溃疡性结肠炎患者结肠黏膜β防御素-2的表达及临床意义

罗培元, 赵艳红

(云南省红河州泸西县人民医院 消化内科, 云南 泸西, 652400)

溃疡性结肠炎为非特异性结肠炎症，病变主要累及结肠黏膜和黏膜下层，病变中心以结直肠黏膜及黏膜下层的非特异性和慢性炎症性为主，使黏膜上皮和腺体受到破坏而发生萎陷或增生，炎性细胞浸润，形成隐窝脓肿，引起黏膜糜烂、充血、增殖性改变及溃疡[1]。肠易激综合征与胃肠功能改变相关的综合征，主要症状为慢性或复发性腹泻、腹痛、排便习惯以及大便性状异常，并伴随生化异常或缺乏胃肠道结构[2]。防御素是天然免疫的重要介质，也是具有广谱抗细胞和微生物毒活性的多肽。1997年，从银屑病皮损组织中首先发现β防御素-2(HBD-2), 且肠黏膜中亦有表达[3]。有研究[4]结果表明, HBD-2可在促炎性因子刺激下合成表达，它的表达可以被多种促炎性因子诱导。HBD-2在机体受到炎性刺激时会大量表达，起到防御作用。本研究旨在探讨溃疡性结肠炎和肠易激综合征患者结肠黏膜HBD-2的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2009年5月—2012年12月30例在本院内镜室行电子结肠镜检查，并在肠镜、病理及临床表现综合因素下证实为溃疡性结肠炎患者，分为溃疡性结肠炎组，于溃疡性结肠炎病变部位取材。其中男18例，女12例；年龄20～66岁，平均(41.6±3.5)岁。入选溃疡性结肠炎组患者均符合2000年制定的溃疡性结肠炎诊断标准(成都全国慢性炎症性肠病学术研讨会)，根据诊断标准，30例患者可分为8例轻度、12例中度和10例重度。选择同期来本院就诊的肠易激综合征患者30例为肠易激综合征组，其中男13例，女17例，年龄21～68岁，平均(42.5±3.9)岁。选择同期来本院体检单健康查体者30例为对照组，其中男15例，女15例，年龄19～66岁，平均(40.3±2.8)岁。2组患者的年龄、性别等一般资料无显著差异(P>0.05), 具有可比性。

1.2 方法

3组患者入院均行电子结肠镜检查，收集到的活检组织一部分立即提取RNA用于PT-PCR检测，另一部分进行HBD-2免疫组织化学染色(SP法)。比较各组结肠黏膜HBD-2 mRNA表达水平、结肠黏膜中HBD-2表达阳性率、结肠黏膜中HBD-2表达强度。

2 结 果

2.1 各组结肠黏膜HBD-2 mRNA表达水平比较

由表1可见，溃疡性结肠炎组、肠易激综合征组患者结肠黏膜HBD-2 mRNA水平均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。溃疡性结肠炎组患者结肠黏膜HBD-2 mRNA水平明显高于肠易激综合征组，差异有统计学意义(P<0.05)。溃疡性结肠炎组中，轻、中、重度三组HBD-2 mRNA表达水平比较无统计学差异(P>0.05)。

表1 各组HBD-2 mRNA表达水平比较

与肠易激综合征组比较，##P<0.05。

2.2 HBD-2免疫组化染色结果

HBD-2阳性染色主要在细胞质内表达，少量在细胞核内表达。阳性细胞主要定位于肠腺和肠上皮细胞间的间质细胞。在溃疡性结肠炎组患者的肠黏膜中观察到大量HBD-2表达，而在肠易激综合征组和对照组患者肠黏膜中，仅发现少量或未见HBD-2表达。HBD-2阳性表达率在溃疡性结肠炎组的结肠黏膜中明显高于对照组和肠易激综合征组，差异有显著统计学意义(P<0.01), 肠易激综合征组、对照组间HBD-2阳性表达率无显著差异(P>0.05), 见表2。

表2 各组结肠黏膜中HBD-2表达阳性率

2.3 各组结肠黏膜中HBD-2表达强度比较

如表3所示, HBD-2表达强度(2+、3+)在溃疡性结肠炎组患者的结肠黏膜中明显强于肠易激综合征组、对照组，差异有显著统计学意义(P<0.05)。

表3 各组患者结肠黏膜中HBD-2表达强度比较[n(%)]

3 讨 论

溃疡性结肠炎的主要临床表现为腹痛、腹泻、黏液脓血便，主要与环境、免疫和遗传等因素有关。目前大多数研究认为，溃疡性结肠炎与异常的免疫反应相关，尤其是肠黏膜局部异常免疫反应。研究[5-6]表明，在溃疡性结肠炎的发生发展中，各种炎性介质和细胞因子的相互作用形成复杂的细胞因子网络，具有放大自身的作用，可以促进炎症反应，引起黏膜损伤。肠易激综合征指腹胀、腹痛、大便性状和排便习惯异常等症状，间歇发作或持续存在，无生化和形态学异常改变，是胃肠道功能紊乱性疾病，在临床上比较常见。目前有不少专家认为，肠易激综合征与神经、精神因素及肠道刺激因素有关。

防御素是阳离子短肽，属于可以在动植物体内参与机体防御活动的抗菌肽的一种，分子量为4kD-5kD, 含保守的胱氨酸残基6个半，形成了3个比较典型的分子内二硫键。具有广谱抗菌活性的HBD-2可以强力杀灭革兰阳性菌、革兰阴性菌及酵母菌等，尤其对革兰阴性菌，杀菌效果更显著。一般认为, HBD-2主要通过对细菌膜的渗透性改变而起到抗菌作用，且由HBD-2分子的正电性和两亲性决定这种作用的强弱。有学者[7]研究了溃疡性结肠炎患者及正常对照组患者的结肠黏膜HBD-2表达，结果表明HBD-2在非炎症结肠中不存在，而在溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中的表达水平明显高于正常对照组。在本研究中，无论在蛋白水平，还是mRNA水平, HBD-2的表达水在溃疡性结肠炎患者的结肠黏膜中较肠易激综合征及正常对照组患者的结肠黏膜明显增高。提示HBD-2在溃疡性结肠炎的发生发展中发挥重要作用。但溃疡性结肠炎患者轻、中、重度之间HBD-2的表达水平无显著差异，推测HBD-2表达于溃疡性结肠炎的病情严重程度无关。

目前，溃疡性结肠炎最常用的治疗药物有免疫抑制剂、氨基水杨酸类及皮质类固醇，总有效率为70%～80%, 但这些药物只能暂时控制或缓解症状，无法从根本上治愈[8-9]。而且，长期应用这些药物容易增加不良反应，停药后复发率较高，对部分难治性患者的效果不理想。因此，比较理想的治疗途径是根据发病机制的重要环节进行阻断。HBD-2中的防御素具有强大抗菌功能，有广阔的临床应用前景。有学者[10]提出，在深入了解防御素表达的调节机制的基础上，设计药物对靶器官的防御素表达进行特异地调节，以此达到治疗目的。HBD-2基因曾被作为基因治疗的研究模型而转入鼠的细胞系，并取得了有意义的初步成果。目前，虽然一些防御素转基因体系已经建立，但仅存在于动物模型中[11-12], 因此，深入研究防御素转基因体系，有助于对UC发病机制的阐明，并为新型抗生素的开发提供理想的模板和分子骨架，给溃疡性结肠炎的治疗带来新的希望。

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