滇白珠水提物对慢性阻塞性肺疾病大鼠转化生长因子-β1、白细胞介素-8的影响

王小莉 吕江明

(吉首大学医学院，湖南 吉首 416000)

慢性气道炎症和以气道壁成纤维细胞增生及细胞外基质沉积为特点的气道构型的重建是慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺组织的重要病理特征,但气道炎症尤其是气道重建的分子机制尚未阐明。滇白珠具有祛风除湿、活血化疲、通络止痛、清热解毒等功效，用于风湿性关节炎、慢性气管炎、风寒感冒等证〔1〕。长期以来，滇白珠治疗COPD停留在民间药用水平上，缺乏深入的实验研究，本研究旨在通过检测转化生长因子(TGF)-β1、细胞因子白细胞介素(IL)-8的变化，探讨滇白珠治疗COPD的机制。

1 材料与方法

1.1实验动物与分组 健康SD雄性大鼠36只(长沙市开福区东创实验动物科技服务部购买，动物编号HNACSDC20120292)，鼠龄12 w，体重(274±29)g。随机分为正常对照组、模型组和用药组各12只。

1.2COPD模型制备方法 将模型组的大鼠放入有机玻璃制成的烟熏箱内，在其右上角开通一个直径1 cm的通气孔。大鼠吸烟2次/d；16支/次，时间30 min，2次间隔4 h，连续75 d。被动吸烟方法：将点燃的香烟(购买的长沙卷烟厂生产的白沙牌香烟)通过三通将烟雾吸入100 ml的注射器中，关闭吸烟通路一端，再打开三通的另一端将烟雾注入烟熏箱内进行大鼠被动吸烟。用药组：吸烟8 d后每天吸烟染毒前通过胃管给大鼠灌胃滇白珠水提物(2 ml/次，原药1 ml/次，加生理盐水2 ml)共75 d。正常对照组气管内滴入等量的生理盐水，25 d后处死大鼠用于实验观察。

1.3滇白珠水提物的提取 滇白珠由我院吕江明老师在湘西凤凰腊儿山采集，由我院中药学李春艳教授鉴定。将滇白珠根茎叶药材450 g干燥、粉碎，过20目筛，水煮3次，30 min/次，合并水煎液，浓缩为1 g/ml，得到滇白珠水提物。

1.4支气管肺泡灌洗液(BALF)的采集 将大鼠用2%的戊巴比妥(25 mg/kg)麻醉后仰卧固定于操作台，切开胸部，暴露出气管和双肺，结扎右主支气管，在隆突上用套管针穿刺至左肺，缓慢注入无菌生理盐水3 ml，每次注入后立即回吸得到BALF，重复3次。灌洗液纱布过滤，回收率为60%～70%。

1.5病理标本的制作 实验各组于吸烟染毒结束后次日取每只大鼠右中叶肺组织，肺组织标本经 4%多聚甲醛灌注内固定后，取材放入4%中性甲醛固定24 h，石蜡包埋切片，进行HE染色及免疫组织化学染色，免疫组织化学染色参照试剂盒推荐的SP法进行操作。每组切片任选1张用PBS液代替一抗进行染色,为阴性对照。TGF-β1多克隆抗体1∶50稀释,阳性表达为细胞胞质呈棕黄色颗粒状改变。

1.6TGF-β1、IL-8的检测 应用TGF-β1检测试剂盒以ELISA对支气管肺泡灌洗液和血清进行TGF-β1、IL-8的活性检测(武汉博士德公司生产试剂盒)。

2 结 果

2.1病理改变 模型组的大鼠大体观察可见肺体积较正常对照组明显增大，颜色苍白，弹性减弱，有多少不等的肺泡融合形成大疱。光镜下观察，可见肺泡管、肺泡囊和肺泡明显扩张，肺泡壁变薄，并有不同程度的断裂。用药组大鼠的支气管黏膜上皮脱落较模型组明显减轻,炎性细胞浸润以及肺泡壁断裂和肺泡腔扩大情况亦较模型组减轻，较正常对照组重。见图1。

图1 各组大鼠肺组织病理学(HE，×100)

2.2肺组织TGF-β1的免疫组化结果 模型组(0.732±0.083)与正常对照组(0.168±0.018)大鼠比较显著增加(P<0.05)。用药组(0.538±0.059)与模型组与比较显著减少(P<0.05)。

2.3支气管肺泡灌洗液中TGF-β1、IL-8的活性测定 模型组与正常对照组比较,用药组与模型组比较均有显著差异(P<0.05)，见表1。

表1 各组大鼠支气管肺泡灌洗液中TGF-β1、

2.4血清中TGF-β1、IL-8的活性测定 模型组与正常对照组比较,用药组与模型组比较均有显著差异(P<0.01)。见表2。

表2 各组大鼠血清中TGF-β1、IL-8活性比较±s，n=12)

3 讨 论

COPD是一种不能完全可逆的气流受限为特征的疾病，气流受限进行性发展，多与肺部对有害颗粒与气体的异常炎症反应有关〔2〕。

TGF-β1是一种具有多种功能的生长因子,主要表达于支气管、肺泡上皮细胞及肺泡巨噬细胞，广泛参与气道炎症反应与气道重建，是COPD炎症损伤修复的重要因子。韩玲等〔3〕研究发现，慢性支气管炎组、COPD组TGF-β1的表达明显高于对照组，提示TGF-β1在COPD发病早期即可增高,由于组织重建及纤维化改变，TGF-β1增高早于肺功能异常而出现。本研究显示，被动吸烟模型组大鼠支气管肺泡灌洗液和血清中的TGF-β1表达均明显增加，支气管、肺组织中的表达显著增强，提示TGF-β1参与了COPD的炎症发生和发展。同时研究还发现应用滇白珠水提物后，用药组大鼠TGF-β1的表达明显下降，此结果提示，通过对TGF-β1的抑制，使炎症细胞的聚集、趋化减轻可能是滇白珠水提物干预COPD气道炎症反应的机制之一，可以认为滇白珠可通过调控TGF-β1,从而减轻实验性慢阻肺大鼠气道炎症和慢性损伤。

IL-8是一种多细胞源性的细胞因子。它是脂多糖、IL-1和肿瘤坏死因子(TNF)刺激时主要由单核和(或)巨噬细胞分泌的,也是中性粒细胞、T淋巴细胞的一种趋化因子,在炎症和免疫过程中具有重要调节意义〔4，5〕。在COPD发病过程中，IL-8在中性粒细胞所致炎症中起了相当重要的作用，IL-8水平与气流阻塞程度、气道的炎症相匹配。本实验说明滇白珠水提物能降低COPD大鼠血清及肺泡灌洗液中IL-8的表达，减少炎性细胞因子的释放，从而控制气道炎症。

总之，COPD的发病机制是非常复杂的，TGF-β1、IL-8参与了COPD的发病过程，滇白珠水提物可以下调COPD的TGF-β1、IL-8的表达，通过减少炎性细胞因子的释放，减轻和控制气道的慢性炎症反应，进而控制病情的发展，从而治疗COPD。

4 参考文献

1江苏新医学院.中药大辞典(下册)〔M〕.上海:上海人民出版社，1977:1879.

2中华医学会呼吸疾病学分会.慢性阻塞性肺疾病(COPD)诊治指南〔J〕.中华呼吸和结核杂志，2002;25(8)：453-60.

3韩 玲,许建英.慢性阻塞性肺疾病患者气道上皮细胞TGF-β1表达的研究〔J〕.山西医科大学学报,2007；38(2):31-3.

4Tiddens H，Silerman M，Bush A.The role of inflammation in airway disease remodelling〔J〕Am J Cirt Med,2000；162(1):7.

5Jardine H，Mac Nee W，Donaldson K,etal.Molecular mechanism of transforming growth factor(TGF)-beta1-induced glutathione depletion in alveolar epithelial cells.Involvement of AP-1 /ARE and Fra-1〔J〕.J Biol Chem,2002；277(24):21158-66.