盐酸氨溴索注射液安全性评价研究

李逢春

·实验研究·

盐酸氨溴索注射液安全性评价研究

李逢春

目的 评价盐酸氨溴索注射液注射给药的安全性。方法 按照《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》要求开展豚鼠全身主动过敏试验、大鼠被动皮肤过敏试验、体外溶血试验和家兔血管刺激试验。结果 豚鼠全身主动过敏性试验和大鼠被动皮肤过敏性试验反应为阴性；对家兔给药部位血管无明显刺激作用；对家兔红细胞无溶血和凝集作用。结论 盐酸氨溴索注射液安全性良好, 但要合理用药。

盐酸氨溴索注射液；安全性试验；过敏反应；溶血试验；血管刺激

盐酸氨溴索注射液为呼吸科常用药物, 适用于伴有痰液分泌不正常及排痰功能不良的急、慢性呼吸道疾病, 早产儿及新生儿呼吸道窘迫综合征(IRDS)的治疗。2012年国家食品药品监督管理局发布第49期药品不良反应信息通报中提醒公众警惕“盐酸氨溴索注射液”存在严重过敏反应。2011年,国家药品不良反应中心共收到2973例盐酸氨溴索注射液不良反应事件报告, 严重病例有169例, 79例为儿童病例［1］。我国现有11个药品生产企业拥有21个盐酸氨溴索批准文号,但在已经发表的文献资料中未见有关安全性评价方面的研究报告。为了提高临床合理用药, 按照药物制剂准则和注射剂安全性评价的相关要求, 对盐酸氨溴索注射液展开了安全性评价试验, 具体报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 动物：豚鼠, 普通级, 体重300～400 g, 雌雄不拘,河南省康达实验动物有限公司提供；SD大鼠, 清洁级, 体重180～220 g, 雌雄各半, 河南省实验动物中心提供；日本大耳白家兔, 普通级, 体重2.0～3.0 kg, 雌雄不拘, 河南省康达实验动物有限公司提供。

1.2 仪器与试剂 PB4002-S型电子天平, 瑞士METTLER TOLEDO仪器有限公司。SF2000型三按键电子数显卡尺,桂林广陆数字测控股份有限公司。CH30型显微镜, 日本Olympus公司。DR-HW-1型电热恒温水温箱, 北京西城区医疗器械厂。试剂：盐酸氨溴索注射液, 批号12040822, 规格：2 ml:15 mg, 国内A公司；氯化钠注射液, 批号A110105C, 河南科伦药业有限公司；牛血清白蛋白, 批号32093239, 北京索莱宝科技有限公司；依文思兰, 批号87-04-01, 上海化学试剂采购供应站分装厂进口分装。

1.3 方法

1.3.1 全身主动过敏性试验 取豚鼠24只, 均分为4组：①阴性对照组, 给予0.9%氯化钠注射液；②阳性对照组,给予0.5%牛血清白蛋白；③高剂量组, 经过剂量预试, 选用3.8 mg/ml浓度为高剂量浓度, 致敏时腹腔注射0.5 ml, 激发时静脉注射1.0 ml；④ 低剂量组, 给药浓度为1.9 mg/ml, 致敏时腹腔注射0.5 ml, 激发时静脉注射1.0 ml。隔日腹腔注射供试品共3次进行致敏, 然后各组再均分为两组, 分别在首次注射后第14天和第21天, 进行激发。观察每只动物的症状反应［2-5］。

1.3.2 被动皮肤过敏性试验

1.3.2.1 抗体的制备 取大鼠8只, 均分为4组：①阴性对照组, 给予0.9%氯化钠注射液；②阳性对照组, 给予0.5%牛血清白蛋白；③高剂量组, 给药浓度为3.8 mg/ml, 容积0.5 ml；④低剂量组, 给药浓度为1.9 mg/ml, 容积0.5 ml。隔日腹腔注射供试品, 共3次, 进行致敏。首次致敏后第14天采血, 2000 r/min离心10 min, 分离血清。放置-20℃保存, 2周以内备用。

1.3.2.2 试验方法 取大鼠24只, 均分为4组：①阴性对照组；②阳性对照组；③高剂量组, ④低剂量组。试验前动物背部脱毛(3×4)cm2, 然后皮内注射各对应组的抗血清0.1 ml (抗血清的稀释度为1∶4), 进行被动致敏。48 h后各组分别静脉注射含1%依文思兰的对应供试品溶液1.0 ml, 进行激发。30 min后脱臼处死各组动物, 剪取背部皮肤, 测量皮肤内层蓝色反应斑的直径, 进行比较［2-4］。

1.3.3 体外溶血试验

1.3.3.1 2%红细胞悬液的配制 取家兔1只, 心脏取血10 ml,脱纤处理, 然后倒入吸管内, 加氯化钠注射液, 1500 r/min离心15 min, 倒去上清液, 沉淀的红细胞再用氯化钠注射液洗涤3次［1,5］。将红细胞按照用氯化钠注射液配成2%的混悬液,供试验用。

1.3.3.2 试验方法 取洁净的试管7支, 进行编号, 1～5号管编为受试药物管, 6号管编为阴性对照管, 7号管编为阳性对照管。按表1所示加入对应试液, 混匀后, 置(37±0.5)℃的水浴锅, 每隔15分钟观察1次, 1 h后, 每隔1小时观察1次, 最长观察3 h。

表1 体外溶血试验(ml)

1.3.4 血管刺激性试验 经过剂量预试, 试验选用2 ml/kg剂量作为试验剂量。取家兔4只, 采用同体自身对比法, 左耳缘静脉注射给予0.9%氯化钠注射液, 右耳缘静脉给予盐酸氨溴索注射液原液2 ml/kg, 1次/d, 连续7 d。给药结束后,剪取动物耳缘静脉2～3 cm供病理组织学检查, 以了解刺激反应的可逆程度［6,7］。

2 结果

2.1 全身主动过敏性试验 阳性对照组6只豚鼠激发后30 h死亡, 出现极强阳性反应, 阴性对照组和盐酸氨溴索高剂量组、低剂量组激发后均未出现过敏反应。

2.2 被动皮肤过敏性试验 阳性对照组蓝斑直径(7.25±1.54)mm,大于标准规定的5 mm, 呈阳性；阴性对照组和盐酸氨溴索高、低剂量组均为0 mm, ＜5 mm, 呈阴性。

2.3 体外溶血试验 阳性对照管有溶血发生, 溶液呈澄明红色, 管底几乎无细胞残留；阴性对照管和盐酸氨溴索注射液对照管均未发生溶血或凝聚, 显微镜下观察红细胞形态正常。

2.4 血管刺激性试验 在规定的时间内进行观察, 家兔双侧耳部均未见充血水肿, 血管形态正常。病理组织检查显示,静脉内膜光滑、完整, 管腔无血栓, 鳞状上皮无增生, 鳞状下皮无充血、炎症。

3 小结

近年来盐酸氨溴索注射液临床不良反应出现增多的现象, 改变了人们通常认为盐酸氨溴索注射液耐受性好, 不良反应轻的认识。依据盐酸氨溴索注射液说明书, 按照动物的等效剂量公式计算, 豚鼠的临床等效剂量为150 mg/kg, 家兔的临床等效剂量为73.2 mg/kg, 试验中豚鼠过敏试验的安全剂量为10.7 mg/kg, 家兔血管刺激性试验的安全剂量为15 mg/ kg, 均小于动物的临床等效剂量, 提示了临床用药要合理用药, 不要超剂量用药, 尤其儿童用药更要严格用药剂量。

［1］ 牛思远, 陈思勤.国家药监局提醒警惕盐酸氨溴索注射剂过敏.南方日报, 2012:12.

［2］ 卫生部, 国家食品药品监督管理局.化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则.2005.

［3］ 徐叔云, 卞如廉, 陈修.药理实验方法学.第3版.北京:人民卫生出版社, 2002: 237.

［4］ 袁伯俊, 王治乔.新药临床前安全性评价与实践.第1版.北京:军事医学科学出版社, 1997:46.

［5］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).北京:化学工业出版社, 2010:附录Ⅺ K.

［6］ 张广伟, 徐晓月.注射用氨磷汀安全性研究.中国药业, 2011, 20(12):19-20.

［7］ 杨鹊.对豚鼠过敏实验中出现的一些问题的思考.中国药理通讯, 2014, 21(4):19.

2014-04-04］

450003 郑州, 河南省食品药品检验所