食管癌术中胸腔冲洗液细胞学检查及DNA倍体分析

何枝生 匡裕康 陈爱会 阴兵林 谢 梅 王东升 黄 建 郭昌莹 程效良 王欢元

2007年4月2013年8月，我们将96例食管癌手术切除患者术中胸腔冲洗液行细胞学检查及DNA倍体分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

96例均为我科2007年4月至2013年8月收治的行手术治疗的食管癌患者，男性为71例，女性为25例，平均年龄为62.9岁。行左颈左胸二切口57例；左颈右胸腹正中三切口21例，右胸腹正中二切口8例，单纯左开胸10例。

1.2 仪器和试剂

流式细胞仪为美国BCKMAN COULTER公司产品，DNA stain kit 为美国BCKMAN COULTER公司产品，免洗溶血素。

1.3 方法

开胸后即注入生理盐水300 ml，用手轻轻搅拌，使生理盐水与脏、壁层胸膜及纵膈胸膜充分接触，特别注意肋膈角及胸腔顶部，用盐水反复冲刷，同时将手术床调成头高脚底位，用特制的小勺子将胸腔冲洗液取出，尽量避免使用注射器，以免细胞被破坏；同时开胸时止血，尽量减少冲洗液中的红细胞，以免影响细胞学检查结果；取出的胸腔冲洗液分成AB两瓶，A瓶送细胞学检查，B瓶送DNA倍体分析。将A瓶中胸腔冲洗液离心，3 000转/min,每次3 min，共2～3次，弃去上清液，沉淀物2～4张，及时固定，HE染色，光镜下观察脱落细胞的形态。流式细胞仪测定DNA含量：800～1 000 r/min离心沉淀收集到的胸腔冲洗液，如为血性液体，用37 ℃预温过的溶血剂溶解红细胞，用pH 7.4 0.01 mol/L PBS洗涤2次，350目的滤网过滤除去细胞团块，将细胞数调整至106个/ml；按照DNA stain Kit st说明书进行染色和固定，即时应用流式细胞仪检测；不能即刻上机检测的，用终浓度为70%的酒精固定，4 ℃冰箱保存，上机前再染色固定。

2 结果

96例食管癌中细胞学检查9例找到癌细胞，流式细胞仪检测发现21例异倍体。细胞学检测阳性率及DNA异倍体检出率与患者病程、年龄及性别无明显相关性；但临床分期越高，细胞学检测阳性率及DNA异倍体检出率越高，见表1。

表1 食管癌PLC细胞学检查及DNA异倍体检出情况/例

3 讨论

开胸后未作任何胸内操作前胸腔是一个刚被打开封闭了很久的潜在腔隙，被覆盖的间皮细胞及其内脱落细胞保持了术前在胸腔内的状态，选择此时冲洗胸腔，冲洗液中的细胞均来自胸膜腔，较客观反映胸膜腔的真实情况。术中胸腔冲洗液细胞学检查(pleural lavae cytology，PLC)在国内外有多篇报道[1-2]，但因受到取材等多种因素影响，检出率偏低，结合流式细胞仪检查，特异性及敏感性均提高。

关于胸腔冲洗液癌细胞来源有学者提出3种途径：①各种创伤性操作及手术本身引起的癌细胞扩散；②癌细胞直接脱落；③淋巴源性。1975年Wang首次在胸膜上才淋巴孔，为胸腔冲洗液的研究提供了理论依据。食管粘膜下层具有丰富的毛细血管和毛细淋巴管，食管癌一旦侵犯到粘膜下层，就容易累及淋巴系统；由于胸膜下淋巴管有微小空隙与胸膜腔相通；本组病例中有1例早期患者胸腔冲洗液中找到癌细胞可能跟此有关。

部分术前无胸膜腔转移征象患者胸腔冲洗液中细胞学阳性和(或)NNA异倍体阳性，提示胸膜腔受侵或胸膜播散或胸膜下淋巴网有肿瘤浸润；此类患者为不完全切除；此类患者肿瘤侵袭性强，远处转移及局部复发的风险高。

综上所述我们认为，食管癌术后应给予化疗或胸腔内灌注化疗，以提高患者生存率及改善患者生存质量。

[1] 谢 冬,周 晓,姜格宁，等.肺癌胸腔冲洗液的研究进展〔J〕.中华胸心血管外科杂志,2012,28(11):696-697,699.

[2] 王东升,匡裕康,谢 梅，等.肺癌术中胸腔冲洗液细胞学检查及DNA倍体分析〔J〕.实用癌症杂志,2008,23(6):605-606.