MDR1 C3435T基因多态性对胃溃疡患者抗Hp治疗效果的影响

施纯礼 吴丽贤

(福建医科大学第一附属医院，福建 福州 350000)

幽门螺杆菌(HP)感染是引起胃溃疡的重要因素，根治HP是治疗胃溃疡及预防溃疡复发的重要手段，此外，根治HP还能降低慢性胃炎患者胃癌发生率〔1〕。三联疗法是目前治疗HP的常用方法，但随着三联疗法在临床上广泛应用，使得HP耐药性呈上升趋势，从而影响治疗效果〔2〕。近年相关研究指出〔3〕，多耐药基因(MDR)可影响药物转运，增强致病菌耐药性，同时还可参与代谢物在细胞膜间的转运，影响机体正常生理代谢，从而降低药物治疗效果。本文将分析MDR1 C3435T基因多态性对HP阳性胃溃疡患者三联疗法治疗效果的影响。

1 资料及方法

1.1对象 2012年1月至2014年1月选取80例胃溃疡患者为研究对象，入组标准：(1)所有患者经胃镜证实为胃溃疡；(2)所有患者经快速尿素酶实验证实HP阳性；(3)均签署知情同意书，自愿参与研究；(4)无肝肾功能不全等疾病；(5)无对三联疗法过敏的患者；(6)患者治疗前未接受过任何抗菌药物治疗；(7)均为非妊娠期或哺乳期患者。80例患者中男42例，女38例，年龄24～68岁，平均(45.32±2.98)岁，病程3个月～12年，平均(3.85±2.10)年。选取80例非HP胃溃疡患者为对照1组，患者经快速尿素酶实验证实HP阴性，其余纳入标准与观察组相同，男40例，女40例，年龄22～70岁，平均(46.32±2.58)岁，病程3个月～10年，平均(3.75±2.11)年。另选取80例正常健康体检者为对照2组，经各项检查证实机体健康状况良好，男38例，女42例，年龄22～70岁，平均(47.32±2.51)岁。三组患者性别、年龄无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1MDR1 C3435T基因多态性测定 空腹抽取各组静脉血3 ml，经离心处理后留取上清液，采用乙二胺四乙酸二钾抗凝全血标本，采用日本TOYOBO磁珠法DNA提取试剂盒提取DNA，操作过程严格按照试剂盒说明进行，将DNA标本置入-80℃冰箱中保存。DNA引物由北京天一生物技术公司提供。DNA探针(5’-TGCAGCAGATTGGTCCTGAAATAGTA-3’)由北京赛百盛生物技术公司提供。rs505922基因点突变扩增片段长度为164 bp，分别在突变型及野生型引物上游3'端-2位置引入错配碱基“G”(突变引物：5’-GAGCCAAGACTTGTCCCCGG-3’,野生引物：5’-GAGCCAAGACTTGTCCCCGA-3’)。反应条件：先在42℃反向转录30 min,随后将温度变为95℃将DNA变性2 min，然后于55℃中15 s、72℃中30 s以及95℃中30 s反复循环扩增，并在退火阶段收集荧光信号。采用荧光定量PCR仪测定TapMan探针上的FAM荧光信号。等位基因频率=(2×纯合子+杂合子)/(2×受体人数)。按照Hardy-Weinberg平衡法对群体代表样本进行分析。

1.2.2HP阳性胃溃疡治疗方法 观察组患者给予三联疗法治疗：兰索拉唑30 mg/次，2次/d；阿莫西林1 000 mg/次，2次/d；克拉霉素500 mg/次，2次/d，持续用药14 d，治疗结束后经快速尿素酶实验对患者HP阳性情况进行测定。同时对患者进行药敏性试验，观察不同基因型HP阳性胃溃疡患者HP耐药情况，药敏试验试剂盒由美国Sigma公司提供，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.3统计学分析 采用SPSS17.0软件行χ2检验。

2 结 果

2.1不同组别患者MDR1 C3435T基因比例 与对照1组及对照2组相比，观察组患者TT型MDR1 C3435T基因比例显著高于对照组，T等位基因频率高于对照1组及对照2组(P<0.05)。与对照2组相比，对照1组患者CT型、TT型MDR1 C3435T基因比例及T等位基因频率较高(P<0.05)。见表1。

表1 不同组别患者MDR1 C3435T基因比例〔n(％),n=80〕

2.2HP阳性胃溃疡患者不同基因型对抗HP治疗效果的影响 观察组患者中TT基因型患者经三联疗法治疗后HP阳性率及耐药率较高(P<0.05)，见表2。

表2 HP阳性胃溃疡患者基因型对抗HP治疗效果的影响〔n(％)〕

3 讨 论

MDR1基因位于人体第7号染色体上，其编码的P-糖蛋白属于ABC蛋白家族的一员。P-糖蛋白具有调节细胞跨膜运动及物质转运的功能，可将药物从细胞内转移至细胞外，从而降低细胞内药物浓度，使细胞获得耐药性〔4〕。P-糖蛋白不仅可在正常组织中表达，同时也可在肿瘤组织中表达，并发挥不同的生理功能。MDR1基因多态性可影响P-糖蛋白表达水平，从而影响物质代谢及机体药代动力学水平。相关研究指出〔5〕，P-糖蛋白在细胞内可作为细胞底物，在体内药物处置、转运及吸收过程中发挥重要作用，从而影响这些药物在胃肠道中的吸收及肾脏中的排泄。同时，MDR1基因多态性可影响P-糖蛋白生理学特征，导致P-糖蛋白在机体中过表达，导致机体正常生理代谢水平受影响，并引起各种疾病。谢伟东〔6〕认为MDR1基因多态性可导致P-糖蛋白生理活性发生变化，从而增加机体耐药性。

本研究结果显示，在HP阳性胃溃疡患者体内MDR1 C3435基因发生显著突变，且这种突变可增强机体耐药性，影响抗HP治疗的效果。研究认为〔7〕，引起机体基因突变的因素较多，包括环境、机体自身免疫失衡及微生物等，当机体感染HP后，体内抗原反应增强，从而促进机体大量释放各种炎症因子及细胞因子，并导致机体出现级联反应，从而进一步加强炎症反应，使得机体免疫系统失衡，并引起机体一系列的病理生理变化，而基因突变就是其中一种。钱春野等〔8〕采用PCR测定不同基因型胃溃疡患者MDR基因多态性，结果显示HP阳性胃溃疡患者TT基因型比例较高，且患者胃癌发生率较高，本研究结果与钱春野等〔8〕研究结果一致，表明MDR1 C3435T基因型可影响HP阳性胃溃疡患者三联疗法治疗效果。

4 参考文献

1张宇光,孙艳荪,周晓初，等.多药耐药基因1 C3435T基因多态性对胃溃疡患者抗幽门螺杆菌治疗的影响〔J〕.中国医师进修杂志,2013;36(19):4-6.

2张宇光,孙艳荪,周晓初,等.CYP2C19基因多态性对胃溃疡患者抗Hp治疗的影响〔J〕.成都医学院学报,2013;8(3):310-2.

3段智慧,常晓悦.MDR1基因C3435T单核苷酸多态性研究进展〔J〕.国际呼吸杂志,2012;32(23):1821-4.

4胡秀学,赵 颖,杜汉芳,等.MDR1基因在胃癌组织中的表达及意义〔J〕.现代检验医学杂志,2012;27(1):79-81.

5王红兵,陈卫昌.胃癌患者外周血与胃癌组织中ERCC1基因甲基化的关系及其意义〔J〕.中国癌症杂志,2013;(11):900-3.

6谢伟东.根除幽门螺旋杆菌治疗对消化性溃疡患者血清胃泌素及胃泌素基因表达水平的影响研究〔J〕.吉林医学,2013;34(31):6532-3.

7徐小琴.根除幽门螺杆菌治疗对消化性溃疡患者血清胃泌素及胃泌素基因表达水平的影响研究〔J〕.河北医学,2013;19(3):339-41.

8钱春野,杨留才,周 娟,等.hPOT1基因表达与胃癌发生发展的相关性〔J〕.江苏医药,2012;38(21):2549-51.