HPLC法测定秋水仙药材中秋水仙碱的含量

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新疆维吾尔自治区食品药品检验所，新疆 乌鲁木齐 830004

HPLC法测定秋水仙药材中秋水仙碱的含量

刘伟新沈晓丽苏莱曼·哈力克

新疆维吾尔自治区食品药品检验所，新疆 乌鲁木齐 830004

目的研究秋水仙药材中秋水仙碱的提取分离及对秋水仙碱进行质量控制。方法用0.03mol/L的盐酸乙醇溶液提取药材。色谱柱：Waters MS C18(4.6×250mm)；流动相：甲醇-水(45∶55)；检测波长：353nm；流速：1.0ml/min。结果能很好的将秋水仙碱分离出来，秋水仙碱在0.074～0.444mg/ml之间线性关系良好，r=0.9999；平均回收率为103.57%，RSD为4.58%。结论本文使用用乙醇做提取溶剂，无毒性;含量测定方法操作简单，结果准确，重复性好，可用于秋水仙药材的质量控制。

维吾尔药材秋水仙；秋水仙碱；质量控制；含量测定

秋水仙为百合科植物秋水仙Colchicum autumnale L.的干燥鳞茎。为维吾尔药常用药材，维吾尔语称“苏润江”。主产于欧洲，尤盛产于地中海和黑海沿岸，非洲和西亚、南亚等地亦有分布 ，目前多从巴基斯坦进口。我国自七十年代起从国外引进种子和球茎，分别在北京、庐山、昆明等地试种。

秋水仙被收载于《卫生部药品标准维吾尔药分册》，秋水仙碱作为秋水仙的主要化学成分，尚未建立含量测定方法。此次，作为国家药品(维药)标准提高研究课题，对原有的秋水仙标准进行了修订、提高，同时，建立了秋水仙碱含量测定的方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪(美国Waters公司)，Empower工作站(美国Waters公司)；ZY012台式电热干燥箱；METTLER AE 200型电子分析天平(瑞士)。

1.2 材料 秋水仙碱(批号101176-201001，中国药品生物制品检定所)。甲醇为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。10批秋水仙Colchicum autumnale L.供试品药材分别从伊朗、巴基斯坦进口，由新疆维吾尔药业有限责任公司、新疆华康药业股份有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 秋水仙提取分离 取秋水仙粉末(过3号筛)2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.03mol/L的盐酸乙醇溶液(2.7→100)20ml，振荡15min，放置24h，滤过，取续滤液，即得。

2.2 秋水仙碱的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Waters MS C18(4.6×250mm)；流动相：甲醇-水(45∶55)；检测波长：353nm；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：10μl 。在此色谱条件下，秋水仙碱峰型较好，并且能够较好的分离。色谱图见图1。

2.2.2 对照品溶液的制备 取秋水仙碱对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含24μg的溶液，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约1g，精密称定，置具塞锥形瓶瓶中，精密加入0.03mol/L的盐酸乙醇溶液(2.7→1000)20ml，振荡15min(恒温振荡器；室温；中等强度)，放置24h，过0.45微孔滤膜，即得。

2.2.4 线性关系考察 精密称取秋水仙碱6.17mg，置25ml容量瓶中，加入乙醇适量，溶解，并定容至刻度，摇匀，作为对照储备液。精密量取上述储备液3、6、9、12、15、18μl，注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件测定峰面积。以秋水仙碱浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=2446183.144X-18495.7333 (r=0.9999)，结果表明，秋水仙碱量在0.074～0.444mg/ml之间线性关系良好。

2.2.5 精密度实验 吸取秋水仙碱对照品溶液10μl，在上述色谱条件下，连续进样6次，结果秋水仙碱峰面积RSD值为0.15%。

2.2.6 重复性试验 取秋水仙药材6份，按供试品溶液的制备方法制得供试品，在相同的色谱条件下，连续进6针，进样量10μl，依次测定。结果供试品中秋水仙的平均质量分数为0.04%，RSD为0.73%。

2.2.7 稳定性试验 分别于0、4、8、12、24h后进样，共5次，结果秋水仙峰面积的 RSD值为0.56%。结果表明，供试品溶液室温下24h内稳定。

2.2.8 加样回收试验 精密称取已测定的秋水仙药材供试品6份，每份0.5g，另取0.2468mg/ml秋水仙碱对照品溶液1ml，因所用秋水仙对照品含量为93.0%，实际加入量为0.2295mg/ml，按供试品溶液制备方法同法操作，进样量10μl。结果秋水仙碱平均回收率为103.57%，RSD为4.58%。

2.2.9 专属性试验 将制得的供试品溶液、空白溶液和秋水仙碱对照品溶液，依次进样，结果：空白溶液不干扰供试品中秋水仙碱的含量测定。

表1 秋水仙药材中秋水仙碱的含量测定结果(n=2)

2.2.10 供试品测定 取不同产地、不同批次的秋水仙药材供试品，按供试品制备方法处理，依次测定(n=10)，结果见表1。

根据测定结果，秋水仙药材的含量定为按干燥品计算，含秋水仙碱 (C22H25NO6)不得少于0.008%，纳入标准。

3 结论

秋水仙Colchicum autumnale L．的干燥鳞茎做为维吾尔常用药材，一直被用来治疗关节骨痛，肝炎，黄疸等疾病。秋水仙药材中秋水仙碱的含量测定也曾有文章报导过，但其提取方法使用大量的三氯甲烷，毒性大，提取方式及含测方法都较为繁复。本文使用的含测方法，用乙醇做提取溶剂，无毒性，操作简单，结果准确，可用于秋水仙药材的质量控制。

[1]卫生部药典委员会．卫生部药品标准维吾尔药分册[S]．乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999:721．

[2]刘勇民．维吾尔药志下册[M]．乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：588-592．

[3]何红平．秋水仙化学成分研究[J]．化学研究与应用，1999，11(5)：509-510．

[4]国家中医药管理局《中华本草》编委会编．中华本草(维吾尔药卷)[M]．上海：上海科学技术出版社，2005：281-283．

国家药品(维药)标准提高研究课题(2010-777)。

刘伟新(1964-)，女,满族，副主任药师，主要从事中药、民族药检验及研究。

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1007-8517(2014)17-0010-02

2014.07.10)