MMP-2和HBME-1在分化型甲状腺癌中的表达及其临床意义

张笑男 曹万辉 张晓平

(吉林大学第一临床医院甲状腺外科，吉林 长春 130021)

甲状腺癌是最常见的头颈部恶性肿瘤，临床常见病例为分化型甲状腺癌。尽管手术是治疗分化型甲状腺癌最有效的手段，但侵袭和转移确实被认为是复发和死亡的主要原因。因此其他治疗方法如放疗也被采用，但是随着分子生物化学技术的发展，研究者们热忠研究甲状腺癌特异性标志的蛋白质和基因，但尚无进展。因此，人们通过不同标志物的联合检测来达到比较和互补。本研究的目的是观察基质金属蛋白酶(MMP)-2和间皮瘤相关抗体-1(HBME-1)的联合表达，并探索他们在诊断和预后中的作用。

1 材料和方法

1.1组织样本 50例甲状腺癌病例取自吉林大学第一医院2006～2009年手术切除病理科成档的在蜡标本，其中男14例，女36例，中位年龄44岁，未经治疗。另外55例良性甲状腺滤泡组织包括15例增生的结节，15例滤泡性腺瘤，25例正常甲状腺滤泡组织。磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗设阴性对照。

1.2临床病理资料 有关甲状腺癌的分期，目前最常用的是TNM 分期。根据1997年国际抗癌联盟和美国癌症协会2002年第6次修定的TNM 分期标准，Ⅰ+Ⅱ期33例，Ⅲ+Ⅳ期17例。所有癌症病例中<45岁者33例，≥45岁者17例；肿瘤直径≤2 cm者27例，肿瘤直径>2 cm者23例；有淋巴结转移者21例，无淋巴结转移者29例；

1.3结果判断 所有免疫组织化学切片均由甲状腺外科医生和病理科医生双盲诊断，差异为5%～10%，然后共同决定诊断。以细胞质内和(或)细胞膜上有棕黄色颗粒且染色强度高于背景的非特异性着色者为阳性细胞。每张切片均选取5个高倍视野(×400),分别计数每一视野中阳性细胞占总细胞数的百分数。5个视野阳性细胞百分数，为该阳性细胞百分数结果。参考Cheung等〔1〕介绍的方法，根据着色程度和范围，以无着染细胞或着染细胞<10%计为阴性，阳性病例分为：“+”为着染细胞数≥10%而<25%；“”为着染细胞数≥25%而<50%；“”为着染细胞数≥50%而<75%。其中“+”“”“”和“”合计为阳性例数。HBME-1染色表现为基底膜和管腔表面染色〔2〕，MMP-2表现为细胞质染色。

1.4统计学方法 采用SPSS10.0软件，应用χ2检验，灵敏度=癌的阳性例数/癌的总数×100%;特异度=良性的阴性例数/良性的总例数×100%；准确度=(癌的阳性例数+良性的阴性例数)/(癌的总例数+良性的总例数)。

2 结 果

2.1MMP-2、HBME-1的表达 50例分化型甲状腺癌中MMP-2阳性(64%)明显高于对照组(25%，P<0.01)。乳头状癌(82.9%)高于滤泡状癌(20.0%，P<0.01)。 50例分化型甲状腺癌中98%HBME-1表达阳性，高于对照组(6.7%，P<0.01)。HBME-1在乳头状癌与滤泡状癌中均高表达(100%，93.3%，P>0.05)。

2.2HBME-1、MMP-2在不同分化型甲状腺癌临床病理特征表达 见表1。

表1 MMP-2 及HBME-1在不同临床病理特征甲状腺癌中的表达〔n(%)〕

2.3HBME-1及MMP-2诊断分化型甲状腺癌的敏感性、特异性及准确性 50例中有49例分化型甲状腺癌HBME-1阳性，22例MMP-2阳性。在分化型甲状腺癌组及良性疾病作为对照组中HBME-1及MMP-2具有统计学差异(P<0.01)。对比MMP-2及HBME-1敏感性(64%，98%)、特异性(89.1%，96.4%)和准确性(76.2%，97.2%)，说明HBME-1作为分化型甲状腺癌的标志物优于MMP-2。但是HBME-1鉴别分化型甲状腺癌的亚型——乳头状癌和滤泡状癌时存在缺陷。然而，HBME-1与 MMP-2联合检测可以达到这个目的。

3 讨 论

鉴别滤泡状癌与滤泡状腺瘤及乳头状癌与良性乳头状疾病非常具有挑战性。尽管大多数人认为免疫组化是诊断甲状腺癌的辅助技术，但有人持相反观点认为寻找最佳检测或联合检测鉴别分化型甲状腺癌。本研究证实了HBME-1的作用，并且联合检测HBME-1和 MMP-2对于诊断分化型甲状腺癌有较高的敏感性。HBME-1是针对间皮细胞微绒毛表面的单克隆抗体，尽管这一抗体最开始应用于间皮瘤标志物，但后续用于恶性甲状腺疾病的诊断〔3〕。

肿瘤侵袭是一系列的触发事件，包括从它的原始位置并通过周围基质侵入淋巴血管通路，尽管这些都与细胞外基质降解相关，细胞基底膜成分的蛋白质水解需要特异性蛋白酶。大量研究表明MMPs在肿瘤侵袭和转移中起很重要的作用〔4〕。MMP-2的表达在一系列肿瘤侵袭的指标中尤其重要〔5〕。从其他非实验模型观察及临床研究说明MMP-2在肿瘤侵袭中的重要性〔6〕。事实上，高水平的MMP-2表达与食管癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌及卵巢癌肿瘤侵袭行为及分型相关〔7～11〕。国外的一些研究〔12〕提出MMP-2的高表达与肿瘤大小、淋巴结转移的出现、较高的临床分期、甲状腺外侵犯及血管侵犯具有相关性。Maruyama等〔13〕通过免疫组织化学及定量检测的方法评估MMP-2在甲状腺良性及恶性疾病中的表达。这些结果表明了MMP-2与甲状腺癌恶性进展或转移密切相关。我们的研究得出如下结论：MMP-2的高表达与年龄与性别无关，但对肿瘤大小、包膜侵袭，临床分期和转移有提示意义，这与之前的报告不相符〔14〕。在这个研究中揭示了MMP-2在鉴别乳头状癌中的应用，同时也是分化型甲状腺癌良好的标记物。HBME-1与MMP-2可以相互弥补。对于分化型甲状腺癌HBME-1是优于MMP-2的标记物，因此，当两个标记物都呈阳性表达，那么乳头状癌的可能性就很大。当MMP-2强阳性表达时，很有可能揭示较差的预后。

4 参考文献

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11Auto-Harmainen H,Karttunen T,Hurskainen-Hoyhtyta M,etal. Expression of 72 kda type Ⅳ collagenase(gelatinase A)in benign and malignant ovarian tumors〔J〕.Lab Invest,1993;69(3):312-21.

12Maeta H,Ohgi S,Terada T.Protein expression of matrix metalloproteinases of metalloproteinase 2 and 9 and tissue inhibitors of metalloproteinase 1 and 2 in papillary thyroid carcinomas〔J〕.Virchows Arch,2001;438(2):121-8.

13Maruyama S,Kawata R,Shimada T,etal.Study of matrix metallo-proteinase-2 and -9 in thyroid papillary cancer〔J〕.Nih Jibiinkoka Gakkai Kaiho,2000;103(5):499-505.

14Korem S,Kraiem Z,Shiloni E,etal.Increased expression of matrix metalloproteinase-2:a diagnostic marker but not prognostic marker of papillary thyroid carcinoma〔J〕.Isr Med Assoc J,2002;4(4):247-51.