红花水提取液精制大孔树脂型号的筛选研究

陈 玉，王英新，吴志军，李云涛，任瑞涛，王丽娜，单钰毓

(1.黑龙江中医药大学 药学院，哈尔滨 150040；2.哈药集团中药二厂，哈尔滨150088)

红花为菊科植物红花(Carthamuts tinctorius L.)的管状花，为主要活血化瘀的中药之一，常用于血脉闭塞、跌打损伤、疮疡肿痛等症.目前世界上共有13种红花，我国仅有一种.红花的化学成分主要为黄酮和脂肪油两大类，其中水溶性的查耳酮类化合物红花黄色素(saffloryellow，SY)为红花的主要有效成分[1-2]，它具有扩张冠状动脉，抗氧化，保护心肌，降血压，免疫抑制和脑保护等多种药理功效.本文以羟基红花黄色素A为指标成分，考察了红花精制工艺的条件；大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，具有较好的吸附性能，近年来广泛应用于中草药化学成分的提取分离，本文采用此法对红花的水提取液进行精制，对其所选用的大孔树脂型号、静态吸附及解吸溶媒参数等进行了考察.

1 仪器与药品

Agilent 1100高效液相色谱仪，Agilent 1100色谱工作站(安捷伦科技有限公司)，UV-2450型紫外可见分光光度计 (日本岛津)，AS10200B型超声波清洗仪(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；色谱柱(Thermo C18250 mm×4.6 mm×5 μm)；NKA-9、HPD-400、HPD-450、X-5、D101、AB-8型大孔吸附树脂(天津).羟基红花黄色素A对照品(批号111637-200905)，由中国药品生物制品检定所提供.高效液相用乙腈、甲醇为色谱纯(美国天力)，其余试剂均为分析纯(天津市科密欧化学试剂有限公司)，水为蒸馏水.

2 方法与结果

2.1 检测方法与样品液的制备

2.1.1 色谱条件

色谱柱(Thermo C18250 mm×4.6 mm×5 μm)；填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)；检测波长为403 nm；流速为1 mL/min.

2.1.2 对照品溶液制备

精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25%甲醇制成每1 mL中含0.13 mg的溶液.

2.1.3 供试品溶液制备

取适量红花提取液(相当于0.4 g药材)，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇定容50 mL，摇匀.

2.2 大孔树脂静态吸附的考察

称取红花药材500 g，浸泡30 min，加入去离子水20倍量，煎煮30 min，滤过，再加入水18倍量煎煮30 min，滤过，合并滤液，放冷[3].

取预处理好的NKA-9、HPD-400、HPD-450、X-5、D101、AB-8型大孔树脂各100 g，置于1 000 mL锥形瓶中，每种树脂称3份，分别加入红花提取滤液600 mL (约相当于25 g红花药材，羟基红花黄色素A含量为93.243 g)， 置于28 ℃、120 r/min恒温振荡器上时时振荡24 h，吸附平衡后，测定含量.根据下式计算不同型号大孔树脂的静态吸附量(Q，mg/g)、吸附率(%)：Q=(ρ0V0-ρeVe/m)×100%、吸附率=(ρ0V0-ρeVe/ρ0V0)×100%(式中，ρ0为吸附前溶液中HSYA的总质量浓度；V0为吸附前溶液总体积；ρe为吸附饱和后溶液中HSYA的总质量浓度；Ve为吸附后溶液的总体积；m为树脂质量)[4]，结果见表1.

表1 大孔树脂静态吸附测定结果

结果表明，X-5和AB-8型大孔树脂静态吸附效果较好.

2.3 大孔树脂静态水解析考察

分别向2.1项下达到吸附平衡的树脂中，加入700 mL去离子水，置于28 ℃下连续振摇24 h，测定此解吸液中羟基红花黄色素A的含量，按下式计算去离子水的解吸附率(%)：解吸附率=(ρdVd/ρoVo-ρeVe)×100%(式中:ρd为解吸液中羟基红花黄色素A总质量浓度；Vd为解吸液体积).结果见表2.

表2 大孔树脂静态水解吸测定结果

结果表明，X-5、AB-8型大孔树脂静态水解吸率较低，指标成分保留较理想；HPD-450型大孔树脂静态水解吸率最高，在去除糖类、氨基酸等大分子杂质的同时，指标成分损失最大.

2.4 大孔树脂静态50%乙醇解吸考察

向2.2项下经去离子水解吸后的树脂中，分别加入700 mL50%乙醇溶液，28 ℃下连续振摇24 h，测定此解吸液中羟基红花黄色素A的含量，按2.2项下解吸附率公式计算50%乙醇溶液的解吸附率.结果见表3.

表3 大孔树脂静态50%醇解吸测定结果

结果表明，D101、X-5型解析效果较好，HPD-400、AB-8型次之[5].

综合考虑上述试验结果，AB-8、X-5型大孔树脂对红花提取液中有效成分羟基红花黄色素A的吸附和解吸效果比较理想.

2.5 静态吸附不同体积分数乙醇洗脱效果的考察

按2.1、2.2、2.3项下方法操作，取上样后并经去离子水解吸的X-5、AB-8型号树脂各3份，分别加入700 mL10%、30%、50%、70%乙醇溶液，28 ℃下连续振摇24 h，测定此解吸液中羟基红花黄色素A 的含量，按2.2项下解吸附率公式计算不同体积分数的乙醇溶液的解吸附率.结果见表4.

表4 静态吸附筛选洗脱液体积分数

试验结果表明，在红花水提取药液的大孔树脂精制过程中，AB-8、X-5型大孔树脂70%乙醇的解析效果最好，醇体积分数对解吸效果影响不大，综合比较X-5型树脂是精制红花水提取药液的最佳选择.

3 结 论

大孔吸附树脂近年来广泛应用于中草药化学成分的提取分离，它是一种吸附性和筛选性原理相结合的分离材料.一般说来，吸附分为物理吸附和化学吸附两大类.大孔吸附树脂按其极性大小和所选用的单体分子结构不同，可分为非极性、中极性和极性三类.本研究中用到的大孔树脂NKA-9为极性，主要通过静电相互作用吸附极性物质；HPD-400、HPD-450为中极性，表面兼有疏水和亲水两部分，既可极性溶剂中吸附非极性物质，又可由非极性溶剂中吸附极性物质；D101为非极性；而X-5、AB-8从大的分类角度上说属非极性树脂，但二者具有弱极性.非极性大孔吸附树脂孔表的疏水性较强，可通过与小分子内的疏水部分的作用吸附溶液中的有机物，最适于极性溶剂中吸附非极性物质.羟基红花黄色素A为查耳酮类化合物，分子式C27H32O16，遵从类似物吸附类似物的原则，极性小的化合物适用于在非极性的树脂上分离，本研究的试验结果也符合此原则.通过对不同型号大孔树脂静态吸附、解吸溶媒等参数的考察，筛选出X-5型大孔树脂为最佳选择.试验结果表明，X-5型大孔树脂1 g的最大吸附量为羟基红花黄色素A2.76 mg，并且乙醇浓度对羟基红花黄色素A的解吸效果影响不大.因为影响大孔吸附树脂分离的因素较多，为了达到较好的精制效果，我们还对其精制工艺条件进行了洗脱终点、洗脱速度等参数的考察，研究结果将另文报道.

参考文献：

[1] 施 峰, 刘焱文. 红花的化学成分及药理研究进展[J]. 时珍国医国药, 2006, 17(4):1666-1667.

[2] 王艺蓉,白咸勇.红花的作用及机制研究进展[J]. 滨州医学院学报, 2009, 32(4):451-453.

[3] 肖文英. 红花黄色素研究进展[J]. 临床医药实践杂志, 2006, 15(4):646-649.

[4] 金 鸣, 李金荣, 吴 伟. 羟基红花黄色素 A 抗氧化作用的研究[J]. 中草药, 2004, 35(4):665-666.

[5] 陆海莲，吴 春，刘 宁.AB-8大孔树脂对黑米花色苷的吸附性能研究[J].哈尔滨商业大学学报：自然科学版，2013，29(1)：93-96.