CD105、Ki67 联合表达对卵巢上皮癌的临床意义及与其预后的相关性

刘 萍 郭海荣 王俊飞 陈轶群 孙 楠

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，其中卵巢癌又以卵巢上皮癌(EOC)最为多见。在70%的EOC患者中，疾病的进展期意味着已发生了盆腔内的广泛种植转移，而进展期EOC患者5年生存率仍不到25%。目前EOC患者的预后判断多基于临床病理参数，然而报告显示在相同病期、相同组织类型或分化级别的患者中，肿瘤的生物学方式和预后常常不同。因而，确定新的预后因素以便区分不同结果的患者可能对改善治疗有帮助。

CD105 是内皮细胞增生的最可靠的标记物[1]，Ki-67是目前应用最为广泛的细胞增殖标记之一[2]。目前同时研究CD105、Ki67在EOC中联合表达对于预后价值的报告还很少。本研究采用免疫组化法对我院166例ECO组织中CD105和Ki67的表达进行检测，旨在明确它们在ECO侵袭转移中的作用及预后意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2002年1月至2011年12月内蒙古医科大学第三附属医院收治的并经组织病理学检查确诊为EOC患者共166例，年龄39～81岁，中位年龄为54岁。复习家族史确认患者为散发病例，且均为初发。根据2000年国际妇产科联盟(FIGO)诊断标准中卵巢恶性肿瘤临床分期标准进行分期:Ⅰ期16例，Ⅱ期42例，Ⅲ～Ⅳ期108例。组织学分化:高分化 24 例，中分化 52例，低分化 90 例。淋巴结转移 98 例。

1.2 治疗方法

患者均采用以手术为主的综合治疗，入院后行常规术前检查后行全子宫加双侧附件切除术，其中150例行肿瘤细胞减灭术及盆腔和腹主动脉旁淋巴结清扫术，清扫盆腔淋巴结19～34枚。根据患者年龄、肿瘤临床分期、病理及免疫组织化学检测结果确定下一步治疗方案。

1.3 组织病理学检测

将术中切除组织用10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，连续切片(厚度为4 mm)后行苏木精一伊红染色。按照世界卫生组织卵巢肿瘤组织学类型分类标准，在显微镜下观察并确认:浆液性腺癌122例，黏液性囊腺癌26例，勃液性腺癌7例，内膜样腺癌9例，透明细胞癌2例。

1.4 免疫组织化学技术

1.4.1 主要试剂 鼠抗人Ki67单克隆抗体(Changdao公司，美国)，鼠抗人P53单克隆抗体(Sunbio公司，中国)，免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白---过氧化物酶连结法(SP)染色试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)显色剂。免疫组织化学检测，根据Envision二步法的实验步骤进行，置于光学显微镜下观察。

1.4.2 结果判断标准 CD105表达主要分布于细胞膜及细胞质，Ki67 表达主要于细胞核，均以出现棕黄色或棕褐色颗粒且染色强度明显高于背景者为阳性表达。CD105和Ki67蛋白表达以高倍光学显微镜下阳性细胞所占比例的平均值表示，阳性细胞率 <5%为 0分，6%～25%为 1分，26%～50%为 2 分，51%～75%为 3分，>75%为 4 分；染色强度以多数细胞的呈色反应为准：无着色或着色很弱为0分；淡棕黄色为 1 分；棕黄色为 2 分；深棕黄色为 3 分。上述两项积分相加为最后结果：0 分为阴性(-)，1～3 分为弱阳性(+)，4～5 分为中等阳性(++)，>6 分为强阳性(+++)。

1.5 随访

总生存期(OS)定义为从治疗开始日至死亡或随访截止日期。随访截至于2011年12月31日，中位随访时间为26.3个月。所有病例均未失访，至随访结束48例患者仍存活。

1.6 统计学处理

应用 SPSS 13.0 软件对数据进行统计分析，定性资料间的比较采用卡方检验，采用Spearman等级相关检验进行分析，生存曲线采用Kaplan-Meier 法计算。

2 结果

2.1 CD105和Ki67表达与肿瘤淋巴结转移、临床分期的关系

组织学分化低EOC患者CD105和Ki67蛋白表达率显著高于组织学分化高患者(P<0.05);Ⅲ～Ⅳ期患者CD105和Ki67蛋白表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期者(P<0.05);有淋巴结转移者CD105和Ki67表达率显著高于无淋巴结转移者(P<0.05)，见表1。

表1 166例卵巢上皮癌组织中CD105和Ki67表达与其临床病理参数的关系(例，%)

注：△为与低分化比较；#为与Ⅲ～Ⅳ期比较。

2.2 CD105 与Ki67 表达相关性分析

166 例卵巢上皮癌中，CD105 和Ki67 同时呈阳性表达共86例(51.8%)，同时呈阴性表达共16例(9.6%)，CD105 阳性表达、Ki67 阴性表达共126例(75.9%)，CD105阴性表达、Ki67 阳性表达共110例(66.3%)。经Spearman 等级相关分析显示，在卵巢上皮癌中CD105与Ki67阳性表达呈正相关(γ=0.66，P=0.01)。

2.3 CD105 和 Ki67表达与卵巢上皮癌预后的单因素分析(表2)

表2 ECO患者预后单因素分析结果

Kaplan-Meier生存分析发现，EOC患者OS与肿瘤临床分期、组织学分化程度及淋巴结转移相关(P<0.05)，CD105+/ Ki67+患者OS显著缩短，CD105-/Ki67-患者OS延长，两者差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

CD105是受体TGF-β(肿瘤生长因子)家族成员，是内皮细胞增生的最可靠的标记物，在癌灶内及癌灶瘤周高表达，提示其在新血管生成的血管优先表达[3]。目前国内外主要集中在研究肿瘤中CD105作为血管形成分子的角色和它作为肿瘤中微血管密度标记的作用。Ki67是细胞周期G1期的一个核蛋白，出现在细胞周期的全部活跃阶段(G1、S、G2)，但不在休眠期细胞出现(G0)，其表达与细胞增生相关。是目前检测肿瘤增殖活性和增殖速率最可靠的指标[4]。细胞增殖活性与肿瘤的增殖、浸润转移和预后密切相关，而Ki67蛋白的表达对评价细胞的增殖状态、研究肿瘤的生物学行为及评估患者预后也具有重要意义[5]。研究显示Ki67增生指数同一些癌症不良的远期无病存活和总体存活相关[6]。Ki67蛋白表达对肿瘤预后的影响及同肿瘤临床病理特征的关系提示在多种不同种类的癌症中起到重要作用。国外有研究表明在卵巢癌中Ki67的细胞核表达>30%预示在进展期卵巢癌中呈高表达[7]。然而，同时研究CD105、Ki67在卵巢上皮癌中联合表达对于预后的价值的报告还很少。

国内已有研究发现，EOC中 Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌的Ki67蛋白阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期，与本研究的结果一致。目前对于头颈部、前列腺等多个部位肿瘤的研究发现，Ki67蛋白的表达与肿瘤的淋巴结转移相关，并推测Ki67蛋白可作为一个独立的肿瘤特异性的标志[8]。本研究结果显示，有淋巴结转移者的CD105、Ki67蛋白表达显著高于无淋巴结转移者，表明CD105、Ki67蛋白的高表达能较可靠地反映肿瘤增殖活性和速度，其表达水平越高，表明肿瘤细胞增殖越快，越易发生侵袭和淋巴结转移。本研究结果提示，CD105、Ki67蛋白可作为EOC分级、分期及判断淋巴结转移的参考指标，有助于临床医师选择肿瘤的治疗方法及评估疗效和预后。

免疫组化法分析166例卵巢上皮癌组织中CD105和Ki67的表达。结果可见CD105的阳性染色126例(75.9%)，Ki67阳性表达为110例(66.3%)，同一肿瘤样本里CD105、Ki67两个都表达的为86/166(51.8%)，且CD105和Ki67表达明显相关(Spearman's相关指数γ=0.66,P=0.01，P<0.05)。CD105 在病理分级高的肿瘤中过表达，Ki67在进展期肿瘤中过表达，这些发现提示CD105 和Ki67可作为浸润性肿瘤的生物标记物，并预示患者的不良预后。同时我们还发现CD105、Ki67在卵巢癌中过表达与总体不良预后成正相关。

我们的研究结果表明，FIGO分期和肿瘤分级与患者总体存活率显著相关，CD105 和Ki67表达与较短的总体生存时间显著相关，且两者表达在ECO患者的总体生存中为独立的预后因素。

同样，我们分析了卵巢上皮癌中CD105/Ki67联合表达与预后的关系。在CD105/Ki67联合表达的四个不同状态发现了显著不同的预后，对CD105-/Ki67-相对有最好的预后，而CD105+/Ki67+患者显示出最差的预后。在预测卵巢上皮癌的转归中，CD105/Ki67联合表达对于独立CD105或 Ki67具有更明显的优势。结果提示CD105、Ki67 蛋白表达可能涉及卵巢上皮癌的发生发展。CD105和Ki67 联合表达可能对于卵巢上皮癌预后的评估有所帮助。

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