不同醇沉浓度板蓝根浸膏粉中多糖寡糖含量测定

★ 曾金娣 刘微 谢茵 罗晓健

(1.江西中医药大学 江西 南昌 330006；2.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 江西 南昌 330006)

板蓝根(Isatidis root),别名靛青根、蓝靛根、靛根[1]，是十字花科植物菘蓝(IsatistinctoriaL.)的干燥根,味苦性寒，具有清热解毒、凉血利咽的功能,临床上广泛用于病毒性疾病及细菌性感染疾病的治疗。板蓝根中含有较多的多糖，它具有多种生物活性,对特异性免疫和非特异性免疫均有一定的促进作用,是一种比较理想的免疫增强剂[2-6]。

本实验以板蓝根不同醇沉浓度喷雾干燥粉为模型药物，考察了不同醇沉浓度对其多糖寡糖含量的影响，为后续深入研究板蓝根不同醇沉喷雾干燥粉的吸湿性及喷雾干燥工艺研究提供依据。

1 材料与仪器

苯酚(AR，西陇化工股份有限公司)；硫酸(AR，苏州市晶协高薪电子材料有限公司)；葡萄糖(AR，西陇化工股份有限公司)；蒸馏水;自制板蓝根不同醇沉浓度喷雾干燥粉。

UV-2550岛津分光光度计(UVProbe工作站)；MAPADA紫外可见分光光度计();BSA2245型分析天平(SARTORIPUS);恒温震荡仪(国华企业SHZ-82)；无水乙醇(AR);自制板蓝根不同醇沉浓度喷雾干燥粉。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的葡萄糖对照品10mg，置100mL容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得0.1 mg/mL葡萄糖对照品溶液。

2.2 浸膏粉多糖与寡糖供试液的制备 精密称取真空干燥12h的中药水提浸膏粉200mg及不同醇沉浓度浸膏粉60mg，分别置具塞锥形瓶中，加8mL蒸馏水置超声仪中超声15min，充分溶解，加入乙醇使含醇量达到80%，置于55℃恒温震荡仪中震荡1h，冷却过滤，滤液备用。滤渣溶于60℃蒸馏水中，震荡1h，冷却过滤，滤液定容至50mL，即为各浸膏粉的多糖供试液；备用滤液置于蒸发皿中，挥干乙醇，加蒸馏水溶解，60℃水浴中溶解1 h，冷却过滤，滤液以蒸馏水定容至250mL为寡糖储备液。精密量取水提浸膏粉寡糖储备液5mL，以蒸馏水定容至50mL即为水提浸膏粉寡糖供试液。精密量取不同醇沉浸膏粉寡糖储备液各5mL，定容至10mL，即为各不同醇沉浓度浸膏粉的寡糖供试液。

2.3 5%苯酚溶液的配制 称取苯酚100g，加铝片0.1g和碳酸钠0.05g，常压蒸馏，收集182℃馏分。精密称取该馏分(100%苯酚)5g，置100mL容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冷藏储存备用。

2.4 最大吸收波长的确定 精密量取1mL标准葡萄糖溶液，精密加入5%苯酚溶液1mL，摇匀，精密加入硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20min，置冰浴中冷却5min，放置至室温，以相应试剂为空白，在UV-2550岛津分光光度计上扫描400～600nm之间的吸光度，检测其最大吸收波长为486nm，以此波长吸收作为本法的吸收波长。

2.5 标准曲线的绘制 分别精密量取对照品溶液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.8，0.9，1.0mL，分别置10mL具塞试管中，加水补至1.0mL，精密加入5%苯酚溶液1mL，摇匀，精密加入硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20min，置冰浴中冷却5min，室温放置20min，以相应试剂为空白，于486nm波长处测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，无水葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。以吸光度A对无水葡萄糖含量进行线性回归，得葡萄糖标准曲线方程为：Y=0.0098X-0.0409(r=0.9997),表明无水葡萄糖在19.44～97.20μg范围内有良好的线性关系。

2.6 精密度试验 分别精密称取标准品0.5mL各6份，依次添加水使终体积为1.0mL分别按2.6项下测定含量，连续测定6次，计算相对标准偏差(RSD)，RSD=0.677%<2%，说明该方法精密度良好。

2.7 重复性试验 按2.2项下"浸膏粉多糖和寡糖供试液的制备"平行制备同一浸膏粉多糖样品6份，测定其吸光度，并计算多糖含量，测得样品中多糖含量分别为：3.52%，3.54%，3.49%，3.70%，3.54%和3.57%，平均含量为3.56%，RSD为3.3%，说明该含量测定方法重复性良好。

2.8 稳定性试验 精密吸取供试品1.0mL，按照2.5项下方法，分别在0，10，20，30，50，60min时进行测定，记录吸光度，得到葡萄糖的吸光度值分别为：0.664，0.663，0.659，0.657，0.658，0.657和0.658，RSD为0.29%。表明供试品溶液在60min内稳定。

2.9 加样回收率试验 按照2.2项下制备多糖储备液及寡糖储备液，分别加入3个浓度水平标准葡萄糖适量,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,按多糖含量测定方法计算多糖寡糖含量，测得多糖平均回收率为100.75%,RSD为1.74%，寡糖平均回收率为100.24%,RSD为1.89%(n=6)。

2.10 样品含量测定 精密量取同批1mL供试品溶液，精密加入5%苯酚溶液1mL，摇匀，精密加入硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20min，置冰浴中冷却5min，室温放置20min，以相应试剂为空白，测定其吸光度，计算中药浸膏粉中多糖和寡糖的含量，结果见表1。

表1 板蓝根不同醇沉浓度下多糖寡糖含量

多糖是一类大分子物质，更易被沉淀出来，随着醇沉浓度的增大，多糖所占含量比重减少，而寡糖多是小分子类物质，不会被醇沉淀出来，其成分含量所占比重增大。

3 结论

通过测定板蓝根不同醇沉浓度浸膏粉多糖寡糖含量的结果看,用本文所确定的苯酚-硫酸法于490nm波长处测定其吸光度，其标准曲线好,回收率高,多糖含量测定结果稳定,重复性高,可以作为多糖含量测定方法。随着醇沉浓度的增大，多糖含量减小，寡糖含量增大。

[1]张体祥,李艳福,刘捷,等.板蓝根多糖的分离纯化及其单糖组成的研究[J].河南工程学院学报(自然科学版),2009,21(3):13.

[2]储岳峰.九种中药成分的免疫增强活性及其作用机理研究[D].南京:南京农业大学,2003.

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[4]肖珊珊,金郁,孙毓庆.板蓝根化学成分、药理及质量控制研究进展[J].沈阳药科大学学报,2003,20(6):455-459.

[5]徐晗,方建国,刘云海.板蓝根最新研究进展[J].中草药,2003,34(4):10-11.

[6]梁永红,侯华新,黎丹戎,等.板蓝根二酮B体外抗癌活性研究[J].中草药,2000,31(7):531-533.