclusionsThe method is simple, accurate, reproduciblemeasuredresults are stableand can be usedinthe preparationmethod for the determinationofgalangal.

HPLC；Galangin；Luobupukebiri Pills；content determination

司马义江·阿布都热西提(1973-)，男，本科，副主任药师。

R284.1

A

1007-8517(2014)23-0008-02

2014.09.10)