灵芝孢子提取物对裸鼠卵巢上皮性癌细胞生长的影响

杨 超，班 玲，王 亮，剧蕴慧，申莉瑛，赵素芬(.河北省石家庄市第二医院妇科，河北 石家庄 05005；.河北省胸科医院呼吸科，河北 石家庄 05004；3.河北医科大学第二医院妇科，河北 石家庄 050000)

·论著·

灵芝孢子提取物对裸鼠卵巢上皮性癌细胞生长的影响

杨 超1，班 玲1，王 亮2，剧蕴慧1，申莉瑛1，赵素芬3*
(1.河北省石家庄市第二医院妇科，河北 石家庄 050051；2.河北省胸科医院呼吸科，河北 石家庄 050041；3.河北医科大学第二医院妇科，河北 石家庄 050000)

目的探讨破壁灵芝孢子提取物对裸鼠卵巢上皮性癌细胞生长的影响。方法建立裸鼠移植性人卵巢上皮性癌模型24只，随机分为对照组、紫杉醇组、灵芝组及灵芝+紫杉醇组，每组6只。比较各组肿瘤体积、平均瘤质量及抑瘤率。结果对照组瘤体体积增大最明显，灵芝+紫杉醇组瘤体体积增大最慢，差异有统计学意义(P<0.01)；灵芝组、紫杉醇组、灵芝+紫杉醇组瘤质量低于对照组，其中灵芝+紫杉醇组平均瘤质量最低，差异有统计学意义(P<0.01)。灵芝+紫杉醇组抑瘤率高于紫杉醇组和灵芝组(P<0.01)。结论灵芝孢子提取物具有抑制裸鼠卵巢上皮性癌细胞生长的作用，并增强化疗药物紫杉醇的作用。

卵巢肿瘤；破壁灵芝孢子粉；裸鼠移植模型

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.09.027

卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，病死率居妇科恶性肿瘤的首位，是严重威胁妇女生命的疾病。近年来，从中草药和天然植物中提取和寻找防治肿瘤的有效成分是治疗肿瘤的希望和新途径之一，灵芝孢子内所含营养物质是灵芝子实体的数十倍，目前对灵芝孢子粉的抗肿瘤研究和利用越来越受到国内外学者的重视。本研究应用灵芝+紫杉醇抑制移植性人卵巢上皮性癌，报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料：灵芝孢子粉批号为083668，购自加拿大energene天然药品有限公司；人卵巢上皮癌细胞株SKOV3，为加拿大约克大学生命科学系Chun Peng实验室保存。 实验动物采用BALB/C/nu/nu无胸腺裸小鼠，共24只，雌性，4～5周龄，体质量16～20g。购于北京军事医学科学院实验动物中心，饲养于无菌实验室的净化空气层流架中。

1.2 方法

1.2.1 实验动物模型的建立及分组：用注射器抽取对数生长期人卵巢上皮癌细胞株SKOV3 5×105个细胞，接种于裸鼠背侧近后肢处，建立裸鼠移植性人卵巢上皮性癌模型，随机分为对照组、紫杉醇组、灵芝组及灵芝+紫杉醇组，每组6只裸鼠。

1.2.2 给药方法及浓度：接种1周后开始给药，灵芝组裸鼠破壁灵芝孢子粉按浓度500mg/kg给予灌胃，每周1次，连续4周；紫杉醇组裸鼠紫杉醇按30mg/kg给予腹腔内注射，每周1次，连续4周；灵芝+紫杉醇组同时给予灵芝孢子和紫杉醇(给药方法同上)，连续4周；对照组每天灌胃相同体积0.9%氯化钠注射液。

1.2.3 检测指标：每天观察裸鼠饮食、精神、体质量变化，每周测量移植瘤的最长径(a)及最短径(b)，根据公式计算肿瘤体积。末次给药后24h将裸鼠处死，计算抑瘤率=(对照组肿瘤体积-实验组肿瘤体积)/(对照组肿瘤体积)×100%。

2 结 果

各组在第1周时肿瘤尚未形成，第2周以后瘤体开始增大，到第4周，瘤体增长速度明显不同，对照组生长最大，灵芝组生长受到明显抑制，紫杉醇较灵芝组抑制更强，但抑制最强的是灵芝+紫杉醇组(图1)。各组肿瘤平均质量，灵芝组、紫杉醇组和灵芝+紫杉醇组均低于对照组(P<0.01)，灵芝+紫杉醇组又低于灵芝组和紫杉醇组(P<0.01)。灵芝+紫杉醇组抑瘤率低于灵芝组和紫杉醇组(P<0.01)。见表1。

图1 各组肿瘤体积变化情况

组别瘤质量(g)抑瘤率(%)对照组0．98±0．28-紫杉醇组0．64±0．12∗36．2±4．72灵芝组0．64±0．18∗36．9±5．36灵芝+紫杉醇组0．41±0．26∗#Δ56．7±3．59#Δ F6．86638．161 P<0．01<0．01

*P<0.01与对照组比较 #P<0.01与灵芝组比较 ΔP<0.01与紫杉醇组比较(q检验)

3 讨 论

灵芝孢子是灵芝的种子，有一层非常坚韧的外壁，有抗肿瘤[1]、降血糖、增强免疫功能、抗炎、抗病毒、保肝、降血清胆固醇、抗辐射作用，它的相对分子质量在50 000以上，主要以β-葡聚糖为主[2-3]。此外，还有肽多糖、甘露蒲聚糖、阿拉伯半乳聚糖、半乳葡聚糖、杂多糖等。灵芝多糖具有抗肿瘤及提高机体免疫活性的功能[4-5]。最初发现灵芝多糖的抗肿瘤作用是在移植性肉瘤小鼠的腹腔积液中[6]。灵芝多糖的化学结构是决定其生物活性功能的主要因素，相对分子质量大小直接影响其抑制肿瘤的作用，只有当灵芝多糖的相对分子质量>1×104时才能明显抑制肿瘤的活性，其中α-葡聚糖和β-葡聚糖也有不同的抗癌机制，α型结构多无活性，它在主链上的取代度和侧链长度的不同决定了水溶液中的构象和β-D-(1-3)葡聚糖的生物活性[7]。α-葡聚糖是通过结合的补体受体3介导来实现灵芝多糖的抗癌活性。

灵芝孢子粉通过提高小鼠自身免疫力对小鼠肝癌细胞株HAC、小鼠白血病细胞株YAC-1和小鼠肥大细胞性白血病细胞株P815肿瘤细胞产生一定的杀伤性，其中灵芝孢子粉的总抑瘤率为42.2%，灵芝孢子粉组的杀伤活性分别为27.3%、23.4%和20.0%。说明灵芝孢子粉通过激活和提高细胞毒性T淋巴细胞(特异性)和自然杀伤细胞、非特异性杀伤细胞的抗肿瘤作用来抑制肿瘤细胞增殖[8]。体外研究[9]发现灵芝孢子可使人卵巢上皮癌细胞OV2008停滞于G1/S期。体内研究[10]发现，灵芝孢子可通过周期阻滞来诱导裸鼠卵巢上皮性癌细胞凋亡。

本研究给予裸鼠卵巢癌模型不同用药，灵芝+紫杉醇组抑瘤率为(56.7±3.59)%，灵芝组为(36.9±5.36)%，紫杉醇组为(36.2±4.72)%，表明灵芝孢子提取物具有抑制裸鼠卵巢上皮性癌细胞生长的作用，并增强化疗药物紫杉醇的作用。

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[3] 赵桂梅，张丽霞，于挺敏，等.灵芝孢子粉水溶性多糖的分离、纯化及结构研究[J].天然产物研究与开发,2000,17(2):182-185.

[4] 谢明，谭玉林，麻明彪，等.化疗联合中药对人乳腺癌裸鼠移植瘤生长及TMSG-1表达的影响[J].湘南学院学报:医学版,2013,15(4):1-5.

[5] 蒋兆健，袁胜涛，刘菊妍，等.灵芝孢子油注射液对免疫功能及生物调节因子的影响[J].中药材，2013,36(4):607-611.

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(本文编辑：赵丽洁)

2014-06-19；

2014-08-27

石家庄市科学技术研究与发展计划项目(12146993)

杨超(1980-)，女，河北石家庄人，河北省石家庄市第二医院主治医师，医学硕士，从事妇科疾病诊治研究。

*通讯作者。E-mail:zhaosfchina@yahoo.com.cn

R737.31

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1007-3205(2014)09-1070-02