周期蛋白依赖激酶-2表达对乳腺癌新辅助化疗的疗效判断价值

杨丽萍 罗庆丰 吴毓东 孙正魁 樊 帆

乳腺癌是我国妇女高发的恶性肿瘤，其发病率占妇女肿瘤的31%，新辅助治疗是其有效治疗方法和近期研究热点，但是新辅助化疗总有效率为50% ～ 60%[1]，因此如何预测新辅助化疗有效性对于提高治疗效果具有十分重要意义，我们应用免疫组化法，检测新辅助化疗该肿瘤患者标本的周期调控蛋白CDK2表达情况，比较周期调控蛋白CDK2表达情况与新辅助化疗疗效关系，为乳腺癌规范的新辅助治疗作出有益的探索。

1 材料与方法

1.1 一般资料

江西省肿瘤医院2008年1月至2010年8月收治55例乳腺癌患者，经病理检查确诊为浸润性导管癌，均为女性，年龄33～68岁，平均年龄(50.8±2.6)岁。

1.2 主要试剂及仪器

CDK2购自北京中杉生物科技有限公司，为即用工作液。仪器 Leica轮转式切片机型号RM2235，格兰仕微波炉型号D90D34ESXLRII-Y8。

1.3 治疗方法

新辅助化疗方案为 “TAC” 方案 (多西紫杉醇75 mg/m2,阿霉素8 mg/m2，环磷酰胺500 mg/m2)，21天为个1周期，术前行2个周期化疗，2周内行手术治疗并评价疗效。

1.4 免疫组化检测

术前用粗针穿刺经过病理组织学检查证实为乳腺浸润性导管癌，采用MaxvisionTM免疫组化法检测CDK2表达，按照免疫组化试剂盒的说明进行操作，具体步骤：① 4 μm连续切片，裱于涂有APES的载玻片上，70 ℃烤片2 h;② 二甲苯脱蜡，梯度酒精入水；③ 3%过氧化氢室温孵育30 min，消除内源性过氧化物酶；④ 抗原修复：切片浸于pH 6.0柠檬酸溶液中，微波热修复5 min，保温10 min，自然冷却；⑤ PBS洗,3 min×2次；⑥ 加入CDK2抗体，4 ℃冰箱12 h；⑦ 复温，PBS洗去一抗3 min×2次；⑧ 滴加Maxvision二抗试剂，室温作用1 h；⑨ PBS洗3 min×2次；⑩ DAB光镜下显色，苏木精复染，封片。光镜下观察乳腺癌组织中CDK2蛋白表达。阳性对照：购自北京中杉生物科技有限公司CDK2蛋白阳性组织片，阴性对照：PBS代替一抗。

1.5 判定标准

在细胞核呈棕黄色颗粒沉着者为CDK2阳性。根据着色强度及着色癌细胞比例综合染色结果：①按切片中细胞着色有无及深浅评分：无显色为0分，淡黄色为1 分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。②根据着色癌细胞的比例记分：<5%为0分，5%～25%为1分,26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。最后计分=①×②。按积分高低分为：<4分为阴性(-)，≥4分为阳性(+)。根据新辅助化疗后手术标本判断疗效，按WHO的判定标准[2]分为临床完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病进展(PD)和无变化(SD),总缓解(OR)=CR+PR,无效(NR)=SD+PD。

1.6 统计学处理

应用SPSS 16.0统计软件进行四格表卡方检验和R×C行列表检验分析。

2 结果

55例乳腺浸润性导管癌CDK2阳性表达率为70.9%，CDK2阳性表达与患者年龄、肿瘤大小及腋窝淋巴结有无转移无相关性 (P>0.05)，并且与肿瘤组织中ER、PR、CerBb-2水平也无相关性(P>0.05)，CDK2阳性表达率与乳腺癌组织学分级无相关性，见表1。39例CDK2阳性患者新辅助化疗总缓解率为61.5%，16例CDK2阴性患者新辅助化疗总缓解率为25.0%，两者总缓解率比较差异具有显著性意义(P<0.05 ),见表2。

3 讨论

表1 CDK2表达与乳腺癌临床病理特征关系/例

表2 55例乳腺癌中CDK2 表达与新辅助化疗疗效的关系/例

乳腺癌近年来发病率逐渐上升，已成为女性高发肿瘤，新辅助化疗的疗效已得到肯定，越来越广泛的应用于临床，是近期乳腺癌规范治疗中的研究热点[3]，但目前临床工作中发现使用经典的新辅助方案药物进行的新辅助化疗其有效率为50%左右，因此探索出乳腺癌对新辅助化疗敏感指标对于进一步提高疗效具有重要的意义。多数学者采用分子病理标记预测新辅助化疗疗效，研究结果不一[4]，本课题选择检测乳腺癌细胞的细胞周期蛋白质依赖激酶2(CDK2)表达与新辅助化疗的关系，为合理选择新辅助化疗提供理论依据。

细胞周期蛋白质依赖激酶2是控制细胞分裂中的关键蛋白质,对细胞周期起着核心的调控作用.通过对细胞周期蛋白的磷酸化修饰，与不同种类的细胞周期蛋白结合，对细胞周期的不同时相进行调控[5]，CDK2在细胞的生长，增殖中起重要作用，是肿瘤细胞增殖的限速蛋白，与G1期重要的细胞周期蛋白E结合，形成cyclinE-CDK2复合物[6]，同时CDK2还可以与cyclinD1，形成cyclinD1-CDK2复合物，通过促进pRB的磷酸化发挥生物学活性，是激活DNA复制系统中的重要组成部分[7]。

本研究选择乳腺癌55例术前用粗针穿刺经过病理组织学检查证实为乳腺浸润性导管癌，检测CDK2标记在乳腺癌肿瘤组织粗针穿刺标本中表达情况，发现CDK2阳性表达与乳腺癌预后及激素敏感治疗指标ER及PR的表达率比较结果无统计学意义，此结果与Wright 等[8]认为CDK2与PR存在协同表达研究结果一致[10]。同时乳腺癌的CDK2阳性表达率与CerBb-2标记指标及其肿瘤大小，淋巴结转移情况比较结果无统计学意义，该结果与Zolochevska等[9]研究CDK2调控肿瘤细胞从G1进入S增殖期，加速前列腺癌细胞的生长、增殖、转移，及其Merrick等[10]研究CDK2参与了G2到M细胞周期的调控，抑制和降低CDK2活性，可以导致细胞G期阻滞，抑制细胞DNA合成及细胞增殖，延缓肿瘤细胞的生长速度的结果不一致。值得进一步研究CDK2与肿瘤增殖及转移能力的相关性。新辅助化疗疗效判定根据术后结合临床病理学改变，包括肿瘤大小变化、细胞核的改变及其肿瘤坏死情况,CDK2阳性组的新辅助化疗治疗缓解率为61.5%，明显高于CDK2阴性组25%的缓解率，两组结果比较差别具有显著性意义，CDK2阳性表达提示肿瘤组织处于快速增殖期G2到M细胞周期，该时相采用以细胞毒性化疗药为主的“TAC”新辅助化疗可以杀灭处于增殖期的肿瘤细胞，取得更加满意治疗效果，本研究表明CDK2阳性表达对于预测乳腺癌患者接受以细胞毒性药物为主的新辅助化疗的疗效有一定的参考价值，为乳腺癌规范的新辅助治疗作出有益的探索。

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