新疆厚叶岩白菜素提取方法优化及不同部位含量的研究

吴红红，潘兰，贾晓光，石明辉，库丽夏西·马尼，贾新岳

（1.新疆医科大学附属自治区中医医院，新疆 乌鲁木齐100193；2．中国医学科学院药用植物研究所新疆分所新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002；3．新疆阿勒泰地区哈萨克医医院，新疆 阿勒泰830064）

新疆厚叶岩白菜素提取方法优化及不同部位含量的研究

吴红红1，潘兰2△，贾晓光2，石明辉2，库丽夏西·马尼3，贾新岳2

（1.新疆医科大学附属自治区中医医院，新疆 乌鲁木齐100193；2．中国医学科学院药用植物研究所新疆分所新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002；3．新疆阿勒泰地区哈萨克医医院，新疆 阿勒泰830064）

目的对新疆厚叶岩白菜素进行提取方法优化及不同部位含量的测定，为高效提取厚叶岩白菜素提供依据。方法利用正交实验，对醇提法的乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4个因素进行综合考虑、筛选，以及对厚叶岩白菜素不同部位进行含量测定。结果优选出最佳的乙醇提取新疆厚叶岩白菜素工艺条件为8倍量50%的乙醇，回流提取3次，每次0.5 h。厚叶岩白菜不同部位的岩白菜素差异具有统计学意义（P＜0.05）。主根和须根中岩白菜素的含量较高，达到8.65%～9.58%，而叶中岩白菜素的含量相对较低，仅为0.15%。厚叶岩白菜素嫩叶含量显著高于老叶。结论本实验研究对高效提取新疆厚叶岩白菜素提供了有力的技术支撑，同时为新疆厚叶岩白菜药材质量评价奠定了理论基础。

厚叶岩白菜素；醇提法；高效液相色谱

厚叶岩白菜[Bergenia crassifolia (L.) Fritsch]为虎耳草科、岩白菜属多年生常绿草本[1-2]，是该属中形体较大、花叶俱美、含药物成分多、药物成分含量高的种类，主要分布于新疆阿尔泰山1000～2600米的岩石缝隙及林下。该植物的根茎为哈萨克常用药物，具止咳定喘，收敛止血之功效。用于腹泻，痢疾，食欲不振，内外出血，肺结核咳嗽，气管炎，跌打损伤等症[3-5]。

厚叶岩白菜在新疆地区应用广泛，但其提取方法较为繁琐，提出率较低，研究还不深入[6-8]。因此，本研究通过对厚叶岩白菜的提取方法进行优化，明确不同部位含量，为厚叶岩白菜素的研究及药理机制、新药的研制奠定基础，从而深入地挖掘这一民族药资源，对新疆少数民族药物的整理利用具有重要的意义。

1 材料和方法

1.1 材料 厚叶岩白菜由新疆阿勒泰地区哈萨克医医院提供，经新疆维吾尔自治区中药民族药研究所贾晓光研究员鉴定为Bergenia crassifolia (L.) Fritsch，凭证标本均存放于新疆中药民族药研究所标本室。

多用粉碎机（9 FZ-25，四川简阳市大地机械厂）；数显恒温水浴锅（HH-S 2，金坛市医疗仪器厂）；电子天平（FA 1104 N,上海民桥精密科学仪器有限公司）；三用紫外仪（ZF-2 C型，上海市安亭电子仪器厂）。Hypersil BDS色谱柱(5 μm；4.6 mm×200 mm),波长275 nm，流动相:甲醇∶水=25∶75，流速1.0 mL/min。

1.2 试验方法

1.2.1 厚叶岩白菜素含量测定及标准曲线的绘制 精确称取对照品厚叶岩白菜素3.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，得到60 ug/mL。精确量取上述对照品溶液1.5 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。以甲醇为空白对照，在275 nm波长处测定吸收度。以纵坐标作为浓度，横坐标为峰面积制定岩白菜素标准曲线，回归方程为y=10-7x-0.0053（r=0.96055），结果表明厚叶岩白菜素在0.41～2.05 μg呈良好线性关系。

1.2.2 供试样品溶液的制备 取厚叶岩白菜粉末9份，每份5.0 g，分别按照正交试验设计条件进行提取，合并提取液，用蒸馏水定容到10 mL，转移至大孔吸附树脂柱中，静止30 min后用300 mL去离子水洗脱至流出液无色，再用20%乙醇洗脱，取洗脱液0.1 mL置10 mL容量瓶中稀释摇匀，并定容，于波长275 nm处测定吸收度，计算出岩白菜素的含量。

1.2.3 正交设计 采用L 9(34)进行正交设计，以厚叶岩白菜素含量作为指标，对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4 个因素进行实验，优化厚叶岩白菜素的提取工艺。

2 结果与分析

2.1 厚叶岩白菜醇提工艺的优化 通过方差分析可以得知，提取次数对提取厚叶岩白菜素浓度的影响差异较显著，乙醇浓度、用量及提取时间影响不显著。结合直观分析结果，试验编号6厚叶岩白菜素含量最高为13.79%，即以厚叶岩白菜素较佳提取工艺为：A2 B3 C1 D 3，即8倍量50%的乙醇，回流提取3次，每次 0.5 h（见表1、表2）。

表1 正交设计因素水平表Tab.1 Orthogonal design factors table

表2 厚叶岩白菜素正交试验结果Tab.2 Orthogonal test results of bergenia crassifolia pigment

2.2 厚叶岩白菜不同部位岩白菜素含量的比较

2.2.1 厚叶岩白菜老叶和嫩叶岩白菜素含量的比较 通过厚叶岩白菜老叶和嫩叶岩白菜素色谱图比较分析，相同时间内嫩叶岩白菜素峰面积显著高于老叶岩白菜素峰面积，即厚叶岩白菜嫩叶岩白菜素含量显著高于老叶（见图1）。

图1 栽培岩白菜老叶与嫩叶的比较色谱图Fig.1 Comparison chromatograph chart of the old leaves and delicate leaf of Bergenia crassifolia

2.2.2 厚叶岩白菜不同部位岩白菜素含量比较 厚叶岩白菜不同部位中主根和须根岩白菜素的含量较高，达到8.65%～9.58%，而叶中岩白菜素的含量相对较低，仅为0.15%（见表3）。

表3 厚叶岩白菜不同部位岩白菜素含量比较(%)Tab.3 Content comparison of the different parts of Bergenia crassifolia(%)

3 讨论

1997年龚建夫等用浓盐酸调pH，70℃水浴加热、抽滤等方法，得岩白菜素粗晶，粗晶于乙醇中，加活性炭、煮沸、过滤，放置，水洗烘干，即得岩白菜素成品[9]。1998年贾晓斌等采用正交试验法水提岩白菜素的复方制剂[10]，但该种方法步骤多，时间长，提取率低，本实验优选出最佳的乙醇提取新疆厚叶岩白菜素工艺条件为8倍量50%的乙醇，回流提取3次，每次0.5 h。该方法具有操作简单、使用方便、价格便宜、重现性好等特点，能够有效的进行新疆厚叶岩白菜素的提取。通过优化工艺厚叶岩白菜素的提取率由原来的4.38%[11-12]提高至11.6%。该方法值得进一步开展研究，探索实现厚叶岩白菜素提取的产业化。

厚叶岩白菜中的不同部位岩白菜素存在明显差异[13-14]。主根和须根中岩白菜素的含量较高，达到8.65～9.58%，而叶中岩白菜素的含量相对较低，仅为0.15%。厚叶岩白菜素嫩叶含量明显高于老叶。厚叶岩白菜虽在新疆广泛应用，但并未载入《中国药典》，哈萨克族长期应使用的结果证明，该药疗效显著，是值得开发的品种，但该药的野生资源仅分布于我国的新疆阿勒泰地区，由于近年来需求量加大，该资源逐渐贫乏。该药野生资源少，且以根入药资源破坏大，能否以其余部位如叶或地上部分入药是该药今后值得研究的方向[15]。本实验研究对新疆厚叶岩白菜药材质量评价奠定了理论基础。

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Studies on the optimization of extraction method and content of different parts in XinJiang Bergenia crassifolia (L.)

WU Hong-hong1, PAN Lan2△, JIA Xiao-guang2, SHI Ming-hui2, Kulixiaxi Mani3, JIA Xin-yue2
(1. Hospital of traditional Chinese medicine of xinjiang medical university autonomous region, Urumqi 830002, China; 2. Xinjiang Institute of Chinese Materia Madica and Ethnodrug, Urumqi 830002, China; 3. Xinjiang Altay Prefecture Kazakh Medical Hospital, Altay 830064, China)

ObjectiveTo extraction method optimization and the content of the different parts of Xinjiang Bergenia crassifolia (L.), provide the basis for ef fi cient extraction of Bergenia crassifolia pigment。MethodUsing the orthogonal experiment, the alcohol extraction process of ethanol concentration, dosage of ethanol, extraction time, extraction times, as well as to Bergenia crassifolia pigment content of the different part。ResultsOf optimization, the best ethanol extract of xinjiang Bergenia crassifolia pigment process conditions is 8 times the amount of 50% ethanol, extracting 3 times, each time 0.5 h. In Bergenia crassifolia pigment content of different parts exists obvious difference. Bergenia crassifolia pigment content of Taproot and fi brous root is higher, at 8.65% to 9.58%, while Bergenia crassifolia pigment content of the leaves is relatively low, at just 0.15%. Bergenia crassifolia pigment content of leaves signi fi cantly higher than the old leaves。ConclusionThis experimental study on ef fi cient extraction of xinjiang Bergenia crassifolia pigment to provide strong technical support and theoretical basis.

bergenia crassifolia pigment; alcohol extraction process; high performance liquid chromatography

R 914.1

A

1005-1678(2014)01-0074-02

新疆维吾尔自治区自然科学基金（2013211A112）

吴红红，女，副主任医师，研究方向：慢阻肺的治疗研究，E-mail: smwhh@163.com；潘兰，通信作者，女，助理研究员，E-mail: panlan_sc@126.com。