HPLC法测参附丹强心颗粒中丹参素钠质量浓度

凌雪宇，刘文亮，郑 玥，高世勇

(1. 哈药集团世一堂制药厂，哈尔滨 150078；2. 哈尔滨商业大学，哈尔滨 150078 )

参附丹强心颗粒由红参、附子、丹参三味药组成，具有活血化瘀，通脉舒络等功效[1-4].为了控制产品质量，本文用HPLC法对本品中所含丹参素钠进行了质量浓度测定.

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪，包括G1379A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1316A可变波长检测器， G2170AA色谱工作站，UV-2450型紫外可见分光光度计(日本岛津).

丹参素钠对照品(中国生物制品检定所，110855-200405)，甲醇为色谱纯，水为蒸馏水，参附丹强心颗粒(自制).

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Alltima-C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)；甲醇-0.5%磷酸(10∶90)为流动相；检测波长为280 nm；流速1.0 mL/min；理论板数按丹参素钠峰计不低于3 000.

2.2 对照品溶液的制备

取丹参素钠标准品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含0.1 mg的丹参素钠对照品溶液，过0.45 μm微孔滤膜即得[5-7].

2.3 供试品溶液的制备

取供试品1.0 g ，分别置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入水50 mL，称定质量，超声30 min，放至室温，再补足至质量，过0.45 μm微孔滤膜即得.

2.4 阴性溶液的制备

取相当于供试品量的药材(除丹参药材)，粉碎成细粉，按供试品溶液制备方法制备阴性液.

2.5 测定方法与结果

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性液各10 μL，注入高效液相色谱仪，如法测定.(见图1～3).

图1 丹参素钠对照品色谱图

图2 参附丹强心颗粒样品色谱图

图3 缺少丹参的阴性样品色谱图

2.6 方法考察

2.6.1 标准曲线

精密称取丹参素钠对照品11.80 mg置于25 mL容量瓶中，加入50%甲醇定容，分别精密吸取该溶液0.2、1.0、1.8、2.6、3.4、4.2 mL置10mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，配成质量浓度为9.44、47.20、84.96、122.72、160.48、198.24 μg/mL的溶液，各精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪，测得峰面积值.以进样质量浓度和峰面积进行线性回归绘制标准曲线，结果表明丹参素钠在9.44～198.24 μg/mL范围内线性关系良好，标准曲线方程为y=5.404x-6.034 7，相关性r=0.999 8.见图4.

图4 标准曲线

2.6.2 加样回收试验

精密称取丹参素钠对照品23.6 mg置50 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，质量浓度为472 μg/mL.取供试品0.5 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入质量浓度为472 μg/mL的丹参素钠对照品溶液6 mL，加水定容至刻度，称定质量，超声30 min，放至室温后补足至质量.过0.45 μm微孔滤膜即得加样回收溶液.进行测定.结果表明本方法回收率良好，RSD值为0.54%.计算结果见表1.

2.6.3 精密度试验

精密称定供试品1.0 g，置100 mL具塞锥形瓶中，加水50 mL，称定质量，超声30 min，放置室温，再补足至质量，过0.45 μm微孔滤膜即得，取10 μL，注入液相色谱仪6次，记录峰面积，计算RSD值.结果见表2.

2.6.4 重复性试验

取同一批号的参附丹强心颗粒，精密称定供试品1.0 g，共6份，分别置100 mL具塞锥形瓶中，加水50 mL，称定质量，超声30 min，放至室温，再补足至质量，过0.45 μm微孔滤膜即得，色谱条件如上所述，结果6次测定的平均质量比为5.25 mg/g，RSD值为1.59%，说明重复性较好.试验结果见表3.

表1 加样回收率实验结果

表2 精密度实验结果

表3 重复性试验结果

2.6.5 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液10 μL注入液相色谱仪，每隔2 h测定1次，共测定5次，考察峰面积积分值在8 h内变化，结果表明在8 h内基本稳定，RSD值为0.15%.试验结果见表4.

表4 稳定性实验结果

2.6.6 样品测定

供试品溶液制备：取供试品1.0 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入水50 mL，称定质量，超声30 min，放至室温，再补足至质量，过0.45 μm微孔滤膜即得.实验结果见表5.根据质量浓度测定结果确定样品中丹参素钠质量比不低于4.0 mg/g.试验结果见表5.

表5 三批样品测定结果

3 结 语

丹参素钠对照品溶液在190～400 nm波长范围内，最大吸收波长为280 nm，故本试验选择280 mn作为检测波长.本试验分别采用了流动相比例为N，N-二甲基甲酰胺-甲醇-水-冰醋酸=4∶4∶150∶2，水相过多，对色谱柱伤害太大，故重新考察流动相，增加甲醇的量.预实验考察发现对于本品甲醇-0.5%磷酸=10∶90可以使其中丹参素得到较好分离，所以选定此流动相系统.

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京: 化学工业出版社, 2010: 70.

[2] 刘敏彦, 赵韶华. 丹参不同提取方法中水溶性成分含量的比较研究[J]. 时珍国医国药, 2007(5): 20.

[3] 任志会, 苏会霞, 柏艳柳. 丹参脂溶性及水溶性成分集成提取工艺研究[J]. 中国中医药信息杂志, 2009(3):45.

[4] 孟 江, 周毅生. 丹参多酚酸提取工艺的研究[J]. 时珍国医国药, 2009(10): 66.

[5] 张英锋, 王燕革, 马子川. 丹参活性化学成分的研究[J]. 化学世界, 2009, 5(10): 34.

[6] 冯玲玲, 周吉源. 丹参的研究现状与应用前景[J]. 中国野生植物资源, 2004, 23(2): 4-7.

[7] 马 宁,肖光玲，高 宇，等.HPLC法同时测定白屈菜中白屈菜碱和白屈菜红碱[J].哈尔滨商业大学学报：自然科学版，2014，30(3)：351-353.