AKT2、PTEN在胃癌组织中的表达及临床意义

谭莉莉 魏亚飞 张 烨 魏亚宁

(河北大学附属医院，河北 保定 071000)

胃癌的病因及发病机制尚不清晰，以致缺乏有效的临床干预措施及策略〔1,2〕。本研究拟以癌基因AKT2以及抑癌基因张力蛋白同源、第10号染色体丢失的磷酸酶基因 (PTEN)为切入点，通过检测二者在胃癌组织、正常胃组织以及萎缩性胃炎组织中的不同表达，探讨其在胃癌发病中的意义。

1 对象和方法

1.1研究对象 选择2011年3月至2013年3月在我院外科进行手术治疗且经病理证实的原发性胃癌患者68例，男41例，女27例；年龄23～75〔平均(56.8±2.7)〕岁；肿瘤分化程度：未分化癌 8例，低分化癌24例，中分化癌26例，高分化癌10例；淋巴结转移：有转移38例，无转移30例；病理分类：腺癌58例，黏液细胞癌6例，印戒细胞癌4例；癌症分期：根据2010年美国癌症联合委员会公布的胃癌TNM分期标准，Ⅰ、Ⅱ期39例，Ⅲ、Ⅳ期29例。所有患者术前均未行放、化疗者，术中取所有患者胃癌组织以及18例患者的癌旁正常组织标本(距肿瘤边缘>5 cm)为研究对象。同时，取我院消化科收治的42例萎缩性胃炎的胃镜活检标本进行对照研究。

1.2研究方法 试剂：兔抗人AKT2单克隆抗体，购自美国 Cell Signaling Technology 公司；鼠抗人PTEN单克隆抗体，购自北京博奥森生物技术有限公司；通用型免疫组化(SP)试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒以及苏木紫体细胞快速染色液均购自北京中杉生物技术有限公司。采用SP法分别检测胃癌组织、癌旁正常组织以及萎缩性胃炎组织中的AKT2和PTEN蛋白表达情况，具体步骤按照试剂盒说明书进行，选用已知阳性胃癌切片作为阳性对照组，采用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗做阴性对照。

1.3结果判定 本研究中切片染色结果均由我院病理科经验丰富的同一位医师进行评估，所有结果均采用奥林巴斯光学显微镜，其中AKT2阳性染色主要定位于细胞质，为棕黄色颗粒；PTEN染色定位在细胞质内，为棕黄色、棕褐色颗粒，结果参照Dummler等〔3〕研究中，随机选择10个高倍镜视野，每个视野计数100个细胞，根据染色细胞所占比例进行分级，最终计算阳性细胞的百分率，其中百分率<10％为阴性(-)；百分率≥10％为阳性，分为(+)、()、()三个等级。

1.4统计学方法 应用SPSS17.0软件行χ2检验，两者之间的相关性采用Spearman相关分析。

2 结 果

2.1AKT-2在不同组织中的表达 胃癌组织与萎缩性胃炎组织中AKT-2阳性率高于癌旁正常组织(P<0.01)；胃癌组织中AKT-2阳性率亦明显高于萎缩性胃炎组织(P<0.05)。见表1。

2.2PTEN在不同组织中的表达 胃癌组织与萎缩性胃炎组织中PTEN阳性率低于癌旁正常组织(P<0.01)；胃癌组织中PTEN阳性率亦低于萎缩性胃炎组织(P<0.01)。见表2。

2.3AKT2、PTEN表达与胃癌患者临床病理因素的关系 AKT2、PTEN的表达与肿瘤分化程度、有无淋巴转移及临床分期具有相关性(P<0.05)，而与性别、年龄不具有相关性(P>0.05)。见表3。

表1 AKT-2在不同组织中的表达比较(n)

表2 PTEN在不同组织中的表达比较(n)

表3 AKT2、PTEN表达与胃癌患者临床病理因素的关系

2.4胃癌患者中AKT2、PTEN表达的相关性 胃癌组织中PTEN和AKT2蛋白表达强度呈明显负相关(r=-0.349，P<0.05)，胃癌组织中AKT2表达愈强，PTEN蛋白表达就愈弱。

3 讨 论

已有研究证实，胃癌的发病是一种在多基因与多表观遗传事件共同作用下的复杂过程，并与多种癌基因的激活及抑癌基因的异常表达有关，正常组织获得恶性表型需要两类基因，即：原癌基因激活和(或)抑癌基因突变失活以及DNA错配修复基因造成的不稳定性共同改变逐渐积累而成〔4〕，而AKT2作为原癌基因，是丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)的亚型之一，可诱发细胞的恶性转化，其作为信号传导通路PI3K/AKT的重要组成部分，与肿瘤发生、发展密切相关，主要表现在其可对于肿瘤细胞的恶性增殖、血管生成和转移以及对放化疗拮抗发挥重要作用〔5〕。国内外研究证实，可在人类肿瘤组织中较多的检测到该基因扩增和过度表达，主要可能与其通过调节β1-整合素以及基质金属蛋白酶(MMP)-2、9蛋白表达，加速肿瘤细胞的侵袭和转移，从而促使小鼠成纤维细胞株(NIH3T3)细胞发生恶性转化有关〔6，7〕。

迄今为止，PTEN是被发现的第1个具有磷酸酶活性的抑癌基因，该基因既可以通过拮抗PI3K/AKT信号传导通路，调节细胞周期进程和凋亡而影响细胞生长，也可以通过其本身具有的蛋白酪氨酸磷酸酶活性，作用于黏着斑激酶(FAK)等，进而达到调控细胞黏附、迁移，从而发挥促分裂原活化蛋白(MAPK)途径抑制细胞分化的功效〔8〕。故而探讨其上述两指标在胃癌中的表达及相关性，或对早期诊断胃癌有所裨益。

本研究结果显示，在肿瘤的恶性增殖和侵袭转移中与AKT2的表达水平和激酶活性具有相关性，该指标是判断淋巴结转移的重要标志；而PTEN在低未分化胃癌的表达率低于高中分化胃癌，说明PTEN的缺失率随着肿瘤恶性程度的增加而增加，其缺失贯穿于胃癌的整个发生与发展过程之中。同时，本研究证实了PTEN对于AKT通路的负性调控机制〔9〕，具体为PTEN蛋白的失活可能导致AKT2丧失其调节能力，从而无法对细胞恶性转化和增殖发挥作用，诱发胃癌。

4 参考文献

1张雪梅，高 峰，刘 兴，等.新疆维吾尔自治区20年间胃癌的临床特点分析〔J〕.现代生物医学进展，2014；14(1)：136-9.

2苗丽君，孙振涛，王 静，等.磷酸化AKT、AKT2、PTEN在NSCLC中的表达及意义〔J〕.肿瘤防治研究，2007;34(5)：328-30.

3Dummler B，Tschopp O，Hynx D，etal.Life with a single isoform of Akt：mice lacking Akt2 and Akt3 are viable but display impaired glucose homeostasis and growth deficiencies〔J〕.Mol Cell Biol，2006;26(21)：8042-51.

4刘昌化，林 源.胃癌组织中癌胚抗原检测及应用的研究进展〔J〕.广西医学，2013;35(12)：1699-701，1704.

5邹绍静，陈兆峰，李 敏，等.PI3K/AKT2在胃癌组织表达及其与临床病理特征和生存期的关系〔J〕.实用肿瘤杂志，2011;26(4)：346-50.

6蒲 蓉，李为民，刘 丹，等.AKT2及磷酸化AKT2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义〔J〕.四川大学学报(医学版)，2010;41(4)：586-9.

7Camero A.The PKB/AKT Pathway in cancer〔J〕.Curr Pharm Des,2010；16(1)：34-44.

8李 阳，杜雅菊.抑癌基因PTEN与胃癌的研究进展〔J〕.实用癌症杂志，2013;40(3)：317-9.

9钟 轩，王爱军，王红钰，等.二氢青蒿素通过PTEN/PI3K/Akt通路抑制胃癌细胞的增殖〔J〕.中国肿瘤临床，2013;28(4)：190-4.