P53，PTEN，PCNA基因与膀胱癌恶性度的相关性

李 光 金 宁 刘 明 曲立成 沈 腾 李 海 张 茁 那万里

(吉林大学中日联谊医院泌尿外科，吉林 长春 130033)

膀胱癌是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤，并且是一个多因素、多基因作用的复杂过程，其发生、发展及恶性程度与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。由于关于多个基因在膀胱癌中表达意义的相关报道较少。本研究就P53、抑癌基因(PTEN)、增生性细胞核抗原(PCNA)基因在膀胱癌患者中的表达及病理分级的关系与正常膀胱组织中的表达进行对比。

1 材料与方法

1.1一般资料 选择我院2005～2013年手术切除的膀胱癌标本，术前均未经过任何抗肿瘤治疗，共40例。其中男24例，女16例；年龄35～77〔平均(56±7.5)〕岁。病理分级按WHO分级标准，Ⅰ级10例，Ⅱ级16例，Ⅲ级14例。

1.2方法 P53、PTEN、PCNA基因均采用免疫组化(SP)法，全部标本均经10%甲醛常规固定，石蜡包埋，作4 μm厚连续切片，分别作苏木素-伊红(HE)染色和P53、PTEN、PCNA SP染色，染色后细胞质或细胞核呈棕黄色，轮廓清楚。所有试剂均购于福建福州迈新公司。

1.3统计学分析 采用SPSS13.0软件进行χ2检验。

2 结 果

40例膀胱癌中P53蛋白表达阳性22例(55.0%)，PTEN 17例(42.5%)，PCNA 25例(62.5%)。P53(本实验检测的均为突变型P53)阳性反应定位于细胞核，在正常组织中表达率为10%(1/10)。PTEN阳性反应大多定位于细胞质，在正常膀胱组织中的阳性表达率为90.0%(9/10)。PCNA阳性反应定位于细胞核，在正常组织中的表达率为10%(1/10)。三者在膀胱癌和正常膀胱组织中的表达比较均有统计学差异(P<0.05)。见表1，图1。

P53

PTEN

PCNA

表1 P53、PTEN、PCNA基因在不同级别的膀胱癌中的表达〔n(%)〕

3 讨 论

膀胱癌发病率居泌尿系肿瘤的首位,且异型性很强。分子生物学的研究表明，肿瘤的发生与基因的改变，特别是原癌基因的激活及抑癌基因的失活有非常密切的关系。分离并鉴定这些癌基因与膀胱肿瘤恶性度的相关性，对于肿瘤的诊断和治疗具有重要的价值。有研究〔1〕指出，至少有两个或两个以上功能不同的癌基因的激活，才可能引起细胞的癌变。与膀胱癌相关的基因有很多，包括P16、Rb基因、PCNA、ras基因、c-myc癌蛋白、P53、cyclinD1、PTEN、CDK4等等。其中P16基因在国内外报道较多，均证实其与膀胱癌的恶性度密切相关。Rb基因的缺失、突变、甲基化表达失活与膀胱癌的发生亦联系紧密。ras基因其活化方式以点突变为主，导致细胞生长信号的传递发生异常，促使细胞恶变〔2〕。c-myc癌蛋白的表达与浅表膀胱癌的复发、 浸润有关。进一步研究发现，c-myc癌基因的甲基化水平与膀胱癌的分期、分级相关〔3〕。cyclinD1和CDK4的过度表达可能引起细胞异常增殖和分化失控，最终致肿瘤的发生，其表达水平的变化，亦可作为膀胱癌生物学行为的指标。

P53基因是在ST40大T抗原基因转移的细胞中发现的，Finlay等〔4〕在研究转化时发现野生型P53基因能抑制细胞的转化，突变型P53基因则能促进细胞的转化。因为野生型P53蛋白半衰期短，在细胞中含量低，一般方法难以检出，而突变型P53能与一些蛋白形成稳定复合物，使半衰期大为延长，在细胞核内聚焦而被检出〔5〕。本研究结果与国内外报道相似，P53基因与膀胱癌分化程度呈负相关〔6〕。

PTEN是第一个被发现具有磷酸酶活性的抑癌基因，参与氨酸磷酸酶和丝氨酸/苏氨酸磷酸酶介导的信号传导过程，使第二信使PIP3去磷酸化，从而抑制细胞生长和凋亡，其异常表达已证实与多种肿瘤的发生、发展密切相关〔7〕，Fisher等〔8〕研究显示，PTEN基因失表达与膀胱癌的恶性程度相关，在肿瘤演变中起重要作用。本研究提示PTEN基因表达缺失是在膀胱癌发生过程的早期事件，在肿瘤进展过程中也发挥重要作用。

PCNA是一种与细胞周期相关的蛋白，是从细胞核内分离纯化的一种多肽链，能与DNA多聚酶辅助蛋白肿瘤的恶性程度结合，是细胞核内合成DNA所必需的一种核蛋白，参与细胞DNA的复制，其表达水平反应肿瘤细胞增殖分数和所处周期的客观指标，也可以判定肿瘤的恶性程度〔9,10〕。

综上，P53、PTEN、PCNA基因与膀胱癌的发生发展有密切关系，PTEN 失活是膀胱癌发生的早期事件，可作为早期诊断的标记物，随着肿瘤恶性度的增高，表达明显下降；P53，PCNA基因的过度表达是膀胱癌高度恶性的标志之一。多种癌基因异常表达作为膀胱癌恶性程度的评价指标更具价值。

4 参考文献

1Kantoff PW. Bladder cancer〔J〕. Curr Prob Cancer，1990；14(5):233-92.

2Masters JR，Vesey SG，Munn CF，etal.C-myc concoprotein levels in bladder cancer 〔J〕. Urol Res，1988;16(5):341-4.

3Moriyama M，Akiyama T，Yamamoto T，etal.Expression of c-erbB-2 gene product in urinary bladder cancer 〔J〕. J Urol，1991；145(2):423.

4Finlay CA，Hinds PW，Lerine AJ,etal.The P53 protooncogene can act as suppressor of transformation〔J〕.Cell,1989;57:1083.

5Carlos CC,Sazz MR,Oliva ZFZ,etal.P53 mutations in human bladder cancer:genotypic versus phenotypic patterns〔J〕.Int Cancer,1994;56:347.

6齐艳丽,朱大勇，姜丽红，等.PCNA与P53、P16、Rb基因在膀胱癌中的表达意义〔J〕.中国实用医药,2010;5(27):40.

7Kpksal IT,Yasar D,Dirice E,etal.Differential PTEN protein expression profiles in superficial versus invasive bladder cancers〔J〕.Urol Int,2005;75(2):102-6.

8Fisher CA,Kampmann M,Zlobec I.P16 expression in poropharyngeal cancer:its impact on staging and prognosis compared with the conventional clinical staging parameters〔J〕.Ann Oncol,2010;21(10):1961-6.

9孔垂泽，刘同才.肾盂输尿管癌中P53基因突变及增殖细胞核抗原表达的临床意义〔J〕.中华肿瘤杂志，1996;35(6):436.

10居红格，沈淑萍，耿 红，等.P16、P53、PCNA在膀胱癌中的表达及意义〔J〕.包头医学院学报,2009;25(6):12.