食管鳞癌IGF-1R、EGFR蛋白的表达及其临床意义

张俊凯 潘佩玲 吴颖猛

食管鳞癌IGF-1R、EGFR蛋白的表达及其临床意义

张俊凯 潘佩玲 吴颖猛

目的 研究IGF-1R、EGFR蛋白在食管鳞癌患者中的表达情况及其临床意义。方法 应用免疫组织化学SP法检测50例食管鳞癌患者IGF-1R、EGFR蛋白的表达情况, 取20例手术标本正常组织作为对照组。结果 食管鳞癌中IGF-1R蛋白阳性表达率明显升高(χ2=28.29, P<0.05), EGFR蛋白阳性表达率明显升高(χ2=4.56, P<0.05)。IGF-1R的阳性表达与食管癌的病理分级有关, 分级越高阳性率越高, 与浸润深度有关, 侵及深肌层及外膜IGF-1R的表达明显高于侵及浅肌层及黏膜的表达, 与TNM分期有关, 分期越晚阳性率越高, 差异均有统计学意义。淋巴结转移组IGF-1R或EGFR的表达明显高于非转移组。结论 初步结果分析显示IGF-1R可能与食管鳞癌的病理分级及侵袭、转移有关, EGFR可能与食管鳞癌的转移有关。

食管癌；IGF-1R蛋白；EGFR蛋白；免疫组织化学

本文应用免疫组化的方法研究IGF-1R和EGFR在食管鳞癌中的异常表达,对食管鳞癌中使用靶向治疗具有积极意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 入选50病例本院2009年8月～2011年12月经手术切除食管癌标本, 且经病理证实均为食管鳞状细胞癌, 所有病例术前均无其他恶性肿瘤或严重内科疾病, 术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗。其中男性47例, 女性3例,年龄32~74岁, 平均52.5岁。取20例手术标本正常组织作为对照组, 正常组织取自手术残端, 距癌组织3 cm以上。

1.2 试剂及方法 采用免疫组化检测50例患者及20例正常组织中IGF-1R、EGFR蛋白的表达情况。标本经40 g/L甲醛固定, 石蜡包埋, 每块连续切取3张4 μm厚的切片,贴附于用生物胶处理的载玻片上, 60℃烤60 min。切片脱蜡至水, 清洗3次。体积分数0.03的H2O2封闭内源性过氧化物酶20 min, 清洗3次。切片微波抗原修复、冷却、清洗。按说明书滴加抗体, 湿盒4℃过夜。清洗后, 滴加二抗, 37℃30 min。清洗3次。DAB显色, 苏木精衬染, 脱水, 封片, 光学显微镜下观察。

1.3 结果判断 以PBS代替一抗作为阴性对照。IGF-1R蛋白表达阳性为胞膜上出现棕黄色细颗粒。综合染色强度及分布范围进行半定量分析:染色强度阴性为0分, 染色弱但强于阴性对照为1分, 染色清晰为2分, 染色强为3分, 分布范围评分标准:阳性细胞数<10%为0分, 10%~30%为1分, 31%~60%为2分, >60%为3分。上述两种评分相加0~1分为(-), 2分为(+), 3~4分为(++), 5~6分为(+++)。+为阳性表达, ++、+++为过度表达。操作EGFR蛋白以细胞膜和细胞浆染成棕黄色为阳性染色, 细胞膜或细胞浆里淡黄(染色弱)、棕黄(中等强度染色)和棕褐色(强阳性)。每张切片随机观察10个高倍视野, 按染色强度及阳性细胞数分为3级:阴性(-) ,无阳性细胞；弱阳性(±) ,< 50%细胞呈弱、中等强度染色,强阳性细胞数<30%；阳性(+),≥50 %细胞呈弱、中等强度阳性细胞, 强阳性细胞数≥30%。其中IGF-1R抗体购自福建迈新公司。EGFR抗体购自北京金菩嘉公司。

1.4 统计学方法 所有统计处理均用SPSS 13.0统计软件进行。计数资料频率比较及相关性分析采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

表1 IGF-1R和EGFR的在食管鳞癌和正常组织中的表达

表2 IGF-1R和EGFR的表达与食管鳞癌临床病理参数的关系

3 结论

胰岛素样生长因子(IGF)包括IGF-1和IGF-1R, 属于多肽类家族的成员, 与胰岛素约有50%的同源性［1］。IGF-1R主要分布在细胞膜上, 能促进体外培养细胞的有丝分裂［2］。细胞的增生与细胞膜上IGF-1R的数目成正比,当IGF-1R表达水平下降或IGF-1R丢失会导致肿瘤细胞大量凋亡；相反, IGF-1R表达水平升高则会抑制细胞凋亡［3］。Chen［4］研究发现IGF-1R和EGFR在食管癌细胞系CE48T/VGH中过度表达。表皮生长因子受体( EGFR)与其配体EGF或TGF-α结合可激活受体本身的酪氨酸蛋白激酶活性, 进一步激活信号传导系统, 刺激细胞生长增殖。日本、美国和法国的研究资料表明,食管鳞癌细胞系EGFR 基因扩增率为8%~30%［5］。

国内吴慧等研究结果示, 食管鳞癌组织中IGF-1R的阳性表达率明显高于正常组织, 并且在浸润深层的癌组织中阳性表达率明显高于浅层组, 淋巴结转移组的表达率明显高于非转移组, 两者相比差异有统计学意义［6］。Imsumran［7］研究100例外科手术切除的食管鳞癌患者, 使用免疫组化的方法检测IGF-IR和IGF-II配体的表达和预后的关系。结果提示IGF-IR和IGF-II蛋白分别在60%和50%的食管鳞癌标本中有表达阳性, 而且和肿瘤的浸润深度、转移、分期较晚、复发等有关联［7］。Carneiro 等［8］报道30例食管鳞癌患者中19例显示EGFR强阳性表达( 免疫染色为3+), 其中12例有基因扩增的现象, 另外11例患者中, 仅2例基因扩增, EGFR过表达与基因扩增发生一致。

本研究结果中, IGF-1R和EGFR在食管鳞癌组织中的表达高于在正常食管黏膜上皮中的表达, 差异有统计学意义。本研究还发现, IGF-1的阳性表达与食管癌的病理分级有关,分级越高阳性率越高, 与浸润深度有关, 侵及深肌层及外膜IGF-1的表达明显高于侵及浅肌层及黏膜的表达, 与TNM分期有关, I期、Ⅱ期、IIIA和B期, 分期越晚阳性率越高, 差异均有统计学意义。说明IGF-1可能参与了食管癌的病理分化及侵袭、进展。淋巴结转移组IGF-1R或EGFR的表达明显高于非转移组, 提示IGF-1与EGFR可能参与了食管癌的淋巴道转移。

综上所述, 本研究提示IGF-1R和EGFR在食管鳞癌的异常表达可成为食管鳞癌的重要生物学指标, 由于本研究样本例数较少, 关于IGF-1R和EGFR的蛋白表达是否为影响食管鳞癌预后的独立危险因素, 还有待进一步研究。

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［8］ Carneiro A, Isinger A, Karlsson A, et al.Prognostic impact of arraybased genomic profiles in esophageal squamous cell cancer.BMC Cancer, 2008,11(8):98.

Expression and significance of IGF-1R and EGFR protein in esophageal squamous carcinoma

ZHANG Jun-kai, PAN Pei-ling, WU Ying-meng.
Department of Oncology, People's Hospital of Zhongshan, Zhongshan 528403,China

Objective To investigate the expression of IGF Type 1 Receptor protein and EGFR protein in esophageal squamous carcinoma patients and its clinical significance.Methods The expressions of IGF-1R and EGFR protein were detected in 50 patients with esophageal squamous carcinoma, 20 cases of normal esophageal tissue by SP immunohistochemistry method.Results The positive rate of IGF-1R protein was markedly higher in esophageal squamous carcinoma than in normal esophageal tissue.(χ2=28.29, P=0.032).The positive rate of EGFR protein was also higher.(χ2=4.56, P<0.05).Close correlation was found on the expression of IGF-1R between pathological grade of esophageal squamous carcinoma,the invasion of tumor and TNM stages.Difference was statistically significant.The expression of IGF-1R or EGFR was higher in lymph node metastasis positive patients than that in negative patients.Conclusion The expression of IGF-1R protein has some relationship with the pathological grade, invasion, metastasis and esophageal squamous carcinoma.The expression of IGF-1R protein has some relevance with the metastasis of esophageal squamous carcinoma．

Esophageal carcinoma; IGF Type 1 Receptor protein; EGFR protein; Immunohistochemistry

528403 中山市人民医院化疗科