五味子多糖对脑胶质瘤SHG-44细胞血管内皮生长因子表达水平的影响

温 娜 唐泽波 金 宏 张 宇 刘兴吉 齐 玲 于洪泉

(吉林医药学院基础医学院，吉林 吉林 132013)

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，恶性程度高，约占颅内肿瘤的45％〔1〕。血管内皮生长因子(VEGF)是调节肿瘤微血管生成的重要因子之一〔2〕。五味子多糖具有抗肿瘤活性〔3～5〕，但其具体的抗肿瘤作用机制尚不清楚。本课题组前期研究发现五味子多糖可以抑制脑胶质瘤细胞的生长〔6〕。本文将进一步研究五味子多糖对体外培养脑胶质瘤细胞株(SHG-44)细胞VEGF表达的影响，旨在探讨五味子多糖抑制脑肿瘤细胞生长的机制。

1 材料与方法

1.1细胞和主要试剂 SHG-44细胞(吉林大学第一医院神经外科于洪泉主治医师提供)，细胞培养基RPMI-1640 (美国Hyclone公司)，0.25％胰蛋白酶、小牛血清(美国Gibco公司)，五味子多糖(北华大学提供)，VEGF兔抗人多克隆抗体(北京中杉公司)。

1.2SHG-44细胞的培养 从液氮中取出冻存的SHG-44细胞，迅速放入37℃水浴箱中摇动溶解，然后将细胞接种于培养瓶中，加入10 ml含10％小牛血清的RPMI-1640细胞培养液，将其置入37℃、5％CO2及饱和湿度培养箱中培养，隔日换液。

1.3酶联免疫吸附法测定培养细胞上清中VEGF蛋白 将SHG-44细胞用0.25％胰酶消化，24孔培养板中接种细胞悬液，实验分为空白对照组(不含药物)和3个加药组(五味子多糖浓度分别为1.25、2.5、5 mmol/L)，作用48 h，每组设5个复孔，加药期间用含5％小牛血清的RPMI-1640培养基培养细胞。取细胞培养上清，将上清液与包被液按1∶1的比例加入96孔酶标板中(空白对照组为100％包被液)，4℃过夜。封闭后加入VEGF兔抗人多克隆抗体(1∶500稀释)4℃过夜。加入二抗(1∶1 000稀释)，室温孵育2 h，二氨基联苯胺(DAB)显色液室温避光3～5 min，当有颜色变化时加入终止液。酶联免疫检测仪492 nm处测定吸光度(A)值。用空白对照组(无细胞)调零。

1.4统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行分析，组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。

2 结 果

2.1五味子多糖作用后细胞分泌VEGF蛋白的变化 1.25、2.5、5 mmol/L浓度的五味子多糖作用SHG-44细胞48 h后，酶联免疫吸附实验检测发现，SHG-44细胞分泌VEGF蛋白的水平不同，1.25和2.5 mmol/L浓度组SHG-44细胞分泌VEGF蛋白水平呈下降趋势，但与对照组相比，无统计学意义(P>0.05)；而5 mmol/L浓度组SHG-44细胞分泌VEGF蛋白水平明显降低，与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。见图1。

图1 五味子多糖作用后SHG-44细胞分泌VEGF蛋白的变化

3 讨 论

脑胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，发病率和死亡率都很高，病程难以控制，目前治疗方案仍然是手术切除辅以放疗和化疗等综合治疗为主。肿瘤生长、转移、复发所需的氧气和营养物质必须从肿瘤的新生血管中来获得，如果肿瘤在生成过程中没有新的血管生成，那么，即使是超过1 mm3体积大小的实体瘤也会因从血管中得不到赖以生存的氧气和营养而发生休眠、坏死或凋亡〔7，8〕。这些都充分说明了肿瘤的生长和转移在很大程度上依赖于肿瘤中新生血管的形成，新生血管的形成是肿瘤生长的必要条件〔9〕。所以，肿瘤中新生血管的形成是肿瘤快速生长的物质基础。对于肿瘤而言，抑制肿瘤细胞增殖是抗肿瘤治疗的一个重要环节〔10〕。抑制新生血管的生成无疑是一种简单而有效的治疗策略。

VEGF广泛分布于人和动物大脑、肾脏、肝脏、脾脏、胰腺和骨骼等组织中，正常成人体内维持在一个较低水平。只有在生理需要或病理的情况下，如胚胎形成、骨骼生长及肿瘤形成的过程中出现VEGF过度表达，促使血管生成急剧增加〔11〕。五味子抗肿瘤作用主要集中在木脂素和多糖部位〔12〕，其中，五味子多糖是其抗肿瘤的主要成分之一，药理学研究发现，五味子具有包括抗肿瘤作用在内的多种活性作用〔3～5〕。

本研究结果与本课题组前期研究发现五味子多糖可以抑制脑胶质瘤细胞生长的结果一致〔6〕。说明五味子多糖可能是通过抑制肿瘤细胞分泌VEGF表达，从而发挥其抗肿瘤作用。

4 参考文献

1师 蔚，郭振宇.脑胶质瘤发病机制、诊断与治疗的研究进展〔J〕.中华神经医学杂志，2007;6(9)：869-71.

2Yancopoulos GD，Davis S，Gale NW，etal.Vascular-specific growth factors and blood-vessel for mation〔J〕.Nature，2000;407(6801)：242-8.

3王艳杰，吴勃岩，孙 阳，等.五味子多糖对H22、S180荷瘤小鼠抑制作用的实验研究〔J〕.中医药信息，2007;24(5)：64-5.

4许珂玉，肖建英.五味子多糖对甲状腺癌细胞株SW579凋亡及survivin表达的影响〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2011;37(2)：279-83.

5Chiu PY，Lam PY，Yan CW，etal.Schisandrin B protects against solar irradiation-induced oxidative injury in BJ human fibroblasts〔J〕.Fitoterapia，2011;82(4)：682-91.

6温 娜，唐泽波，袁 瑞，等.五味子粗多糖对脑胶质瘤细胞生长的作用〔J〕.中国老年学杂志，2013;33(12)：2837-8.

7Folkman J，Kalluri R.Cancer without disease〔J〕.Nature，2004;427(6977)：787.

8Naumov GN，Folkman J，Straume O.Tumor dormancy due to failure of angiogenesis:rloe of the microenvironment〔J〕.Clin Exp，2009;26(1)：51-60.

9Weidner N.Tumoural vascularity as a prognostic factor in cancer patients：the evidence continue to grow〔J〕.J Pathl，1998;184(2)：119-22.

10杜海爽，郭玲玲，顾振纶，等.冬凌草甲素对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制作用及其机制〔J〕.苏州大学学报医学版，2010;30(3)：473-6.

11于英君，周 群，贠可力，等.半枝莲多糖辅助化疗药物对小鼠血清TNF-α、VEGF表达的影响〔J〕.中医药信息，2010;27(1)：29-31.

12郑占虎，董泽宏，佘 靖.中药现代研究与临床应用(第一卷)〔M〕.北京：学苑出版社，1997:148-56.