丹参酚酸抗类风湿性关节炎致骨质疏松的实验研究

林民贵　肖彦燊

【摘要】 目的 探讨丹参酚酸抗类风湿性关节炎（RA） 致骨质疏松的实验情况。方法 成功建立RA模型的大鼠筛选出40只， 随机分为生理盐水组10只、丹参骨宝高剂量组10只、丹参骨宝中剂量组10只、丹参骨宝低剂量组10只。结果 丹参骨宝高剂量组、中剂量组、低剂量组IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗环瓜氨酸多肽抗体（抗CCP抗体）、骨保护素（OPG）、核因子κβ受体活化因子配体（RNAKL）均优于生理盐水组， 差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 丹参酚酸治疗类风湿性关节炎致骨质疏松的效果明显， 值得进一步探讨和应用。

【关键词】 丹参酚酸；类风湿性关节炎；骨质疏松

类风湿性关节炎（RA）在疾病发展和治疗过程中会并发骨质疏松， 骨关节的破坏和骨质疏松是其致残的主要原因。新的研究表明[1]， 骨矿密度减少在RA病程早期就已经出现， 抗骨质疏松的治疗在疾病早期即应考虑。此外， RA引起骨质疏松跟激素疗法有关， 糖皮质激素治疗RA过程中会诱发或加重骨质疏松。选择有效的治疗方法， 治疗RA致骨质疏松成为临床科室研究的重点问题[2]。本研究通过对丹参酚酸抗RA致骨质疏松的实验进行观察和分析， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 首先建立RA的大鼠模型， 1月龄雌性SD大鼠每只于左后足跖皮内注射浓度为2.5 mg/ml的Ⅱ型胶原蛋白（collagen Ⅱ， CⅡ） 0.1 ml（将酸可溶性CⅡ用弗氏完全佐剂配成于CⅡ浓度为2.5 mg/ml乳剂）。1周后以相同剂量于每只大鼠尾部及左后足跖部加强注射1次。2周后把上述成功建立RA模型的大鼠筛选出40只， 随机分为生理盐水组、丹参骨宝高剂量组、丹参骨宝中剂量组、丹参骨宝低剂量组， 每组10支。灌胃1次/d， 连续给药12周。给药12周后处死取材。

1. 2 方法

1. 2. 1 制备丹参总酚酸 称取干燥至恒质量的丹参饮片适量， 以80% 的乙醇溶液为溶剂， 按体积比1：5加入， 置锥形瓶中， 混匀， 放入超声清洗器中超声提取30 min， 冷却至室温， 过滤取滤液， 滤渣再进行二次超声振荡提取， 合并滤液， 密闭冷藏保存， 备用。采用Folin-Ciocalteu 法测定总酚酸含量。

1. 2. 2 通过ELISA法对三种类风湿因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗CCP抗体和OPG、RNAKL进行测定。

1. 3 观察指标 观察研究对象三种类风湿因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗环瓜氨酸多肽抗体（抗CCP抗体）、骨保护素（OPG）、核因子κB受体激活配体（RNAKL）指标变化情况：IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率判定标准是≥20 RU/ml。

1. 4 统计学方法 采用统计学软件SPSS19.0建立数据库。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

研究对象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗CCP抗体、OPG、RNAKL情况， 见表1。丹参骨宝高、中、低剂量组IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性素、抗CCP抗体、OPG、RNAKL均优于生理盐水组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

类风湿性关节炎（RA）及RA性骨质疏松是一种老年性、疑难性重症疾病， 对人类和社会危害极大[3]。RA患者的骨丢失有三种类型：关节软骨下骨和关节边缘骨丢失、受累关节周围骨丢失、躯干和四肢骨骼广泛骨丢失。研究证实[4]， 在各关节骨质破坏的环境中， 破骨细胞是骨侵蚀和骨质疏松的主要因素。此外， 炎症因子作用下的成骨细胞加速凋亡和成骨细胞的功能下降， 使RA中的成骨细胞数量不足， 功能不佳；在加上过度活化的破骨细胞系统， 这就使得骨重建的平衡大大偏向骨丢失的一端。而治疗RA过程中， 大量使用糖皮质激素药物， 会诱发或加重骨质疏松， 因此糖皮质激素治疗RA受到一定的限制。目前国内约有400万RA患者， 如能寻找到一种低毒有效的药物将大有市场[5]。因此， 将丹参酚酸开发成防治RA性骨质疏松的新药， 将造福于广大RA患者， 具有良好的市场前景和具有广阔的发展前景。丹参是著名抗衰老中药， 为唇形科植物丹参（salvia miltiorrhiza bge） 的干燥根， 是著名的传统中药， 具有抗氧化、改善微循环防止血栓形成等多种功能[6]。丹参可促进骨愈合， 预防股骨头坏死， 有效降低绝经期妇女骨质疏松血中骨吸收生物指标， 还具有抗炎和增强免疫的调节作用[7]。近代已从中分离得多种化学成分， 包括脂溶性成分和水溶性成分， 水溶性成分有原儿茶醛、丹参素（丹参酸甲）、丹参酸乙等。丹参富含丹参素， 丹参酚酸等具有抗脂质氧化、扩张血管、改善微循环作用， 也具有抗炎和增强免疫的调节作用的活性成分[8]。但丹参酚酸是否对RA性骨质疏松有预防作用未见有相关报道， 本研究通过成功建立RA模型的大鼠筛选出40只， 随机分为生理盐水组10只、丹参骨宝高剂量组10只、丹参骨宝中剂量组10只、丹参骨宝低剂量组10只。结果：丹参骨宝高剂量组、中剂量组、低剂量组IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗CCP抗体、OPG、RNAKL均优于生理盐水组， 提示丹参酚酸可以有效的改善风湿性关节炎并骨质疏松的各项因子阳性率和因子水平。

综上所述， 丹参酚酸开发成治疗类风湿性关节炎致骨质疏松的相关药品或食品具有重要的社会意义和经济价值。

参考文献

[1] 周晟芳，李艳，刘梅洁.无比山药丸对去卵巢所致骨质疏松症大鼠胫骨骨组织形态计量学指标的影响.中国中医基础医学杂志， 2012，18（11）：1211-1212.

[2] 陈健，黄礼群，胡裕君，等.低频脉冲电磁场对去势骨质疏松大鼠腰椎骨形态计量学的影响.中国修复重建外科杂志， 2011， 25（12）：1455-1458.

[3] 陈海啸，梁军波，伍海昭.骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠腰椎松质骨骨形态计量学参数的影响.中医正骨， 2011，23（4）：18-20.

[4] 刘易军，孟广伟，宫赫，等.人工加载对悬吊大鼠骨组织形态计量学影响的实验研究.中国生物医学工程学报， 2008， 27（6）： 838-841.

[5] 史晓林，吴连国，徐建春.强骨饮对去卵巢大鼠腰椎骨形态计量学的影响.中国骨伤， 2008，21（4）：287-288.

[6] 薛冬英，陈一奕，叶军.丹参酚酸B山楂黄酮联用对大鼠非酒精性脂肪性肝病相关因素的干预作用.中国中西医结合消化杂志， 2012，20（6）：245-248.

[7] 罗朵生，何伟，郭姣，等.大孔吸附树脂纯化丹参酚酸的研究.中国实验方剂学杂志， 2010，16（6）：14-16.

[8] 黄继汉，王鲲，许羚，等.丹参酚酸B在健康人群个体内暴露程度的生物标志物发现.中国临床药理学与治疗学， 2011， 16（5）：510-517.

[收稿日期：2014-04-14]endprint

【摘要】 目的 探讨丹参酚酸抗类风湿性关节炎（RA） 致骨质疏松的实验情况。方法 成功建立RA模型的大鼠筛选出40只， 随机分为生理盐水组10只、丹参骨宝高剂量组10只、丹参骨宝中剂量组10只、丹参骨宝低剂量组10只。结果 丹参骨宝高剂量组、中剂量组、低剂量组IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗环瓜氨酸多肽抗体（抗CCP抗体）、骨保护素（OPG）、核因子κβ受体活化因子配体（RNAKL）均优于生理盐水组， 差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 丹参酚酸治疗类风湿性关节炎致骨质疏松的效果明显， 值得进一步探讨和应用。

【关键词】 丹参酚酸；类风湿性关节炎；骨质疏松

类风湿性关节炎（RA）在疾病发展和治疗过程中会并发骨质疏松， 骨关节的破坏和骨质疏松是其致残的主要原因。新的研究表明[1]， 骨矿密度减少在RA病程早期就已经出现， 抗骨质疏松的治疗在疾病早期即应考虑。此外， RA引起骨质疏松跟激素疗法有关， 糖皮质激素治疗RA过程中会诱发或加重骨质疏松。选择有效的治疗方法， 治疗RA致骨质疏松成为临床科室研究的重点问题[2]。本研究通过对丹参酚酸抗RA致骨质疏松的实验进行观察和分析， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 首先建立RA的大鼠模型， 1月龄雌性SD大鼠每只于左后足跖皮内注射浓度为2.5 mg/ml的Ⅱ型胶原蛋白（collagen Ⅱ， CⅡ） 0.1 ml（将酸可溶性CⅡ用弗氏完全佐剂配成于CⅡ浓度为2.5 mg/ml乳剂）。1周后以相同剂量于每只大鼠尾部及左后足跖部加强注射1次。2周后把上述成功建立RA模型的大鼠筛选出40只， 随机分为生理盐水组、丹参骨宝高剂量组、丹参骨宝中剂量组、丹参骨宝低剂量组， 每组10支。灌胃1次/d， 连续给药12周。给药12周后处死取材。

1. 2 方法

1. 2. 1 制备丹参总酚酸 称取干燥至恒质量的丹参饮片适量， 以80% 的乙醇溶液为溶剂， 按体积比1：5加入， 置锥形瓶中， 混匀， 放入超声清洗器中超声提取30 min， 冷却至室温， 过滤取滤液， 滤渣再进行二次超声振荡提取， 合并滤液， 密闭冷藏保存， 备用。采用Folin-Ciocalteu 法测定总酚酸含量。

1. 2. 2 通过ELISA法对三种类风湿因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗CCP抗体和OPG、RNAKL进行测定。

1. 3 观察指标 观察研究对象三种类风湿因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗环瓜氨酸多肽抗体（抗CCP抗体）、骨保护素（OPG）、核因子κB受体激活配体（RNAKL）指标变化情况：IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率判定标准是≥20 RU/ml。

1. 4 统计学方法 采用统计学软件SPSS19.0建立数据库。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

研究对象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗CCP抗体、OPG、RNAKL情况， 见表1。丹参骨宝高、中、低剂量组IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性素、抗CCP抗体、OPG、RNAKL均优于生理盐水组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

类风湿性关节炎（RA）及RA性骨质疏松是一种老年性、疑难性重症疾病， 对人类和社会危害极大[3]。RA患者的骨丢失有三种类型：关节软骨下骨和关节边缘骨丢失、受累关节周围骨丢失、躯干和四肢骨骼广泛骨丢失。研究证实[4]， 在各关节骨质破坏的环境中， 破骨细胞是骨侵蚀和骨质疏松的主要因素。此外， 炎症因子作用下的成骨细胞加速凋亡和成骨细胞的功能下降， 使RA中的成骨细胞数量不足， 功能不佳；在加上过度活化的破骨细胞系统， 这就使得骨重建的平衡大大偏向骨丢失的一端。而治疗RA过程中， 大量使用糖皮质激素药物， 会诱发或加重骨质疏松， 因此糖皮质激素治疗RA受到一定的限制。目前国内约有400万RA患者， 如能寻找到一种低毒有效的药物将大有市场[5]。因此， 将丹参酚酸开发成防治RA性骨质疏松的新药， 将造福于广大RA患者， 具有良好的市场前景和具有广阔的发展前景。丹参是著名抗衰老中药， 为唇形科植物丹参（salvia miltiorrhiza bge） 的干燥根， 是著名的传统中药， 具有抗氧化、改善微循环防止血栓形成等多种功能[6]。丹参可促进骨愈合， 预防股骨头坏死， 有效降低绝经期妇女骨质疏松血中骨吸收生物指标， 还具有抗炎和增强免疫的调节作用[7]。近代已从中分离得多种化学成分， 包括脂溶性成分和水溶性成分， 水溶性成分有原儿茶醛、丹参素（丹参酸甲）、丹参酸乙等。丹参富含丹参素， 丹参酚酸等具有抗脂质氧化、扩张血管、改善微循环作用， 也具有抗炎和增强免疫的调节作用的活性成分[8]。但丹参酚酸是否对RA性骨质疏松有预防作用未见有相关报道， 本研究通过成功建立RA模型的大鼠筛选出40只， 随机分为生理盐水组10只、丹参骨宝高剂量组10只、丹参骨宝中剂量组10只、丹参骨宝低剂量组10只。结果：丹参骨宝高剂量组、中剂量组、低剂量组IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗CCP抗体、OPG、RNAKL均优于生理盐水组， 提示丹参酚酸可以有效的改善风湿性关节炎并骨质疏松的各项因子阳性率和因子水平。

综上所述， 丹参酚酸开发成治疗类风湿性关节炎致骨质疏松的相关药品或食品具有重要的社会意义和经济价值。

参考文献

[1] 周晟芳，李艳，刘梅洁.无比山药丸对去卵巢所致骨质疏松症大鼠胫骨骨组织形态计量学指标的影响.中国中医基础医学杂志， 2012，18（11）：1211-1212.

[2] 陈健，黄礼群，胡裕君，等.低频脉冲电磁场对去势骨质疏松大鼠腰椎骨形态计量学的影响.中国修复重建外科杂志， 2011， 25（12）：1455-1458.

[3] 陈海啸，梁军波，伍海昭.骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠腰椎松质骨骨形态计量学参数的影响.中医正骨， 2011，23（4）：18-20.

[4] 刘易军，孟广伟，宫赫，等.人工加载对悬吊大鼠骨组织形态计量学影响的实验研究.中国生物医学工程学报， 2008， 27（6）： 838-841.

[5] 史晓林，吴连国，徐建春.强骨饮对去卵巢大鼠腰椎骨形态计量学的影响.中国骨伤， 2008，21（4）：287-288.

[6] 薛冬英，陈一奕，叶军.丹参酚酸B山楂黄酮联用对大鼠非酒精性脂肪性肝病相关因素的干预作用.中国中西医结合消化杂志， 2012，20（6）：245-248.

[7] 罗朵生，何伟，郭姣，等.大孔吸附树脂纯化丹参酚酸的研究.中国实验方剂学杂志， 2010，16（6）：14-16.

[8] 黄继汉，王鲲，许羚，等.丹参酚酸B在健康人群个体内暴露程度的生物标志物发现.中国临床药理学与治疗学， 2011， 16（5）：510-517.

[收稿日期：2014-04-14]endprint

【摘要】 目的 探讨丹参酚酸抗类风湿性关节炎（RA） 致骨质疏松的实验情况。方法 成功建立RA模型的大鼠筛选出40只， 随机分为生理盐水组10只、丹参骨宝高剂量组10只、丹参骨宝中剂量组10只、丹参骨宝低剂量组10只。结果 丹参骨宝高剂量组、中剂量组、低剂量组IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗环瓜氨酸多肽抗体（抗CCP抗体）、骨保护素（OPG）、核因子κβ受体活化因子配体（RNAKL）均优于生理盐水组， 差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 丹参酚酸治疗类风湿性关节炎致骨质疏松的效果明显， 值得进一步探讨和应用。

【关键词】 丹参酚酸；类风湿性关节炎；骨质疏松

类风湿性关节炎（RA）在疾病发展和治疗过程中会并发骨质疏松， 骨关节的破坏和骨质疏松是其致残的主要原因。新的研究表明[1]， 骨矿密度减少在RA病程早期就已经出现， 抗骨质疏松的治疗在疾病早期即应考虑。此外， RA引起骨质疏松跟激素疗法有关， 糖皮质激素治疗RA过程中会诱发或加重骨质疏松。选择有效的治疗方法， 治疗RA致骨质疏松成为临床科室研究的重点问题[2]。本研究通过对丹参酚酸抗RA致骨质疏松的实验进行观察和分析， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 首先建立RA的大鼠模型， 1月龄雌性SD大鼠每只于左后足跖皮内注射浓度为2.5 mg/ml的Ⅱ型胶原蛋白（collagen Ⅱ， CⅡ） 0.1 ml（将酸可溶性CⅡ用弗氏完全佐剂配成于CⅡ浓度为2.5 mg/ml乳剂）。1周后以相同剂量于每只大鼠尾部及左后足跖部加强注射1次。2周后把上述成功建立RA模型的大鼠筛选出40只， 随机分为生理盐水组、丹参骨宝高剂量组、丹参骨宝中剂量组、丹参骨宝低剂量组， 每组10支。灌胃1次/d， 连续给药12周。给药12周后处死取材。

1. 2 方法

1. 2. 1 制备丹参总酚酸 称取干燥至恒质量的丹参饮片适量， 以80% 的乙醇溶液为溶剂， 按体积比1：5加入， 置锥形瓶中， 混匀， 放入超声清洗器中超声提取30 min， 冷却至室温， 过滤取滤液， 滤渣再进行二次超声振荡提取， 合并滤液， 密闭冷藏保存， 备用。采用Folin-Ciocalteu 法测定总酚酸含量。

1. 2. 2 通过ELISA法对三种类风湿因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗CCP抗体和OPG、RNAKL进行测定。

1. 3 观察指标 观察研究对象三种类风湿因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗环瓜氨酸多肽抗体（抗CCP抗体）、骨保护素（OPG）、核因子κB受体激活配体（RNAKL）指标变化情况：IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率判定标准是≥20 RU/ml。

1. 4 统计学方法 采用统计学软件SPSS19.0建立数据库。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

研究对象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗CCP抗体、OPG、RNAKL情况， 见表1。丹参骨宝高、中、低剂量组IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性素、抗CCP抗体、OPG、RNAKL均优于生理盐水组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

类风湿性关节炎（RA）及RA性骨质疏松是一种老年性、疑难性重症疾病， 对人类和社会危害极大[3]。RA患者的骨丢失有三种类型：关节软骨下骨和关节边缘骨丢失、受累关节周围骨丢失、躯干和四肢骨骼广泛骨丢失。研究证实[4]， 在各关节骨质破坏的环境中， 破骨细胞是骨侵蚀和骨质疏松的主要因素。此外， 炎症因子作用下的成骨细胞加速凋亡和成骨细胞的功能下降， 使RA中的成骨细胞数量不足， 功能不佳；在加上过度活化的破骨细胞系统， 这就使得骨重建的平衡大大偏向骨丢失的一端。而治疗RA过程中， 大量使用糖皮质激素药物， 会诱发或加重骨质疏松， 因此糖皮质激素治疗RA受到一定的限制。目前国内约有400万RA患者， 如能寻找到一种低毒有效的药物将大有市场[5]。因此， 将丹参酚酸开发成防治RA性骨质疏松的新药， 将造福于广大RA患者， 具有良好的市场前景和具有广阔的发展前景。丹参是著名抗衰老中药， 为唇形科植物丹参（salvia miltiorrhiza bge） 的干燥根， 是著名的传统中药， 具有抗氧化、改善微循环防止血栓形成等多种功能[6]。丹参可促进骨愈合， 预防股骨头坏死， 有效降低绝经期妇女骨质疏松血中骨吸收生物指标， 还具有抗炎和增强免疫的调节作用[7]。近代已从中分离得多种化学成分， 包括脂溶性成分和水溶性成分， 水溶性成分有原儿茶醛、丹参素（丹参酸甲）、丹参酸乙等。丹参富含丹参素， 丹参酚酸等具有抗脂质氧化、扩张血管、改善微循环作用， 也具有抗炎和增强免疫的调节作用的活性成分[8]。但丹参酚酸是否对RA性骨质疏松有预防作用未见有相关报道， 本研究通过成功建立RA模型的大鼠筛选出40只， 随机分为生理盐水组10只、丹参骨宝高剂量组10只、丹参骨宝中剂量组10只、丹参骨宝低剂量组10只。结果：丹参骨宝高剂量组、中剂量组、低剂量组IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF阳性率、抗CCP抗体、OPG、RNAKL均优于生理盐水组， 提示丹参酚酸可以有效的改善风湿性关节炎并骨质疏松的各项因子阳性率和因子水平。

综上所述， 丹参酚酸开发成治疗类风湿性关节炎致骨质疏松的相关药品或食品具有重要的社会意义和经济价值。

参考文献

[1] 周晟芳，李艳，刘梅洁.无比山药丸对去卵巢所致骨质疏松症大鼠胫骨骨组织形态计量学指标的影响.中国中医基础医学杂志， 2012，18（11）：1211-1212.

[2] 陈健，黄礼群，胡裕君，等.低频脉冲电磁场对去势骨质疏松大鼠腰椎骨形态计量学的影响.中国修复重建外科杂志， 2011， 25（12）：1455-1458.

[3] 陈海啸，梁军波，伍海昭.骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠腰椎松质骨骨形态计量学参数的影响.中医正骨， 2011，23（4）：18-20.

[4] 刘易军，孟广伟，宫赫，等.人工加载对悬吊大鼠骨组织形态计量学影响的实验研究.中国生物医学工程学报， 2008， 27（6）： 838-841.

[5] 史晓林，吴连国，徐建春.强骨饮对去卵巢大鼠腰椎骨形态计量学的影响.中国骨伤， 2008，21（4）：287-288.

[6] 薛冬英，陈一奕，叶军.丹参酚酸B山楂黄酮联用对大鼠非酒精性脂肪性肝病相关因素的干预作用.中国中西医结合消化杂志， 2012，20（6）：245-248.

[7] 罗朵生，何伟，郭姣，等.大孔吸附树脂纯化丹参酚酸的研究.中国实验方剂学杂志， 2010，16（6）：14-16.

[8] 黄继汉，王鲲，许羚，等.丹参酚酸B在健康人群个体内暴露程度的生物标志物发现.中国临床药理学与治疗学， 2011， 16（5）：510-517.

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