直肠癌术后组织中KLF-4、KLF-6和caveolin-1的表达及意义

杨培雄 李琳业 吴占庆 才保加 周 伟

(青海大学附属医院创伤急救中心外科,青海 西宁 810000)

直肠癌常见于中老年人，尤其见于伴有肠道息肉综合征的患者。本病是由直肠黏膜上皮来源的恶性肿瘤，具有明显肌层浸润性生长的特征。直肠癌以腺癌为主，机体蛋白表达的失常是重要诱发因素〔1〕。KLF-4、KLF-6是机体中存在的一种多功能转录因子，正常时高表达于上皮细胞，可以抑制肿瘤性增殖和黏附改变〔2，3〕。窖结构是一种细胞质膜向内凹陷形成的小窝结构，呈现出囊状结构的脂筏，窖蛋白(Caveolin)-1是此种结构的标志性蛋白，不仅表现在许多正常的生理现象中，还对信号转导、血管生成和肿瘤的进程有重要促进作用〔4，5〕。本文关注直肠癌术后组织中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1的表达特征及相关性。

1 材料与方法

1.1一般资料 2010年1月至2013年12月我院直肠腺癌行根治手术的患者110例作为观察组，均符合WHO中的诊断标准，并经病理科医师确诊，男60例，女50例；年龄54～79岁，平均(66.4±5.3)岁。50例直肠黏膜上皮内瘤变的组织作为对照组，年龄53～76岁，平均(66.1±5.5)岁；男26例，女24例。50例正常的直肠黏膜组织作为正常对照组，年龄50～70岁，平均(59.9±5.9)岁；男27例，女23例。3组一般临床资料无明显差别，具有可比性。

1.2KLF-4、KLF-6和Caveolin-1蛋白的检测方法 KLF-4、KLF-6和Caveolin-1蛋白均为浓缩液，购自武汉博士德生物工程公司。抗体均进行预实验，选择最理想的配比浓度进行正式实验。KLF-4、KLF-6和Caveolin-1蛋白的正式实验应用免疫组化SP法，DAB染色，严格按说明书操作，严格质量控制，努力减少人为误差。

1.3KLF-4、KLF-6和Caveolin-1结果的判定方法 KLF-4和KLF-6均以细胞核中显现棕黄色颗粒为阳性细胞，Caveolin-1以细胞质和(或)膜中显现棕黄色颗粒为阳性细胞，每张切片计数10个高倍(400倍)视野，计数阳性细胞的百分率，取其平均值。KLF-4、KLF-6和Caveolin-1均以阳性率≥5％计为阳性，以阳性率<5％计为阴性。

1.4统计学方法 应用SAS6.12软件进行χ2检验和线性相关分析。

2 结 果

2.13组KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表达的比较 3组KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表达阳性率差异显著(P<0.000 1)。见表1。

表1 3组KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表达的比较〔n(％)〕

2.2观察组不同临床特征中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表达阳性率的比较 观察组KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表达的阳性率均与肿瘤的最大径线、TNM分期、脉管浸润和肠周淋巴结检出数量密切相关。见表2。

表2 观察组不同临床特征中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表达阳性率的比较〔n(％)〕

2.3观察组中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表达相关性 观察组中KLF-4与KLF-6(r=0.45，P=0.0420)的表达呈正相关。其他指标间未见明显相关性(P>0.05)。

3 讨 论

直肠癌特点是向下浸润性生长，大部分肿瘤形成腺样结构，腺腔内常包含细胞碎屑。肿瘤进展时常沿管壁延伸，侵过肌层到直肠旁组织，并可以侵犯邻近结构。在肿瘤性病变进展中，机体癌相关基因异常表达，使正常的平衡失调，加速病变进展〔6〕。KLF家族是真核生物中广泛存在的一类基因和蛋白，广泛参与细胞的增殖和分化过程。KLF-4和KLF-6是家族中的重要蛋白，二者在细胞生长分化过程中的作用常一致，并被认为肿瘤的抑制基因〔7，8〕。Chen等〔9〕认为KLF-4高表达可以抑制细胞周期中G1向S期转变，进而抑制细胞增殖，发挥抑癌基因的作用。也有研究认为KLF-4和KLF-6 高表达可以抑制细胞DNA的合成及细胞繁殖〔10，11〕。也有观点认为KLF4和KLF-6通过调节下游相关靶基因转录过程，使二者参与细胞的周期调控、增生分化与程序性死亡〔12，13〕。也有观点认为KLF-6可以作用于缺乏TATA盒的核心启动元件，通过参与细胞分化、发育、生长信号的转导、细胞增殖和凋亡过程发挥作用〔14〕。近来也有学者发现KLF-6可以有效调节P21WAFI/CIP1的活化，进而有效抑制肿瘤细胞的增殖过程，抑制细胞周期素D1的活性，有效抑制细胞周期的进展，调节增殖全过程〔15〕。Caveolin-1是1953年发现的，曾被命名为质膜囊泡，富含胆固醇和鞘磷脂，在多种细胞中高表达，尤其是内皮细胞、成纤维细胞、脂肪细胞等细胞中含量丰富〔16〕。Caveolin-1可以对多种关键信号分子的活性状态起直接调节作用〔17〕。

本实验结果提示KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表达的丢失或下降使直肠黏膜形成恶性转变。此时细胞异型程度增加，细胞增殖活跃，肿瘤体积增大，侵袭能力增强。KLF-4、KLF-6和Caveolin-1三种蛋白参与肿瘤的生长及浸润过程，KLF-4、KLF-6和Caveolin-1的抑癌作用丢失后，癌基因相对激活，从而引起细胞增殖分化失控、凋亡障碍以及血管生成通路异常，加速肿瘤的进展。近年评估直肠腺癌的高危因素除了分化程度低、血管淋巴侵犯及淋巴结转移外〔18〕，多项研究在关注肠周淋巴结的检出数量，并认为肠周淋巴结检出数量小于12个的患者，无论是否伴有转移，均提示亦为高危因素或预后不良〔19，20〕。而对于淋巴结检出数量>12个的病例，显示出明显的反应性增生的特征，是机体免疫力增加和抗肿瘤能力的表现。本实验提示KLF-4、KLF-6和Caveolin-1，三种蛋白可能与肠周的淋巴结反应具有一定关联性，也提示肠周淋巴结检出<12个的患者KLF-4、KLF-6和Caveolin-1的表达下降，因此正常情况下KLF-4、KLF-6和Caveolin-1在发挥抑癌作用的过程中，可能对肠周淋巴结的转移起到一定抑制的作用，即三者可能具有多元性的作用特征。KLF-4和KLF-6具有协同正向作用。近年也有学者认为Caveolin-1对肿瘤血管生成有影响，因此Caveolin-1作用也可能与肿瘤细胞的失控性增殖和血管生成有关〔21〕，但是其作用过程需待证实。

4 参考文献

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