糖尿病大鼠微循环与坐骨神经细胞凋亡的相关性及中药复方的干预

李 光 张文风 苏 鑫 粟 栗

(长春中医药大学，吉林 长春 130117)

糖尿病(DM)周围神经病变(DPN)是DM的慢性并发症之一，随着病程的延长，发病率可达90%以上〔1〕。DPN的发病机制较为复杂，目前缺乏安全有效的治疗方法及药物。以往研究表明，以益气活血通络为治法的中药复方能够改善DM大鼠血液流变学，提高坐骨神经传导速度，调节血清胰岛素、C肽的分泌，降低糖化血清蛋白及坐骨神经人糖基化终末产物(AGEs)含量〔2～5〕。在前期研究的基础上，继续探究DM大鼠微循环与其坐骨神经细胞凋亡的相关性及中药干预作用，旨在揭示其防治机制。

1 材料与方法

1.1试剂及药品 链脲佐菌素(STZ)：美国SIGMA公司。中药复方由黄芪、桂枝、生地、水蛭组成，由本校制剂室提供。弥可保〔卫材(中国)药业公司生产〕，全自动血液流变快测仪FASCO-3010(重庆大学维多生物工程研究所)，TNNUL细胞凋亡试剂盒(北京中山生物技术有限公司)，病理切片机(德国Leica公司)，光学显微镜及成像系统(日本Olympus公司)。

1.2实验模型的建立 选用8周龄雄性健康Wistar大鼠，体重220～250 g。适应性饲喂1 w后，禁食12 h，将STZ临用前用0.1 mmol/L枸橼酸缓冲液(pH 4.2、4℃)配成2%浓度溶液，按剂量50 mg/kg左下腹腔内单次注射，72 h后取尾血侧血糖，凡血糖≥16.7 mmol/L作为DM大鼠。适应性喂养3 d后将DM大鼠随机分为三组，即模型组、中药组、弥可保组，每组10只。并取体重、鼠龄相匹配的同批正常大鼠 10只，用0.1 mmol/L枸橼酸缓冲液(pH 4.2、4℃)左下腹腔内单次注射，72 h后取尾血测血糖，血糖值在正常范围内的大鼠作为正常对照组。大鼠实验期间按组分笼饲养，自由进食、饮水，饲喂大鼠标准饲料 。连续观察8 w。

1.3体重、血糖检测 实验结束前称其体重。取尾静脉血测其血糖。

1.4血液流变学检测 大鼠麻醉后，腹主动脉取血，肝素抗凝，应用全自动血液流变快测仪FASCO-3010测定。

1.5TNNUL检测细胞凋亡 将大鼠腹腔注射20%乌拉坦(5 ml/kg)进行麻醉然后将其俯卧固定于固定架上，剖开双侧股骨皮肤，暴露出坐骨神经，用无菌剥离器小心剥离坐骨神经后取出，置于10%甲醛液中，标本按常规固定、脱水，石蜡包埋，切片(厚5 μm)备用。TNNUL法检测细胞凋亡。

2 结 果

2.1各组大鼠体重、血糖变化的比较 与正常对照组相比，模型组、中药组、弥可保组动物的体重明显减轻，血糖明显升高(均P<0.05)；在血糖的调节上，中药组与模型组及弥可保组相比差异显著。见表1。

表1 各组大鼠体重、血糖变化的比较

2.2各组大鼠血液流变学变化的比较 与正常对照组相比，模型组、中药组、弥可保组大鼠全血度、红细胞聚集指数及刚性指数明显升高(均P<0.05)；与模型组相比，中药组具有显著差异，而弥可保组无显著差异。与弥可保组相比，中药组具有显著性差异。见表2。

2.3TNNUL法细胞凋亡检测的比较 与正常对照组(4.5±0.7)相比，模型组、中药组、弥可保组大鼠坐骨神经细胞凋亡数(51.6±8.2，39.5±6.8，23.6±4.5)明显升高(P<0.05)。与模型组相比，中药组、弥可保组具有显著差异(P<0.05)。与弥可保组比较，中药组有显著差异(P<0.05)。

表2 各组大鼠血液流变学变化的比较

3 讨 论

中医认为，DPN是由于DM日久，气阴两虚、瘀血阻络所致。益气活血通络法方由黄芪、桂枝、生地、水蛭组成。具有养阴益气、活血化瘀之功。已经公认，血液循环张障碍所导致的神经组织缺血缺氧是DPN主要的发病原因之一〔6〕。改善微循环对增加周围神经的供血和营养、抑制坐骨神经的纤维脱髓鞘和轴索萎缩、提高传导速度〔7，8〕有重要作用。

本实验结果中，对于DM大鼠的体重、血糖、血液流变学、坐骨神经细胞凋亡的改善益气活血通络方药均优于弥可保，可能由于弥可保治疗仅针对DNP发病的单一因素，而中药复方能起到整体调节作用，充分发挥中医多环节、多靶点，辨证论治的优势和特色有关。

实验结果还显示，血液流变性改变，微循环障碍，神经组织缺血缺氧，导致细胞发生凋亡，证实了二者的相关性。益气活血通络方药改善微循环，对坐骨神经细胞凋亡的抑制作用，为其对DM坐骨神经损伤的保护机制提供一定线索，其确切的作用机制值得进一步研究。

4 参考文献

1梁晓春，郭赛珊.治疗糖尿病神经病变的思路与方法〔J〕.中医杂志，1999；40(1)：52-3.

2张文风、苏 鑫，赵书锋.益气活血通络法防治糖尿病周围神经病变的实验研究〔J〕.中医药信息，2008；25(6)：73-4.

3张文风.益气活血通络方对糖尿病大鼠血清胰岛素、C肽的影响.湖南中医杂志，2008；24(5)：98-9.

4张文风，苏 鑫，粟 栗.糖尿病大鼠坐骨神经AGEs的表达及益气活血通络方的干预研究〔J〕.上海中医药杂志，2010；44(3)：69-71.

5张文风，苏 鑫，粟 栗.从血液流变学和神经传导速度评价益气活血通络法对糖尿病周围神经病变的干预作用〔J〕.时珍国医国药，2010；21(2)：439-40.

6衡先培，张发荣.Advances in treatment of diabetic neuropathy by traditional Chinese medicine〔J〕.JTCM,1998；18(2):146-52.

7张一娜，璀 璨，张亚清，等.老年心脑血管疾病、糖尿病血液流变学改变〔J〕.中国微循环杂志，2002；6(3):167-8.

8张文风.九虫丹对糖尿病周围神经病变大鼠血液流变学影响的实验研究〔J〕.中医药信息，2004；21(5)：32-3.