urantide对实验性动脉粥样硬化大鼠肝脏的影响

赵 娟 宋成军 姜菊花 毛晓霞 苗光新 于海荣 李 颖 刘莎莎

(承德医学院病理生理学教研室，河北 承德 067000)

动脉粥样硬化(AS)时由于血脂水平明显升高，超过了肝脏的代谢能力，导致脂肪肝。Schwimmer等〔1〕认为脂肪肝不仅仅是AS的检测指标，而且还是AS早期调节因子，促进AS发生发展。Urantide是在人尾加压素Ⅱ(hUⅡ)基础上衍生的肽类尾加压素Ⅱ(UⅡ)受体拮抗剂，本课题组已证实urantide对AS大鼠胸主动脉有一定的抗损伤作用〔2～4〕，本实验拟进一步研究urantide对AS大鼠肝脏的作用及其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1实验动物、药品及高脂饲料的配制 健康雄性Wistar大鼠160只，体质量180～200 g，由吉林大学白求恩医学部动物部提供〔许可证号：SCXK(吉)-2009-0004〕。urantide由上海华大天源生物科技有限公司合成；氟伐他汀(Flu)购自北京诺华制药有限公司。高脂饲料的配制：基础饲料，3.5%胆固醇，10%猪油，0.2%丙硫氧嘧啶、0.5%胆酸钠，5%白糖。

1.2方法

1.2.1大鼠AS模型复制及实验分组 Wistar大鼠随机分为2组：①正常(NC)组，饲以普通饲料；②模型组，实验开始时在饲以高脂饲料基础上，每只大鼠给予腹腔注射维生素D3(Vit D3)70 U/kg，连续3 d，实验周期为6 w。AS模型复制成功后，模型组再随机分3组：AS组、阳性药(Flu)组、urantide组。正常组和AS组每日尾静脉注射生理盐水30 μg/kg，连续14 d；阳性药组每日给予Flu 5 μg/kg，连续14 d；urantide组每日尾静脉注射urantide 30 μg/kg，给药时间分别为3、7、14 d。

1.2.2标本采集 ①一般状态：每周观察大鼠精神状态及饮食。②胸主动脉标本的采集：大鼠取血后，取胸主动脉约1 cm，用4%多聚甲醛固定，待形态学检测。③肝脏标本采集：大鼠取血后，立即摘取肝脏，生理盐水洗去血迹后称重，计算肝系数(肝系数=肝脏重量/体重)，4%多聚甲醛固定，待形态学检测。

1.2.3肝形态学检测结果判定标准 按肝脏变性细胞或泡沫细胞的数量分以下4级：①Ⅰ级：正常肝细胞；②Ⅱ级(轻度)：变性细胞或泡沫细胞数﹤25%；③Ⅲ级(中度)：变性细胞或泡沫细胞数≥25%(﹤50%)；④Ⅳ级(重度)：变性细胞或泡沫细胞数≥50%。

2 结 果

2.1urantide对AS大鼠胸主动脉的影响 实验6 w，NC组大鼠胸主动脉内膜、中膜和外膜分界清楚，血管内皮完整，中膜可见梭形平滑肌细胞，弹力纤维层结构清晰完整，呈环行排列，外膜为疏松结缔组织。模型组大鼠胸主动脉内膜下出现明显的钙化、炎细胞浸润、VSMC增生及泡沫样细胞，弹力纤维发生变性、断裂和崩解，中膜萎缩，为典型AS病理变化。表明成功建立AS大鼠模型。见图1。

2.2urantide对AS大鼠肝系数的影响 AS组(6.13±0.23)与NC组(3.13±0.15)相比，肝系数明显增加(P<0.01)；urantide组(3 d：5.36±0.13，7 d：4.93±0.06，14 d：4.60±0.20)〕及Flu组(4.42±0.02)肝系数较AS组明显减少(P<0.01)，但各给药组间比较无统计学意义。

2.3Urantide对AS大鼠肝脏形态学改变的影响 NC组大鼠肝脏形态规则，边缘锐利，色红有光泽；HE染色切片观察，肝细胞排列正常，细胞核大而圆、居中，胞质中无泡沫细胞，无炎症细胞浸润，为Ⅰ级。AS组和各给药组大鼠肝脏体积较正常组不同程度增大，包膜紧张，边缘较钝，质地略软，切面均呈淡黄色而稍隆起，包膜外翻，触之油腻感；镜下AS组肝细胞内泡沫细胞大而多，散布在整个胞质中，肝细胞出现重度的脂肪变性和大量的炎症细胞浸润，脂肪变性细胞数≥50%，为Ⅳ级(重度)脂肪变性；而Flu组肝细胞内泡沫细胞较AS组数量减少，且大小不等，多分布在核的周围，变形细胞数≥25%(<50%)，为Ⅲ级(中度)脂肪变性；urantide组给药3 d时与AS组相比，脂肪变性减轻，但与Flu组相比脂肪变性减轻不明显，变性细胞数≥25%(<50%)，为Ⅲ级脂肪变性；urantide组给药7 d和14 d时与AS组相比，脂肪变性进一步减轻，接近于Flu组，变形细胞数≥25%(<50%)，为Ⅲ级脂肪变性。见图2。

图1 NC组与模型组实验6 w后胸主动脉病改变(HE，×200)

图2 各组肝脏形态学改变(HE，×200)

3 讨 论

大量实验与临床资料证明，脂肪肝是促进AS形成的危险因素〔5〕。脂肪肝是脂肪沉积过多引起肝内脂肪变形细胞和泡沫细胞增多的一类临床代谢性综合征。它可以是一个独立的原发性疾病，也可是AS等其他全身性疾病累及肝脏的病理表现，协同其他AS的致病因素一起促进AS的发生发展〔6〕。据此，本实验在建立AS动物模型时，通过给大鼠喂养含有大量胆固醇、猪油和胆酸钠等使血脂升高的饲料，增加大鼠出现脂肪肝的概率。结果显示，模型组肝细胞内有重度的脂肪变性和泡沫细胞、炎症细胞浸润。肝内的泡沫细胞和炎症细胞释放大量AS的致病因子，增加血管内膜损伤和炎症反应，加重AS病变，从而为成功复制AS模型发挥了重要的作用。

AS的发生是多因素、多层次及多位点相互作用的过程。尾加压素Ⅱ(UⅡ)最早是从鱼的脊髓尾部下垂体中分离出的生长抑素样环肽，是促进AS发生、发展的主要发病机制之一〔7,8〕。urantide是迄今已知作用最强UⅡ受体拮抗剂，拮抗效应较其他化合物高50～100倍〔9,10〕。长期跟踪国内外文献，有关UⅡ受体拮抗剂urantide与AS的报道极少。迄今仅有的少量信息，基本上都来自本实验室所做的一些工作，研究发现 UⅡ促进AS的发生、发展，而urantide可阻断UⅡ这种促进作用，对AS有一定的保护作用〔2～4〕，但其在AS中具体作用机制还尚未阐明。本文结果显示urantide可降低肝系数，减轻大鼠肝细胞脂肪变性。由此证实了我们的假设，urantide通过对肝脏脂肪变性的抑制作用，减轻了肝损伤后AS致病因子的释放，缓解大鼠的AS病变。

4 参考文献

1Schwimmer JB, Deutsch R, Behling C,etal. Fatty liver as a determinant of atherosclerosis〔J〕.Hepatology,2005;42: 610.

2赵 娟, 曹 凯, 石 燕, 等.Urantide对实验性动脉粥样硬化大鼠C反应蛋白表达的影响〔J〕. 中国动脉硬化杂志,2011;19(8):632-6.

3赵 娟. Urantide抑制动脉粥样硬化大鼠单核细胞趋化蛋白-1的表达〔J〕.中国药理学与毒理学杂志,2011;25(5):425-9.

4赵 娟.尾加压素Ⅱ在大鼠动脉粥样硬化发病机制中的作用及urantide的干预研究〔J〕.中国病理生理杂志，2010;26(10): 2018-20.

5范建高, 蔡晓波.非酒精性脂肪性肝病促进动脉粥样硬化的发生〔J〕.中国动脉硬化杂志,2008;16(1):1-3.

6Targher G, Bertolini L, Padovani R,etal. Relations between carotid artery wall thickness and liver histology in subjects with nonalcoholic fatty liver disease〔J〕.Diabetes Care,2006;29(6):1325-30.

7Gabunia K, Jain S, England R,etal. Autieri MV the anti-inflammatory cytokine interleukin-19 inhibits smooth muscle cell migration and activation of cytoskeletal regulators of VSMC motility〔J〕.Am J Physiol Cell Physiol, 2011；300(4)：C896-906.

8Ross B, McKendy K, Giaid A,etal. Role of urotensin Ⅱ in health and disease〔J〕.Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2010;298(5):R1156-72.

9Leprince J, Chatenet D, Dubessy C,etal. Structure-activity relationships of urotensin Ⅱ and URP〔J〕.Peptides,2008;29(5):658-73.

10Papadopoulos P, Bousette N, Al-Ramli W,etal. Targeted overexpression of the human urotensin receptor transgene in smooth muscle cells: effect of UT antagonism in ApoE knockout mice fed with Western diet〔J〕.Atherosclerosis,2009;204(2):395-404.