壮药假蒟药材质量标准研究

1.广西中医药大学第一附属医院药学部，广西 南宁 530023；2.广西中医药大学，广西 南宁 530001

壮药假蒟药材质量标准研究

桂贞才1颜萍花2唐玉荣2甘日呈2

1.广西中医药大学第一附属医院药学部，广西 南宁 530023；2.广西中医药大学，广西 南宁 530001

目的对假蒟药材质量标准进行研究。方法通过四大经典鉴别法对假蒟进行鉴别；按2010年版《中国药典》附录方法对假蒟的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行测定；采用HPLC对假蒟中α-细辛脑进行含量测定和指纹图谱研究。结果确定假蒟药材鉴别方法、检查限量，建立含量测定和指纹图谱方法。结论建立的方法可为假蒟药材质量标准的制定提供实验基础。

假蒟；鉴别；含量测定；指纹图谱；质量标准

假蒟又称假蒌、哈蒟、假荖等，过去一直当作常见的祛风湿类中草药使用[1]，是中华跌打丸的重要原料之一，并收载于《中国药典》2010版附录中[2]。近年来人们发现，假蒟资源丰富、药食两用，是极具民族特色的植物药[3]，已有生药学及化学成分等的研究报道[4-5]。为进一步完善其质量标准，更好地开发利用资源，本文系统地进行了相关研究，结果如下。

1 材料与仪器

1.1 药材与试剂 假蒟采自广西各地(见表1)，经广西中医药大学蔡毅教授鉴别为Piper sarmentosum Roxb.的干燥地上部分。α-细辛脑对照品(中国食品药品检定研究院，批号：10298- 0001)；乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂为分析纯。

表1 假蒟的药材来源

1.2 仪器 1100高效液相色谱仪系统(美国Agilent)；半自动轮转切片机(Leica RM2145，山海天呈科技有限公司)；光学生物显微镜(DM2500，德国徕卡仪器公司)；电子分析天平(BP211D，德国赛多利斯)；台式电热恒温干燥箱(GZX-DH-26X30-TBS，上海跃进医疗器械厂)；箱式电阻炉(SXZ-4-10，上海实验仪器厂有限公司)；数显恒温水浴锅(HH-S4，金坛市医疗仪器厂)。

2 实验方法与结果

2.1 性状鉴别 通过对多地采集的标本，用性状鉴别法进行研究，汇总其性状鉴别特征如下：本品茎呈圆柱形，表面有细纵棱，节上有不定根。叶多皱缩，展开后呈阔卵形或近圆形，长6～14cm，宽5～13cm，基部浅心形；上面棕绿色，下面灰绿色，有细腺点；7条叶脉于叶背突出，脉上有极细小的粉状短柔毛；叶柄长2～5cm，叶鞘长为叶柄的一半；有时可见与叶对生的穗状花序。气香，味辛辣。

2.2 显微鉴别 通过对多地采集的标本，用显微鉴别法进行研究，汇总其显微鉴别特征如下。

2.2.1 茎横切面 表皮细胞1列，外被角质层；非腺毛由1～2个细胞组成。皮层外侧有数列厚角组织，断续呈环。中柱维管束20～25个，环列；韧皮部外侧有半圆形纤维束；木质部较宽，导管径向排列；髓鞘纤维束明显。髓部宽广，髓中维管束5～7个，环列；中央有1分泌道，直径245～460μm，可见棕黄色分泌物。皮层、髓部均有油细胞散在；细小淀粉粒可见(见图1)。

2.2.2 本品粉末灰绿色 分泌道碎片易见，内含细小颗粒状分泌物。油细胞类圆形，直径23～38μm。石细胞类圆形、类长方形，直径26～79μm，壁孔明显。非腺毛由1～2个细胞组成，长42～87μm。纤维、螺纹导管或梯纹易见(见图2)。

2.3 薄层色谱鉴别 根据假蒟所含有化学成分的类型，对不同的提取方法、展开系统及显色剂进行反复考察，稳定的薄层鉴别方法如下：取本品粉末1g，加甲醇20ml，加热回流1h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取假蒟对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取α-细辛脑对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮(20:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(见图3)。

2.4 检查

2.4.1 水分 照中国药典2010年版一部附录水分测定法(附录IX H第二法)甲苯法测定，15批假蒟水分测定结果为 8.1%～12.0%(见表2)。初步拟定假蒟水分含量不得超过13.0%。

2.4.2 总灰分 照中国药典2010年版一部附录灰分测定法(附录IX K)测定，15批假蒟总灰分测定结果为 11.0%～16.0%(见表2)。初步拟定假蒟总灰分含量不得超过17.0%。

2.4.3 酸不溶性灰分 照中国药典2010年版一部附录灰分测定法(附录IX K)测定，15批假蒟酸不溶性灰分测定结果为 0.4%～3.1%(见表2)。初步拟定假蒟酸不溶性灰分含量不得超过3.7%。

2.5 浸出物 照水溶性浸出物测定法项下的冷浸法(中国药典2010年版一部附录X A)测定，15批假蒟水溶性浸出物测定结果为 18.6%～28.2%(见表2)。初步拟定假蒟浸出物含量不得少于15.0%。

2.6 α-细辛脑的含量测定 α-细辛脑为假蒟的主要成分，在其挥发油含量中含量高达40.33%[5]，对本品中α-细辛脑进行含量测定，方法及结果如下。

2.6.1 色谱条件 采用phenomenex ODS2柱(250mm×4.60 mm,5 μm，)；流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(49∶51)；流速1.0 mL·min-1；检测波长313 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。在上述条件下，各成分无干扰且完全分离，理论板数按α-细辛脑计算大于1×104，α-细辛脑对照品和假蒟供试品色谱图见图4。

2.6.2 溶液的制备 取α-细辛脑对照品1.95 mg，精密称定，置10 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，配制成0.195 mg·mL-1的α-细辛脑对照品溶液。称取假蒟干燥粗粉0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 ml，回流3 h，放冷，用50%甲醇补足损失的重量，用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，续滤液为供试品溶液。

2.6.3 样品测定 不同采收时间采收的假蒟药材15批，按“2.6.2”项下方法制成供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液各10 μl，按“2.6.1”项条件进样，测定峰面积，按外标法计算α-细辛脑的含量。假蒟中α-细辛脑含量在0.036%～0.507%之间(见表2)。

表2 假蒟水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、α-细辛脑含量测定结果(n=3)

2.7 指纹图谱的研究 指纹图谱能较全面地反映生药所含内在化学成分的种类与数量，更加有效地体现了生药成分的复杂性，因而在评价生药内在质量方面更客观，更符合传统的中医药理论。本文收集了广西产(桂东、桂南、桂西、桂中)样品15批，用高效液相色谱法对假蒟指纹图谱进行研究，结果如下。

2.7.1 溶液的制备 精密称取α-细辛脑对照品4.10mg，置10ml量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.4100mg·ml-1的对照品溶液。取假蒟药材干燥粉末约0.3g，精密称定，精密加入50%甲醇20ml称重，回流提取1h，放冷至室温，加50%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.7.2 色谱条件 采用phenomenex C18ODS2柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相为乙腈-0. 05%磷酸，梯度洗脱(0～15 min：5%～20% 乙腈；15～25 min：20% 乙腈；25～55 min：20%～47% 乙腈；55～65 min：47%～58% 乙腈；65～70 min：58%～70% 乙腈；70～90 min：70%～85% 乙腈；90～100 min：85%～85% 乙腈)；流速1.0ml·min-1；检测波长258 nm；柱温30℃；进样量10μl。

2.7.3 指纹图谱与共有峰的确定 按“2.7.2”项方法检测15批假蒟药材的指纹图谱。将测试数据导入国家药典委员会“中药指纹图谱相似度评价系统(2004A)”软件，经校正，将谱峰自动匹配，生成对照图谱；通过中药指纹图谱相似度评价软件得假蒟HPLC指纹谱共有模式图(见图5)。结果表明，其中有15个主要色谱峰(占总峰面积90%以上)是15批假蒟药材所共有的，以峰面积较大且分离度较好的12号峰(α-细辛脑)作为参照峰S。

2.7.4 指纹图谱的相似度分析 将15批药材样本图谱与对照图谱比较，计算相似度。结果显示，4批假蒟药材相似度大于0.70，7批假蒟药材相似度大于0.80，其余4批假蒟药材相似度大于0.90。

3 讨论

α-细辛脑为近年来的研究热点之一[6,7]，具有很好的治疗哮喘、毛细支气管炎、癫痫、惊厥和降血脂等疾病的作用。假蒟挥发油的主要成分为α-细辛脑，含量高达40.33%[5]，以其作为化学对照品进行薄层鉴别，具有一定的合理性。中药材含有多种成分，常共同发挥临床疗效，有时甚至具有双向调节作用，很难确定某一化学成分即是中医用药的唯一有效成分。况且，已有研究表明假蒟中α-细辛脑会受产地、采收季节、加工方法等影响[8-10]，故含量测定以α-细辛脑为指标，只能间接地控制其质量，应与浸出物等指标联合使用。而指纹图谱的应用，较好地克服了单一成分含量测定的不足。通过指纹图谱特征，能有效鉴定样品的真伪或产地；通过指纹图谱主要特征峰的面积或比例的制定，能有效控制样品的质量，确保样品质量的相对稳定。假蒟指纹图谱的研究，虽然取得了一定成果，但要用于其质量监控尚需进一步完善。

综上所述，本研究的结果，可为进一步完善假蒟药材质量标准提供实验基础。

[1]冼寒梅,邓家刚.广西临床常见中草药[M].南宁:广西科学技术出版社,2007:107.

[2]国家药典委员会.中国药典[S].北京:中国医药科技出版社,2010:附录550.

[3]广西壮族自治区食品药品监督管理局.广西壮族自治区壮药质量标准[S].南宁:广西科技出版社,2011:270.

[4]蔡毅,姜建萍,苏建群,等.假蒟的生药学鉴别[J].中国中药杂志,2006,(5):434.

[5]蔡毅,董栋,么春艳,等.GC-MS分析广西四种栽培胡椒属植物叶挥发油的化学成分[J].华西药学,2010,25(6):641-644.

[6]吴闯.α-细辛脑的研究进展[J].中国药学杂志,1997,32(3):129.

[7]赵李宏,吴建梅,武凤兰.近十年来α-细辛脑的研究进展[J].中国中药杂志,2007,32(7):562-565.

[8]马雯芳,余娇,邓慧连,等.不同干燥方法对假蒟挥发油成分影响的研究[J].中成药,2013,35(6):1270-1274.

[9]马雯芳,余娇,蔡毅,等.HPLC测定假蒟中的α-细辛脑及其含量的动态积累[J].华西药学杂志,2013,28(3):293-295.

[10]蔡毅,马雯芳,余娇,等.广西产假蒟HPLC指纹图谱的研究[J].华西药学杂志,2013,28(5):548-549.

StudyonQualityStandardforZhuangMedicineofPiperSarmentosumRoxb

GUI Zhen-cai1YAN Ping-hua2TANG Yu-rong2GAN Ri-cheng2

1.Pharmacy of the First Affiliated of Guangxi University of Chinese Medicine,Guangxi Province, Nanning 530023, China;2. Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Province, Nanning 530001, China

ObjectiveStudy on the Quality Standard of Piper sarmentosum Roxb.MethodsIdentification of Piper sarmentosumRoxb.by four classic identification methods, and content of moisture, total ash, acid-insoluble ash and water extract were determined according to the approaches listed in the Chinese pharmacopoeia published in 2010, the content of α-asarone and fingerprint of Piper sarmentosum Roxb. were establish by HPLC.ResultsDetermined the identification,content determination and fingerprint methods for Piper sarmentosum Roxb..ConclusionThe methods provide experimental basis for the quality standard of Piper sarmentosum Roxb.

Piper sarmentosum Roxb.; identification; determination; fingerprint; quality standard

广西壮族自治区卫生厅中医药科技专项课题(GZKZ10-034),《广西壮族自治区壮药质量标准(第二卷)》标准研究项目(MZY2010072)。

桂贞才(1963-)，男，广西扶绥人，主要从事中药品种、品质及资源开发研究。

R29

A

1007-8517(2014)16-0021-04

2014.06.05)