卵巢癌患者手术治疗前后血清HMGB1、VEGF水平的变化及临床意义

智华 马海燕 陈晓莉

·论著·

卵巢癌患者手术治疗前后血清HMGB1、VEGF水平的变化及临床意义

智华 马海燕 陈晓莉

目的研究卵巢癌患者手术治疗前后血清高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平的变化及临床意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测40例卵巢癌、60例卵巢良性肿瘤患者血清HMGB1、VEGF的表达水平，另设30例健康人作为对照组。结果卵巢癌组HMGB1、VEGF表达水平与卵巢良性肿瘤组及对照组比较显著增高(P<0.05)，而卵巢良性肿瘤组和对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。手术治疗后，卵巢癌患者血清HMGB1、VEGF表达水平显著降低，与治疗前比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论HMGB1、VEGF在卵巢癌患者血清的表达水平可为疾病疗效判断和预后评估提供重要参考价值。

卵巢肿瘤；高迁移率族蛋白B1；血管内皮生长因子

研究显示，卵巢癌的病死率位居妇科恶性肿瘤首位，具有易于播散、转移和复发率高的特点[1]。高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)是一种广泛存在于真核细胞内、与染色体结合的非组蛋白。研究发现，HMGB1作为一种肿瘤转移促进基因，在多种恶性肿瘤组织表达上调，参与肿瘤的发生发展、侵袭转移过程[2]。HMGB1与其配基晚期糖基化终产物受体(receptor foradvanced glycation end products，RAGE)结合通过上调血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达促进血管内皮细胞的迁移增殖、新生血管生成和淋巴转移[3]。然而，目前有关卵巢癌手术治疗前后血清HMGB1、VEGF表达水平变化的研究尚不多见。本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测卵巢癌、卵巢良性肿瘤及健康人血清HMGB1、VEGF的表达水平，为阐明卵巢癌的发病机制及治疗提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取河北省张家口市第五医院2011年4月至2012年10月期间收治的卵巢癌患者40例，均经临床、超声、CT及病理等方法确诊。卵巢癌患者年龄30～72岁，平均年龄45.5岁；其中卵巢浆液性囊腺癌24例，黏液性囊腺癌11例，子宫内膜样腺癌5例；病理分级参照WHO标准，其中高分化14例，低分化16例，中分化10例；临床分期参照FIGO标准，其中Ⅰ期8例，Ⅱ期9例，Ⅲ期12例，Ⅳ期11例；有淋巴结转移者12例，无转移者28例。卵巢良性肿瘤60例，患者年龄28～64岁，平均年龄32.5岁。所有患者均排除肝、肾、免疫系统疾病及其他部位肿瘤，术前均未接受放化疗和激素治疗，临床病理资料完整。同时选取我院同期体检正常的健康人30例作为对照。3组一般资料有均衡性。

1.2 实验方法

1.2.1 标本采集：抽取卵巢癌患者手术前后、卵巢良性肿瘤患者和健康人清晨空腹静脉血5 ml,室温静置1 h，4℃ 1 000 r/min离心15 min，取上清冻于-80℃待检。

1.2.2 ELISA法：采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定HMGB1、VEGF蛋白水平。试剂盒购自上海生物工程有限公司，操作严格按照说明书进行。

2 结果

2.1 3组HMGB1、VEGF表达水平比较 卵巢癌组 HMGB1、VEGF表达水平均显著高于卵巢良性肿瘤组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢良性肿瘤组和对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 3组血清HMGB1、VEGF表达水平比较

表1 3组血清HMGB1、VEGF表达水平比较

组别HMGB1(μg/ml)VEGF(pg/ml)卵巢癌组(n=40)238±29499±114卵巢良性肿瘤组(n=60)117±21*163±62*对照组(n=30) 112±19*#155±55*#

注：与卵巢组比较，*P<0.05；与卵巢良性肿瘤组比较，#P<0.05

2.2 HMGB1、VEGF表达与卵巢癌临床病理特征的关系 HMGB1、VEGF表达水平与组织学类型无关(P>0.05)，而与TNM临床分期、病理分级、淋巴结转移情况密切相关(P<0.05)。见表2。

表2 HMGB1、VEGF表达与卵巢癌临床病理特征的关系

表2 HMGB1、VEGF表达与卵巢癌临床病理特征的关系

病理特征血清HMGB1(μg/ml)P值血清VEGF(pg/ml)P值组织学类型 卵巢浆液性囊腺癌(n=24)229±250.096487±1020.104 黏液性囊腺癌(n=11)236±27512±127 子宫内膜样腺癌(n=5)243±31491±120病理分级 高分化(n=14)150±200.008392±800.011 中分化(n=10)199±24451±92 低分化(n=16)243±35506±106临床分期 Ⅰ～Ⅱ期(n=17)210±220.010441±810.006 Ⅲ～Ⅳ期(n=23)248±36511±114淋巴结转移 无(n=28)176±180.009425±810.004 有(n=12)245±38513±118

2.3 肺癌患者血清HMGB1、VEGF表达的相关性分析 直线相关分析显示，卵巢癌患者血清HMGB1、VEGF水平呈正相关(r=9.315，P<0.05)。

2.4 手术后患者血清HMGB1、VEGF水平的变化 30例卵巢癌患者手术后HMGB1、VEGF水平均显著下降，与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 手术治疗前后HMGB1、VEGF水平比较

表3 手术治疗前后HMGB1、VEGF水平比较

组别HMGB1(μg/ml)术前术后6个月VEGF(pg/ml)术前术后6个月卵巢癌组(n=42)238±29170±23*499±114268±94*

注：与术前比较，*P<0.05

3 讨论

HMGB1是广泛存在于真核细胞内序列高度保守的DNA结合蛋白，与染色质非特异结合后参与DNA空间构象的构建、细胞复制与分化及基因转录调控等多种生理过程。近年来多项研究证实，HMGB1及其配基晚期糖基化终产物受体(receptor foradvanced glycation end products，RAGE)在胃癌、肝癌、结直肠癌、宫颈癌、子宫内膜癌等多种恶性肿瘤组织表达上调，在肿瘤的发生发展、侵袭和转移过程中发挥重要作用[4]。

VEGF是目前已知最有效的促血管、淋巴管生成因子，其介导的新生血管和淋巴管形成在肿瘤的生长、侵袭和转移中发挥关键作用。VEGF作为强有丝分裂原刺激内皮细胞分泌纤溶酶原激活物及其抑制物，促进细胞分裂、增殖和迁移，导致肿瘤周围大量新生血管和淋巴管生成。正常情况下VEGF呈低表达状态，然而在宫颈癌、喉癌、肝癌等多种肿瘤组织和患者血清中均能检测到VEGF的表达增高[5,6]。

HMGB1可由单核巨噬细胞和坏死的肿瘤细胞分泌，与细胞外基质相互作用并诱导新生血管形成，从而促进肿瘤细胞的侵袭转移。本研究发现，卵巢癌患者血清存在HMGB1、VEGF的高表达，与卵巢良性肿瘤和健康人比较，差异有统计学意义(P<0.05)，且与临床分期、病理分级和淋巴结转移密切相关，提示HMGB1、VEGF表达上调促进了卵巢癌的侵袭转移过程，与国内外文献报道[5,6]一致。本研究发现，随着卵巢癌临床分期、病理分级的增高和出现转移，HMGB1、VEGF表达水平均相应上调，相关性分析显示，二者表达呈正相关(r=9.315，P<0.05)，提示HMGB1与RAGE结合后可能通过上调VEGF的表达促进了血管内皮细胞的迁移增殖、新生血管生成和淋巴转移。Salahira等[7]研究发现，重组人HMGB1蛋白能促进口腔鳞状细胞癌细胞VEGF的表达，从而在体外细胞水平为HMGB1促进肿瘤血管生成提供了实验依据。Greenberger等[8]继而发现MAPK、NF-κB等信号途径参与了HMGB1/RAGE对VEGF表达的调控。Jiang等[9]利用siRNA技术敲低肝癌HCCLM3细胞HMGB1表达后，NF-κB和VEGF表达均显著降低。以上研究均提示，HMGB1可能通过促进VEGF等血管生成因子的分泌导致血管新生和肿瘤转移，这可能是HMGB1促进卵巢癌侵袭转移的机制之一。此外，HMGB1促进肿瘤细胞侵袭转移还可能涉及其他机制：(1)HMGB1与RAGE等细胞膜分子结合，激活MAPK、P38、JNK及P42/P44等信号途径，直接造成纤维蛋白溶酶激活级联的下游靶点MMP-2和MMP-9的激活，促进细胞外基质的降解和肿瘤的侵袭转移；(2)HMGB1参与了类固醇激素等多个与恶性肿瘤相关基因的转录及转录后调控过程，这些基因的异常表达造成细胞表型的改变。

综上所述，卵巢癌患者 HMGB1、VEGF的高表达与新生血管、淋巴管形成及肿瘤侵袭转移有关。采取有效手段阻断新生血管、淋巴管形成是当前肿瘤治疗方面研究的热点，而对治疗靶点的选择至关重要。本研究结果显示，HMGB1、VEGF在卵巢癌患者血清中高表达，且二者表达与新生血管、淋巴管形成密切相关。采用抑制剂或siRNA技术阻断 HMGB1 的高表达可能下调 VEGF 的表达，并直接抑制血管、淋巴管生成。总之，对HMGB1、VEGF表达水平的监测不仅可作为卵巢癌预后评估的重要指标，更重要的是，深入研究HMGB1、VEGF参与卵巢癌侵袭转移的信号机制可为卵巢癌的基因治疗提供潜在的治疗靶点，并有利于研发新的抗肿瘤药物。

1 Bast RC，Hennessy B，Mills GB．The biology of ovarian cancer: new opportunities for translation．Nat Rev Cancer，2009，9:415-428．

2 刘晓燕,张捷,陈洁.高迁移率族蛋白 B1在卵巢癌组织及单克隆细胞亚系中的表达及其临床意义．山东大学学报，2011，49:123-131．

3 Diener KR,Al-Dasooqi N,Lousberg EL,et al.The multifunctional alarmin HMGB1 with roles in the pathophysiology of sepsis and cancer.Immunol Cell Biol,2013.352.

4 曹清心,刘宇,凌昌全.HMGB1与肿瘤相关性的研究进展.临床肿瘤学杂志，2012,17：282-285.

5 吴蔚，张雪玉，杨彩虹.HMGB1和VEGF-C在宫颈鳞癌中的表达及意义．宁夏医科大学学报，2012，34: 699-708．

6 Sullu Y,Gun S,Atmaca S,et al.Poor prognostic clinicopathologic features correlate with VEGF expression but not with PTEN expression in squamous cell carcinoma of the larynx.Diagn Pathol,2010,5:35.

7 Salahira T,Kirita T,Bhawal UK,et al.The expression of receptor for advanced glycation end products is associated with angiogenesis in human oral squamous cell carcinoma.Virchows Arch,2007,450:287-295.

8 Greenberger S，Adini I，Boscolo E，et al． Targeting NF-κB in infantile hemangioma-derived stem cells reduces VEGF-A expression． Angiogenesis，2010，13:327-335．

9 Jiang W,Wang Z,Li X,et al.Reduced high-mobility group box 1 expression induced by RNA interference inhibits the bioactivity of hepatocellular carcinoma cell line HCCLM3.Dig Dis Sci,2012,57:92-98.

ThechangesandclinicalsignificanceofserumlevelsofHMGB1,VEGFbeforeandafteroperationinpatientswithovariancarcinoma

ZHIHua*,MAHaiyan,CHENXiaoli.*CenterforDiseaseControlandPreventionofQiaoxiDistrict,Hebei,Zhangjiakou075000，China

ObjectiveTo investigate the changes and clinical significance of serum levels of HMGB1,VEGF before and after operation in patients with ovarian carcinoma.MethodsThe serum levels of HMGB1 and VEGF were detected by ELISA in 40 patients with ovarian cancer before and after operation,60 patients with benign ovarian tumor and 30 healthy subjects.ResultsThe serum levels of HMGB1 and VEGF were obviously increased in ovarian carcinoma group,as compared with those in the other two groups (P<0.05).However there were no significant differences between normal control group and benign ovarian tumor group (P<0.05).After operation,the serum levels of HMGB1 and VEGF were significantly decreased in ovarian carcinoma group,as compared with those before treatment (P<0.05).ConclusionDetection of serum levels of HMGB1 and VEGF has important reference value for evaluating therapeutic efficacy and prognosis of patients with ovarian carcinoma.

ovarian carcinoma;high mobility group box 1;vascular endothelial growth factor

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.09.006

075000 河北省张家口市桥西区疾病预防控制中心(智华)；河北省张家口市第二医院骨五科(马海燕)；河北省张家口市第五医院(陈晓莉)

R 737.31

A

1002-7386(2014)09-1297-03

2013-11-19)