顶空毛细管气相色谱法测定异丙托溴铵中7种残留有机溶剂

朱蓉，李欣，曹俊涵

(成都市食品药品检测中心，四川 成都610045)

顶空毛细管气相色谱法测定异丙托溴铵中7种残留有机溶剂

朱蓉*，李欣，曹俊涵

(成都市食品药品检测中心，四川 成都610045)

目的:建立顶空毛细管气相色谱法,测定异丙托溴铵中甲醇､丙酮､异丙醇､二氯甲烷､乙酸乙酯､三氯甲烷､甲苯等7种有机溶剂残留量。方法:色谱柱:DM-624(聚乙二醇PEG-20M)毛细管柱(30.0m×0.53mm,3.00μm)；载气:氮气,流速为2.0mL·min-1；柱温:程序升温,初始温度为40℃,保持5min,然后以6℃·min-1升温到150℃,再以50℃·min-1升温到230℃,保持3min；检测器:氢火焰离子化检测器,温度为250℃；进样口温度:240℃；顶空进样量:1.0mL。结果:甲醇､丙酮､异丙醇､二氯甲烷､乙酸乙酯､三氯甲烷和甲苯分别在15.02～900.92mg·L-1(r=0.9999)、21.03～1262.00mg·L-1(r=0.9999)、21.30～1278.16mg·L-1(r=0.9999)、7.80～468.25mg·L-1(r=0.9998)、22.22～1332.97mg·L-1(r=0.9999)、0.31～18.79mg·L-1(r=0.9992)和3.48～209.02mg·L-1(r=0.9998)范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.1%(RSD=0.19%)、100.1%(RSD=1.08%)、101.4%(RSD=1.03%)、98.1%(RSD=0.40%)、98.1%(RSD=1.55%)、98.9%(RSD=3.08%)和101.8%(RSD=2.12%)。结论:该方法简便､灵敏､重复性好,结果准确,适用于异丙托溴铵中残留有机溶剂的检测。

顶空毛细管气相色谱法；异丙托溴铵；残留有机溶剂

异丙托溴铵系对支气管平滑肌有较高选择性的强效抗胆碱药，化学名为3-(3-羟基-1-氧代-2-苯基丙氧基)-8-甲基-8-(1-甲基乙基)-8-氮杂双环辛烷溴化物。其在合成过程中使用的甲醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲苯等有机溶剂，往往还会残留在最终产品中，未能完全除去，且它们均属于二、三类溶剂，对人体和环境有潜在危害，人用药物注册技术要求国际协调会(ICH)颁布的《残留溶剂指导原则》[1]和2010版《中国药典》[2]对异丙托溴铵产品中所涉及的这7种有机溶剂均规定了残留限度。本文参照文献[3]，采用顶空毛细管气相色谱法测定异丙托溴铵中这7种溶剂的残留量，所建立的测定方法简便、灵敏、重复性好，结果准确，适用于异丙托溴铵中残留有机溶剂的检测。

1 仪器与试药

Agilent 6890N 气相色谱仪;顶空进样器(PerkinElmer公司)。甲醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、甲苯、二甲基亚砜(DMSO)均为色谱纯。异丙托溴铵样品(含量100.5%，Aarti Industries有限公司，批号:IB-10002、IB-11001、IB-11002)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:DM-624毛细管柱(30.0m×0.53mm，3.00μm);载气:氮气，流速为2.0 mL·min-1;柱温:程序升温，初始温度为40℃，保持5min，然后以6℃·min-1升温到150℃，再以50℃·min-1升温到230℃，保持3min;检测器:氢火焰离子化检测器(FID)，温度为250℃;进样口温度:240℃;顶空条件:顶空瓶平衡温度为100℃，平衡时间为15min，定量环为1.0mL，定量环温度为110℃，传输管温度为115℃。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液 称取异丙托溴铵样品约0.5g，置于顶空进样瓶中，精密加入DMSO 5mL，用铝隔膜封好瓶口，超声处理，使样品溶解，摇匀，即得。

2.2.2 对照品溶液 精确称取甲醇1.5g、丙酮2.5g、异丙醇2.5g、二氯甲烷0.3g、乙酸乙酯2.5g、三氯甲烷0.03g和甲苯0.45g，置于同一装有100mL DMSO的250mL量瓶中，混合均匀，用DMSO稀释至刻度，摇匀，得储备液;精密量取储备液5mL置于100mL量瓶中用DMSO稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适用性试验

取DMSO空白溶液和对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件，分别进样检测，记录色谱图(见图1)。

图1 系统适用性试验色谱图

由图1可见，7种溶剂均能达到基线分离，DMSO不干扰各溶剂的测定;以甲醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯峰计算的理论塔板数分别为28516、65168、86730、1152494、155837、327212、231278，均不低于5000;根据溶剂出峰顺序，各相邻溶剂峰之间的分离度分别为17.23、1.59、5.07、19.44、4.21、36.38，均大于1.5。

2.4 线性考察

精密称取甲醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯各适量，按表1用DMSO分别稀释并配制这7种溶剂的线性储备液各50mL。

精密量取各储备液适量，分别用DMSO定量稀释并配得不同的7个质量浓度的各溶剂系列标准溶液，进样检测，记录色谱图。以溶剂峰面积(A )对质量浓度(C )进行线性回归，得回归方程和线性范围(见表2)。

表1 7种溶剂线性储备液的配制Table 1 Preparation of the linear stock solutions of seven solvents

表2 7种溶剂的回归方程和线性范围Table 2 Regression equations and linear ranges of seven solvents

2.5 加样回收率试验

精密称取甲醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯各适量，将2010版《中国药典》二部附录中残留溶剂测定法所规定的各溶剂限度[2]视作其含量为100%，精密量取表1中7种溶剂储备液2.0、2.5和3.0mL，分别置100mL量瓶中，用DMSO定容至刻度，摇匀，各精密量取5mL，加入异丙托溴铵样品0.5g(经测定，其中各残留溶剂含量均低于检出限)，混匀，即配得各溶剂含量为80%、100%和120%的样品溶液，每个溶剂含量的样品溶液平行3份，进样检测，记录色谱图，并计算各溶剂的回收率，结果见表3。

表3 7种溶剂的回收率实验结果Table 3 Results of recovery test for seven solvents

2.6 进样精密度试验

精密量取对照品溶液5mL，置于顶空进样瓶中，封瓶并超声处理，连续进样6次，记录色谱图。结果，测得甲醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯的峰面积RSD分别为3.55%、3.50%、3.53%、3.54%、3.57%、3.51%和3.59%(n=6)。

2.7 检测限与定量限考察

精密量取按“2.3”项下方法配制的各溶剂储备液适量，分别用DMSO定量稀释，配得各溶剂不同质量浓度的溶液，进样检测，以信噪比(S/N)为3∶1时测定各溶剂的检测限，以S/N为10∶1时测定各溶剂的定量限，结果见表4。

表4 7种溶剂的检测限和定量限Table 4 Limits of detection and limits of quantification for seven solvents

2.8 重复性试验

称取同一批次异丙托溴铵样品适量(即所含各溶剂残留量约为药典规定限度的样品量)，用DMSO配制供试溶液6份，进样检测。结果，所测供试溶液中甲醇、丙酮、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷和甲苯含量的RSD均小于3.6%(n=6)。

2.9 样品测定

按“2.2.1”项下方法，配制3批次异丙托溴铵样品(批号:IB-10002、IB-11001、IB-11002)的供试品溶液，进样检测。结果，3批次样品中7种残留溶剂含量均低于检测限，其中一批次样品色谱图见图2。

图2 样品色谱图

3 讨论

3.1 进样方式的选择

顶空进样具有选择性好、基质屏蔽作用强等优点，无论从方法的可操作性，还是从色谱仪的保护角度来看，其都是对样品中残留溶剂进行毛细管气相色谱分析时的首选进样方式。且异丙托溴铵中7种残留有机溶剂的沸点均不超过100℃，适于顶空进样。本实验表明，在100℃的加热平衡条件下，各溶剂加样回收率达90%以上，且样品稳定，未发生热分解，所采集的色谱图基线稳定，基本无基质干扰。故选择顶空进样法用于异丙托溴铵中残留溶剂的毛细管气相色谱检测。

3.2 样品溶剂的选择

异丙托溴铵中7种残留有机溶剂的极性跨度大，既有水溶性的，也有非水溶性的，但它们均能很好地溶解于DMSO。因此，选用DMSO作为样品溶剂。

3.3 程序升温的选择

2010版《中国药典》中毛细管顶空进样方法所采用的程序升温步骤[2]不适用于异丙托溴铵中残留有机溶剂的测定，其中初始温度维持时间过长[3]，可导致极性和沸点相差较大但色谱行为相似的丙酮与异丙醇的色谱峰无法达到基线分离;且升温速率过快，可导致二氯甲烷、乙酸乙酯和三氯甲烷峰无法分离。所以，本实验中，为了保障各溶剂峰的分离度符合要求，将初始温度的维持时间选定为5min，并先选择6℃·min-1缓慢升温，待乙酸乙酯峰和三氯甲烷分离出峰后，再以50℃·min-1快速升温到230℃，保证甲苯等弱极性成分及早出峰，尽量缩短分析时间，使样品中7种极性差异较大的残留有机溶剂得到了较为满意的分离检测。

[1]人用药物注册技术要求国际协调会.残留溶剂指导原则[M].北京:人民卫生出版社,2000:236.

[2]国家药典委员会.残留溶剂测定法[M]//中华人民共和国药典(二部).北京:中国医药科技出版社,2010:附录ⅧP.

[3]张亿,朱蓉.顶空毛细管气相色谱法测定西洛他唑中有机溶剂的残留量[J].药物分析杂志,2006,26(7):1026-1027.

Determination of Seven Residual Organic Solvents in Ipratropium Bromide by Headspace Capillary Gas Chromatography

ZHU Rong, LI Xin, CAO Junhan
(Chengdu Center of Food and Drug Control, Chengdu 610045, China)

Objective:To establish a headspace capillary gas chromatography method for the determination of seven organic solvent residues including methanol, acetone, isopropanol, methylene dichloride, ethyl acetate, chloroform and toluene, in ipratropium bromide. Methods:A DM-624(polyethylene glycol PEG-20M) capillary column (30.0m × 0.53mm, 3.00μm) was used with nitrogen as carrier gas at a flow rate of 2.0 mL·min-1, a hydrogen flame ionization detector (FID) at a temperature of 250℃, an inlet temperature of 240℃and a headspace sampling volume of 1.0 mL. The column oven was temperature-programmed as follows: the initial temperature was 40℃for 5 min and then the temperature increased to 150℃at 6℃·min-1and to 230℃at 50℃·min-1for 3 min. Results: The linear ranges of the seven solvents were 15.02-900.92 mg·L-1(r=0.999 9) for methanol, 21.03-1 262.00 mg·L-1(r=0.999 9) for acetone, 21.30-1 278.16 mg·L-1(r=0.999 9) for isopropanol, 7.80-468.25 mg·L-1(r=0.999 8) for methylene dichloride, 22.22-1 332.97 mg·L-1(r=0.999 9) for ethyl acetate, 0.31-18.79 mg·L-1(r=0.999 2) for chloroform and 3.48-209.02 mg·L-1(r=0.999 8) for toluene, respectively. Their average recoveries were 98.1% (RSD=0.19%) for methanol, 100.1% (RSD=1.08%) for acetone, 101.4% (RSD=1.03%) for isopropanol, 98.1% (RSD=0.40%) for methylene dichloride, 98.1% (RSD=1.55%) for ethyl acetate, 98.9% (RSD=3.08%) for chloroform and 101.8% (RSD=2.12%) for toluene, respectively. Conclusion: The method is simple, sensitive, reproducible and accurate. It is suitable for the determination of residual organic solvents in ipratropium bromide.

headspace capillary gas chromatography; ipratropium bromide; residual organic solvent

O657.71；R927.1

B

1001-5094（2014）02-0146-04

接受日期：2013-09-18

*通讯作者：朱蓉，副主任药师，从事化学药品分析工作；

Tel：028-85362213；E-mail：zhur63@126.com