染色体12p13 rs12425791多态性与老年人血脂代谢的相关性

马春林 谢娟娟 宋旭津 陈 清 苏 莉 古 联

(广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530023)

缺血性脑卒中是一种多基因复杂疾病，而血脂异常是缺血性脑卒中最常见的危险因素之一，全基因组关联研究(GWAS)发现染色体12p13上NINJ2基因附近的遗传多态性rs12425791与缺血性脑卒中的关联达到GWAS显著性水准〔1〕。rs12425791被认为是很有希望的缺血性脑卒中的易感遗传变异。本研究旨在分析GWAS支持的遗传变异rs12425791与老年人血脂代谢的相关性。

1 对象与方法

1.1对象 2009年7月至2011年6月期间，在广西中医药大学第一附属医院体检中心进行健康体检的60岁以上老年人，共143例。其中，男102例、女41例，平均年龄(70.32±8.56)岁。排除有脑卒中、脑动脉瘤、阿尔茨海默病、痴呆、帕金森病等神经精神疾病病史者。研究对象均知情同意，无亲缘关系。经HWE检验rs12425791基因型在143例老年体检者的频数分布符合HarDY-Weinberg平衡定律(P>0.05)，说明所应用的抽样群体适合于遗传分析。

1.2标本采集及血脂检测 于体检当日上午空腹抽取外周血液标本5 ml，分为抗凝血和非抗凝血。抗凝血置于-4℃保存，并于3 d内提取血液基因组DNA。将非抗凝管血进行血脂水平检测，采用日立 7600全自动生化分析仪来检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)水平。血脂异常：根据中国成人血脂异常诊断标准〔2〕，TC≥6.22 mmol/L为TC升高，TG≥2.26 mmol/L为TG升高，LDL≥4.14 mmol/ L为LDL升高，HDL<1.04 mmol/L为HDL降低。

1.3DNA提取及基因分型 采用天根科技(北京)有限公司生产的血液基因组DNA提取试剂盒〔TIANamp Blood DNA Kit(离心柱形)〕提取血液基因组DNA，试剂盒目录号为DP318DNA，按照产品说明书所述步骤提取血液基因组DNA。将提取后的DNA分装为3管，置于-20℃保存备用。使用美国应用生物系统(ABI) 公司生产的ABI7500 Fast 实时荧光定量PCR仪TaqMan SNP基因分型试剂盒〔试剂盒包括2×通用PCR预混试剂Universal PCR Master mix (无AmpErase UNG酶)，40×SNP 基因分型试剂Genotyping Assay Mix〕，运用TaqMan MGB探针等位基因分型技术进行rs12425791遗传多态性的基因分型。PCR反应体系的总体积为10 μl，包含：基因组DNA，1.00 μl ；无核酸H2O，3.75 μl；Assay-on-Demand SNP Genotyping Assay Mix(40×)，0.25 μl；2×TaqMan Universal PCR Mix，5.00 μl。PCR反应条件为：预变性95℃ 10 min，变性92℃ 15 s、退火60℃ 1 min，变性以及退火程序循环43次。对实验操作者进行设盲，使其在进行基因分型实验操作时不知道标本的病例/对照状态；每次96孔PCR反应板均设置2个空白对照、并设置3个随机重复样本作为阳性对照；随机抽取总检测样本的5％做盲法重复测定，测定结果一致率达100％。

1.4统计学方法 运用SPSS16.0软件进行统计学分析，组间比较行χ2和t检验。

2 结 果

2.1不同rs12425791基因型老年人的血脂水平比较 G/G基因型携带者与(G/A+A/A)组在TC、TG、LDL、HDL水平上的分布差异均无统计学意义(P>0.050)；G等位基因携带者与A等位基因携带者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差异也均无统计学意义(P>0.050)。见表1。

2.2不同rs12425791等位基因老年人血脂异常比较 G/G基因型携带者与(G/A+A/A)组在TC升高、TG升高、LDL升高、HDL降低异常率上的差异均无统计学意义(P>0.050)；G等位基因携带者与A等位基因携带者在TC升高、TG升高、LDL升高、HDL降低异常率上的差异也均无统计学意义(P>0.050)。见表2。

表1 不同rs12425791基因型、等位基因老年人血脂水平比较

表2 不同rs12425791基因型、等位基因老年人血脂异常率比较〔n(％)〕

3 讨 论

多年来，国内外学者进行了有关易感基因遗传多态性与血脂异常的相关性，以探讨遗传因素对血脂异常的影响。近期Kornfeld等〔3〕报道在非糖尿病人群中STAT5B基因的遗传变异rs8082391和rs8064638与血清TC和LDL水平显著关联，Kiyomi等〔4〕报道APOA4基因360Hs等位基因与TG升高和HDL降低发生率显著关联；而国内张明明等〔5〕报道固醇酯转运蛋白(CETP)基因D442G突变与高胆固醇血症显著相关，而何美霞等〔6〕报道IL-6 -634 CG及GG 基因型和G 等位基因携带者具有高脂血症易感性。

近两年来，各国学者进行了多个有关于rs12425791遗传多态性与缺血性脑卒中的关联研究，但研究结果不一致〔7～9〕。NINJ2基因编码ninjurin2蛋白，ninjurin2是一种嗜同种的与基质金属蛋白酶相互作用的细胞-细胞黏附分子〔10〕，在人类骨髓、外周白细胞、肺和淋巴结中高表达，但目前NINJ2基因对缺血性脑卒中的功能作用在很大程度上仍是不清楚的，NINJ2基因遗传变异作用于缺血性脑卒中的功能机制值得探索。本文探索NINJ2基因附近的遗传变异rs12425791与缺血性脑卒中危险因素的相关性，而rs12425791与血脂代谢的数量性状和质量性状的相关性研究目前尚未见文献报道，本研究表明染色体12p13上的遗传变异rs12425791与血脂代谢的数量性状和质量性状均无显著关联。本研究提示，rs12425791遗传多态性可能与血脂代谢无关联，NINJ2基因可能不是通过影响血脂代谢来作用于缺血性脑卒中的病因机制的，但还有待于更大样本量的同类研究来验证。

4 参考文献

1Ikram MA，Seshadri S，Bis JC,etal.Genome wide association studies of stroke〔J〕.N Engl J Med,2009；360(17):1718-28.

2中国成人血脂异常防治指南制订联合委员会.中国成人血脂异常防治指南〔J〕.中华心血管杂志，2007；35(5)：392.

3Kornfeld JW，Isaacs A，Vitart V,etal.Variants in STAT5B associate with serum TC and LDL-C levels〔J〕.J Clin Endocrinol Metab，2011；96(9):E1496-501.

4Kiyomi V，Bsc O，Suchi E,etal.APOA4 polymorphism as a risk factor for unfavorable lipid serum profile and depression：a cross-sectional study〔J〕.J Invest Med,2011；59(6):966-70.

5张明明，帖彦青，马 倩，等.CETP基因D442G突变与高胆固醇血症的相关性.中国老年学杂志，2011；31(14)：2621-4.

6何美霞，张明明，刘 琼，等.白细胞介素-6基因多态性与高脂血症的相关性〔J〕.中国老年学杂志，2011；1：23-5.

7Failure to validate association between 12p13 variants and ischemic stroke〔J〕.N Engl J Med,2010；362(16):1547-50.

8Matsushita T，Umeno J，Hirakawa Y,etal.Association study of the polymorphisms on chromosome 12p13 with atherothrombotic stroke in the Japanese population〔J〕.J Hum Genet,2010；55(7):473-6.

9Ding H，Tu X，Xu Y,etal.No evidence for association of 12p13 SNPs rs11833579 and rs12425791 within NINJ2 gene with ischemic stroke in Chinese Han population〔J〕.Atherosclerosis,2011；216(2):381-2.

10Zhang S，Dailey GM，Kwan E,etal.An MMP liberates the Ninjurin A ectodomain to signal a loss of cell adhesion〔J〕.Genes Dev,2006；20(14):1899-910.