UGT1A1基因多态性与小细胞肺癌伊立替康化疗毒性和疗效的研究

赵晓光，宋明霞，徐 洁，王玉洁(河南省焦作市人民医院肿瘤内科，河南 焦作 454002)

·论著·

UGT1A1基因多态性与小细胞肺癌伊立替康化疗毒性和疗效的研究

赵晓光，宋明霞，徐 洁，王玉洁
(河南省焦作市人民医院肿瘤内科，河南 焦作 454002)

目的探讨中国人小细胞肺癌患者尿苷二磷酸葡糖苷酸转移酶1A1(uridine diphosphate glucuronosyl transferase 1A1，UGT1A1)基因多态性分布与伊立替康(irinotecan，CPT-11)化疗毒性和疗效的关系。方法接受CPT-11联合顺铂一线治疗的小细胞肺癌患者34例，外周血中提取DNA，PCR法扩增目的基因片段，直接测序法分析UGT1A1*28基因多态性，并与不良反应及近期疗效进行分析。结果34例患者中UGT1A1*28野生纯合型(TA 6/6)最常见为26例(76.5%)，其次为突变杂合型(TA 6/7)6例(17.6%)；突变纯合型(TA 7/7)仅2例(5.9%)，UGT1A1*28非野生型可增加患者发生Ⅲ度以上腹泻的风险(P<0.05)。结论中国人小细胞肺癌患者UGT 1A1*28突变频率低，TA 6/7和TA 7/7基因型可增加应用CPT-11后III度以上腹泻的风险，但不影响疗效。

小细胞肺癌；伊立替康；多态现象,遗传

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.09.003

伊立替康(irinotecan，CPT-11)联合铂类是小细胞肺癌主要化疗方案，但该方案在临床的应用受到不良反应的限制，随着基因组学的发展，人们逐渐认识到，不同个体对同一药物的不同反应，大多源于个体间基因的差异。目前多数学者研究集中于CPT-11活性产物的主要代谢酶尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶1A1(UDP-glucuronosyltransferase1A1，UGT1A1)，其基因多态性改变酶的活性。中国汉族人使用CPT-11为主方案的重度迟发性腹泻发生率明显低于欧美高加索人，其原因与UGT1A1基因的多态性有关[1]。本研究应用CPT-11联合铂类治疗小细胞肺癌，探讨UGT1A1*28基因多态性与CPT-11化疗不良反应及疗效之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料:2010年6月—2014年2月河南省焦作市人民医院收治的经病理学或细胞学检查证实的小细胞肺癌患者34例，其中男性22例，女性12例，年龄41～65岁，中位年龄49岁，所有患者美国东部协作肿瘤组(EasternCooperativeOncologyGroup,ECOG)评分为0～2分，预计生存期3个月以上，所有病例均有临床可测量的病灶。化疗前查肝肾功能、血常规及心电图心脏彩超等，患者均需血常规指标正常(白细胞计数≥4×109/L，血小板计数≥100×109/L)，无严重肝肾功能不全(胆红素水平<1.25倍正常上限，肌酐<1.25倍正常上限)。所有患者均为一线化疗并签署知情同意书。

1.2 治疗方法：CPT-11(由江苏恒瑞医药股份有限公司提供，商品名艾力)60mg/m2，静脉滴注，第1、8、15天；顺铂25mg/m2，静脉滴注，第1～3天。21d为1个周期，直至疾病进展或出现不可耐受的不良反应。如治疗后腹泻>Ⅲ度并超过3d，则在接下来的治疗中减少CPT-11剂量20%，减量后不再恢复剂量，出现骨髓抑制时给予粒细胞集落刺激因子，并酌情延期化疗。

1.3UGT1A1*28基因型检测：化疗前留取患者外周血标本3mL，根据外周血DNA提取试剂盒(北京赛诺科技有限公司)操作手册，分批次统一提取基因组DNA。PCR扩增UGTIAl基因的相应片段，正反向引物分别为F，CTCCCl′GCAACCTITGTG-GACTGA；R，ACAACGAGGCGTCAGGTGCTA。每个25μL的PCR反应包括5ng模板DNA，10×buffer，1mmol/L三磷酸脱氧核苷酸，Taqplus酶(大连Takara公司)和12.5μmol/L正向和反向引物各0.5μL。PCR反应条件为初始变性94℃ 5min；变性94℃ 30s，退火30s，延伸68℃ 1min，35个循环；72℃延伸7min。PCR产物采用BigDyeTeminatorV3.1标记并纯化后在ABI-3730测序仪上进行双向测序。测序结果Chromas2.31软件显示，人工校读分析UGTlAl上游启动子序列A(TA)nTAA中的TA重复序列。

1.4 不良反应与疗效评价：主要研究终点为药物不良反应，次要研究终点为近期有效率。应用影像学(CT或MRI)资料评定近期疗效，按照美国国立癌症研究所的实体瘤化疗疗效标准RECIST1.0[2]进行评价，完全缓解(completeresponse，CR)、部分缓解(partialresponse，PR)、稳定(stabledisease，SD)，疾病进展(progressivedisease,PD)。

1.5 统计学方法：应用SPSS13.0统计软件进行数据处理，计数资料比较采用χ2检验，等级资料比较采用秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1UGT1A1*28基因型与不良反应：34例患者中，TA6/6野生基因型26例(76.5%)，TA6/7杂合基因型6例(17.6%)，TA7/7纯合突变型2例(5.9%)。34例患者中，7例(20.6%)发生Ⅲ～Ⅳ度延迟性腹泻，其中在UGT1A1*28TA6/6，TA6/7和TA7/7基因型中的发生率分别为7.7%(2/26)、50.0%(3/6)和100.0%(2/2)，后2种显著高于前者(P<0.05)。见表1。

表1 UGTlAl*28基因型与腹泻 Table 1 The relationship of UGT1A1*28 gene polymorphisms and diarrhea (n，%)

*P<0.05vsTA 6/6 by χ2test

2.2 UGT1A1*28基因型与疗效：全部患者化疗有效22例，其中UGT1A1*28野生型18例，非野生型4例，TA6/6、TA6/7 和TA7/7基因型之间疗效差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 UGT1A1*28基因型与疗效 Table 2 The relationship of UGT1A1*28 gene polymorphisms and efficacy (n，%)

CR：complete response;PR:partial response;SD:stable disease;PD:progressive disease

3 讨 论

小细胞肺癌由于其独特的生物学特性，初治患者对化疗有着较高的反应性，拓扑异构酶Ⅰ抑制剂CPT-11是近年来广泛应用于小细胞肺癌治疗的抗癌药物，但药物不良反应及疗效存在个体差异，不同患者接受相同剂量强度的化疗药物可以产生不同的反应[3]。近年来，随着药物遗传学和药物基因组学的研究，关于CPT-11的化疗不良反应与人类基因相关性的基础和临床研究也越来越受到广大临床医生的关注。

CPT-11属于细胞毒类药物，进入人体可通过羧酸酯作用转化成为活性形式7-乙基-10羟基喜树碱(7-Ethyl-10-Hydroxycamptothecin，SN-38)，SN-38是一种拓扑异构酶抑制剂，可以干扰DNA复制和转录，具有杀伤肿瘤的作用[4]。研究[5]发现，SN-38具有更强的细胞毒性，能引起迟发性腹泻，UGT1A1酶能有效代谢SN-38，将其灭活成为无活性的SN-38G，CPT-11不良反应与UGT1A1基因多态性有关。国外文献[6]报道UGT1A1家族基因位点改变多达50多种，其中UGT1A1*28基因多态性与CPT-11不良反应和疗效的关系被广泛关注。研究[7]显示，在亚洲人、高加索人和非洲人之间UGTlAl差异有统计学意义，白种人UGTlAl*28的突变频率较高，UGTlAl*28纯合突变型TA7/7占10%～15%，UGTlAl*28杂合型TA6/7占35%～50%，而TA6/6野生型只占40%～50%。另一项对539例汉族人UGT1A1*28 基因多态性分布频率的研究[8]发现，UGTlAl基因启动子区TA6/6野生型占79.7%，TA6/7杂合基因型占15.6%，TA7/7纯和型占4.7%。本研究结果发现，基因型非野生型Ⅲ～Ⅳ度腹泻的发生风险明显高于野生型，与日本、欧美学者[9]得出的结论基本相符，原因可能为CPT-11的活性形式为SN-38，可抑制DNA单链断裂后修复，干扰DNA复制和转录，肝和肠内的代谢酶UGT1A1可将SN-38代谢为灭活产物SN-38G，UGT1A1*28 多态性使UGT1A1活性降低，从而对SN-8的灭活能力下降，使其对肠黏膜损伤加重，引起严重的腹泻。

基因型指导下的个体化治疗是目前研究的热点[10]。UGT1A1*28基因多态性与CPT-11疗效相关性受到学者们的广泛关注，国外多数研究并发现不同的UGT1A1基因型之间差异无统计学意义[11]。本研究对34例小细胞肺癌患者应用含CPT-11方案治疗，虽观察到TA6/6野生型患者在缓解率方面略高于TA6/7 及TA7/7非野生型患者，但差异无统计学意义，其原因可能与UGT1A1突变型患者发生严重的不良反应比例较高、常常导致药物剂量下调或化疗疗程提前终止、影响了患者的疗效有关。

综上所述，应用含CPT-11治疗的小细胞肺癌患者，UGT1A1*28基因多态性非野生基因型可增加Ⅲ～Ⅳ度严重腹泻的发生风险，测定UGT1A1*28基因多态性有利于防止CPT-11化疗相关不良反应。源于药物代谢酶UGT1A家族中各个基因多态性分布在不同人种之间差异有统计学意义，中国人群的UGT1A1*28野生基因型TA6/6分布频率较高。目前尚无证据显示不同基因型之间差异有统计学意义，鉴于本研究样本量较小，建议进一步扩大样本量，为探索适合于我国小细胞肺癌患者的个体化治疗提供更多的循证医学支持。

[1] 王岩，徐建明，沈琳，等.中国人尿苷二磷酸葡糖苷酸转移酶1A基因多态性与伊立替康毒性的相关性[J].中华肿瘤杂志，2007，29(12):913-916.

[2] 孙燕，石远凯.临床肿瘤学手册[M].5版.北京：人民卫生出版社，2007：133-147.

[3] 李玮，乔冶，刘爱东.广泛期小细胞肺癌临床预后因素分析[J].临床荟萃，2009，24(21)：1861-1864.

[4] 刘伟先，赵伟珠.基因多态性与胃癌个体化治疗的研究进展[J].临床荟萃，2012，27(17)：1549-1554.

[5] BRAUN MS，RICHMAN SD，THOMPSON L，et al.Association of molecular markers with toxicity outcomes in a randomized trial of chemotherapy for advanced colorectal cancer: the FOCUS trial[J].J Clin Oncol，2009，27(33)：5519-5528.

[6] KADAKOL A，GHOSH SS，SAPPAL BS，et al.Genetic lesions of bilirubin uidine-diphosphoglucuronate glucuronosyl transferase (UGT1A1) causing Crigler-Najjar and Gilbert syndromes correlation of genotype to phenotype[J].Hum Mutat，2000，16 (4)：297-306.

[7] MARCUELLO E，ALTÉS A，MENOYO A，et al.UGT1A1 gene variations and irinotecan treatment in patients with metastatic colorectal cancer[J].Br J Cancer，2004，91(4)：678-682.

[8] ZHANG A，XING Q，QIN S，et al.Intra-ethnic differences in genetic variants of the UGT-glucuronosyl transferase 1A1 gene in Chinese populations[J].Pharmacogenomics J,2007，7(5)：333-338.

[9] MASSACESI C，TERRAZZINO S， MARCUCCI F，et al.Uridine diphosphate glucuronosyl transferase 1A1 promoter polymorphism predicts the risk of gastrointestinal toxicity and fatigue induced by irinotecan-based chemotherapy[J].Cancer，2006，106(5)：1007-1016.

[10] 马玉泉，杨晓光，刘晖，等.p27基因多态性与食管癌的关联研究[J].河北医科大学学报，2008，29(4)：515-518.

[11] GLIMELIUS B，GARMO H，BERGLUND A，et al.Prediction of irinotecan and 5-fluorouracil toxicity and response in patients with advanced colorectal cancer[J].Pharmacogenomics J，2011，11(1)：61-71.

(本文编辑：赵丽洁)

CORRELATIONBETWEENUGT1A1GENEPOLYMORPHISMSANDTOXICITYANDEFFICACYOFIRINOTECANCHEMOTHERAPYONSMALLCELLLUNGCANCERPATIENTS

ZHAOXiaoguang，SONGMingxia，XUJie，WANGYujie
(DepartmentofMedicalOncology,JiaozuoPeople′sHospital,HenanProvince,Jiaozuo454002,China)

ObjectiveToobservetheassociationofuridinediphosphateglucuronosyltransferase1A1 (UGT1A1)genepolymorphismwiththetoxicityandtoxicityofirinotecan(CPT-11)chemotherapyinChinesepatientswithsmallcelllungcancer(SCLC).MethodsIn34patientswithSCLCwhohad

first-linetreatmentwithirinotecanpluscisplatin,genomicDNAsampleswereextracted,leukocytesintheperipheralblood,andthegenotypesweredeterminedbyanalyzingthesequenceoftheUGT1A1gene.TheinfluenceoftheUGT1A1* 28polymorphismontheshort-termefficacyandtoxicityofirinotecanwasanalyzed.ResultsTheUGT1A1genotypesin34consecutivepatientswereasfollowsUGT1A1* 28homozygouswild-typeTA6/6 ( 26cases,76.5%),heterozygousmutant-typeTA6/7( 6cases,17.6%),homozygousmutant-typeTA7/7(2cases,5.9%).MarkedincreasesindiarrheawereobservedinpatientswhohadtheTA6/7orTA7/7genotype(P<0.05).ConclusionThepolymorphismofUGTIAl*28inChineseSCLCpatientswaslower,TA6/7orTA7/7increasedtheriskofdevelopinggradeormoreseverediarrheaforthepatientsafterreceivingirinotecantreatmentbuthadnoinfluenceonefficacyofchemotherapy.

smallcelllungcarcinoma；irinotecan；polymorphism,genetic

2014-07-25；

2014-08-29

赵晓光(1977-)，男，河南焦作人，河南省焦作市人民医院副主任医师，医学硕士，从事恶性肿瘤诊治研究。

R734.2

A

1007-3205(2014)09-1000-03