复方红黄洗剂质量标准研究*

★ 黄晓巧 李养学 胥爱丽 李素梅

(1.广东省第二中医院 广东 广州 510095；2.广东省中医研究所 广东 广州 510095)

复方红黄洗剂由白芷、黄柏、干姜、侧柏叶等中药组成，具有清热解毒、燥湿止痒、活血化瘀、益发生发之功效，主要用于斑秃、脂溢性脱发、头皮发痒、头屑多等症。为了更好地控制产品质量，保证临床疗效，对复方红黄洗剂中的白芷、黄柏、干姜、侧柏叶4味药材进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱法对本品中白芷的有效成分欧前胡素进行了含量测定，为该制剂建立完善的质量标准提供了依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 CAMAG TLC SAMPLER 4型自动点样仪；CAMAG TLC Visualizer型薄层成像系统；Waters 2695-2998高效液相色谱仪(PAD二级管阵列检测器)；Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；Mettler Toledo XS205DU电子天平；DHG-9070A电热鼓风干燥箱；SPX-150C型温恒湿培养箱；KQ5200DE型数控超声波清洗器。

1.2 材料 复方红黄洗剂(批号：20130401、20130402、20130403)由广东省第二中医院制剂室提供。欧前胡素对照品(批号：110826-201013)、白芷对照药材(批号：120945-200707)、黄柏对照药材(批号：121510-200703)、干姜对照药材(批号：120942-200606)、侧伯叶对照药材(批号：121396-200401)均购于中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，试验用水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 白芷的鉴别[1]取本品5mL，置蒸发皿中，加硅藻土适量吸附，蒸干，转移至锥形瓶中，加乙醚10mL，浸泡1h，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芷对照药材1g，加乙醚10mL，同法制成白芷对照药材溶液。再取欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-乙醚(3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.1.2 黄柏的鉴别[1]取本品2mL，置蒸发皿中，加硅藻土适量吸附，蒸干，转移至锥形瓶中，加1%醋酸甲醇溶液40mL，60℃超声处理20min，滤过，滤液浓缩至2mL，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.5g，加1%醋酸甲醇溶液40mL，同法制成黄柏对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述2种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂[2,3]，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.1.3 干姜的鉴别[2]取本品20mL，用正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取干姜对照药材1g，加水100mL，煮沸1h，冷却，滤过，滤液用正丁醇振摇提取2次，每次20mL，同法制成干姜对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。

2.1.4 侧柏叶的鉴别[3]取本品12mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，加硅藻土适量吸附，转移至锥形瓶中，加水25mL，再加盐酸3mL，水浴加热水解30min，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，用水洗涤3次，每次10mL，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液。另取侧柏叶对照药材1g，加水25mL，再加盐酸3mL，同法制成侧柏叶对照药材溶液。再取槲皮素对照品，加乙醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述3种溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.2 含量测定[1]

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取欧前胡素对照品12.30mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10mL，置于100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，即制得每1mL含欧前胡素24.5016μg的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品4mL，置蒸发皿中，加硅藻土适量吸附，蒸干，转移至50mL量瓶中，加甲醇45mL，超声处理(功率300W，频率50kHz)1h，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺白芷的阴性样品4mL，按3.2项下供试品溶液制备方法制成白芷阴性对照溶液。

2.2.4 色谱条件与系统适应性条件 色谱柱：Kromasil-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-水(48∶52)[5]；检测波长为254nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃。在上述色谱条件下，欧前胡素与其他成分能较好分离，阴性对照溶液在欧前胡素对照品相同保留时间位置上未见色谱峰，说明阴性对照无干扰，见图1～3。

图1 欧前胡素对照品HPLC图谱

图2 供试品HPLC图谱

图3 阴性对照HPLC图谱

2.2.5 线性范围的考察 精密量取“2.2.1”项下配制好的对照品溶液1，2，3，4，5mL，分别置于5mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，得欧前胡素的浓度分别为4.90032，9.80064，14.70096，19.60128，24.50160μg的对照品溶液。精密吸取上述溶液各10μL，按“2.2.4”项下色谱条件进行测定，测定峰面积，并以峰面积(Y)对欧前胡素含量(X)进行回归，得标准曲线：Y=4239.8X-9114.5(r=0.9999)。表明欧前胡素在49.0032ng～245.0160ng范围内呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL连续重复进样6次，测得峰面积积分值RSD<2%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品(批号：20130401)溶液，分别于0，2，4，8，12h进样10μL，测得样品中欧前胡素峰面积值的RSD<2%，表明供试品溶液12h内稳定性良好。

2.2.8 重复性试验 取同一批样品(批号：20130401)按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，按拟定的含量测定方法，分别精密吸取10μL进样，测得峰面积积分值并计算含量，得欧前胡素含量RSD<2%，表明本方法重现性较好。

2.2.9 加样回收率试验 取已知含量的样品溶液(批号20130401)9份，每份精密量取2mL，分别精密加入一定量的欧前胡素对照品，按供试品制备与测定方法，计算平均回收率为99.30%，RSD为1.42%(n=9)，表明本含量测定方法准确度高，方法可靠，结果见表1。

表1 欧前胡素加样回收率测定结果(n=9)

2.2.10 样品测定 取不同批次样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项下色谱条件进行含量测定，结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=2)

3 讨论

3.1 采用现行版《中国药典》一部白芷、黄柏项下的薄层鉴别方法分别对方中白芷、黄柏进行鉴别，结果色谱斑点清晰，能检出其特征斑点，且阴性无干扰。

3.2 在进行干姜的薄层鉴别研究时，曾采用现行版《中国药典》一部干姜项下薄层鉴别方法进行鉴别，结果色谱斑点不清晰，分离效果欠佳，经不断摸索试验，改用正丁醇提取，并以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(2∶1)作为展开剂，结果色谱斑点清晰，分离较好，可用于本制剂中干姜的质量控制。

3.3 对方中侧柏叶的薄层色谱鉴别研究，也曾采用现行版《中国药典》一部侧柏叶项下薄层鉴别方法进行鉴别，结果分离效果不佳，在参考文献的基础上，用盐酸水解后再进行提取，结果斑点清晰，分离度好。

3.4 方中白芷所含欧前胡素的含量测定方法，参考了《中国药典》白芷项下的含量测定方法，其流动相为甲醇-水(55∶45)，但因本制剂成分较复杂，用此流动相时，所测成分未能与杂质很好的分离，经过条件摸索，将甲醇改为乙腈，并将比例调整为48∶52，分离效果显著提高，欧前胡素色谱峰能达到基线分离，且空白对照无干扰，重现性良好。该方法简单易行，结果准确可靠，可作为复方红黄洗剂中欧前胡素的含量测定方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]肖林林.活血解痛膏的薄层色谱鉴别研究[J].中国现代药物研究，2012,6(22):129-130.

[3]王淑英,吴启端,林双峰,等.舒金克喘胶囊中桑白皮、川贝母、厚朴、侧柏叶的薄层色谱鉴别[J].中成药，2006，28(4):601-602.