食品卫生微生物检测用培养基质量控制探讨

2014-08-27胡路

中国科技纵横 2014年14期

关键词：pH值成品琼脂

胡路

(重庆市万州食品药品检验所,重庆 404100)

食品卫生微生物检测用培养基质量控制探讨

胡路

(重庆市万州食品药品检验所,重庆 404100)

培养基质量是微生物检测工作的基础,直接决定检测结果的准确性、可靠性。结合实验室实际情况,明确了培养基的购置、贮存、制备、性能测试等过程的质量控制措施,以确保培养基质量满足检测要求。

培养基质量控制微生物检测

食品微生物检测是不同食品标准规定的食品必检项目之一，是按照一定的检测程序和质量控制措施，确定单位样品中某种或某类微生物的数量或存在状况。而培养基质量是微生物检测工作的基础，直接决定检测结果的准确性、可靠性。由于食品微生物培养基品种较多，目前大约有数千种不同的培养基，有液态、半固体、固体几种形式。而培养基质量控制国内可以参考的资料不多，国外的起点较高，又不适宜我国国情，依据GB/T27405《实验室质量控制规范食品微生物检测》(1)，结合实验室实际情况，明确了培养基的购置、贮存、制备、性能测试等过程的质量控制措施，以确保培养基质量满足检测要求。

1 培养基的采购、验收和储存

培养基的采购应从合格供应商中选择厂商采购，每批培养基需供应商提供批号和相对应的质检报告。购买的培养基到货后，由药品管理员和微生物检测人员共同核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。验收合格后，交由检测人员接受保管，并在每瓶培养基上加贴信息标签。根据不同的培养基的特性，妥善保存。干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮，并确保在有效期内用完。需低温保存的培养基应存放在相应温度的低温柜中。

2 培养基的配制

2.1 自制培养基

自制培养基，要严格按照所检样品检测方法标准要求的配方进行准确称量配制、称量时各种不同组分，要用专用的角匙，避免交叉污染；干粉培养基易吸潮，如房间环境湿度较大时，应提高称量速度，完毕后及时盖紧瓶盖。制备培养基的水PH值在5.5—7.5之间，应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水，最好不使用离子交换器生产的去离子水。严格控制配制过程中灭菌的温度、时间，配制完成后应检查PH值，观察其颜色、透明度、杂质、凝胶稳定性等。

2.2 成品培养基

随着市场经济的发展，成品微生物培养基使用越来越多，成品培养基的特点就是方便、快捷、但成品较高。需要注意的是不同厂家，或同一厂家不同批号的相同培养基不能混用。

2.3 培养基溶解注意事项

(1)加热溶解时不能用使用铜或铁锅，防止金属离子混入培养基中，影响微生物的生长[1]；

(2)溶解培养基容器的大小需大于溶解后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基受热，体积膨胀溢出；

(3)含有琼脂类的培养基，在加热溶解前可浸泡数分钟，加热时一定要进行搅拌，以防琼脂粘在容器底部；对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，反复冻容最多只能两次，第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去；

(4)为避免烧焦和沸腾溢出，量少的培养基最好使用水浴进行加热；

(5)烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。

2.4 培养基的灭菌

(1)常用培养基一般采用高压蒸汽湿热灭菌，通常是121℃15min，含糖或特殊培养基，按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。有些菌种代谢周期较短，已配制好的培养基必须在15分钟内灭菌，可避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。为避免高温破坏培养基的营养成分，降低琼脂的凝胶强度，必须严格控制灭菌温度和时间，不可重复灭菌。

(2)部分培养基(如嗜盐琼脂培养基、胆硫乳培养基等)只能煮沸灭菌。

(3)对热敏感的培养基或添加物质，应采用膜过滤方法进行过滤灭菌。

(4)即用型不需灭菌，应参见相关标准或培养基使用说明书，直接使用。

(5)常规应用指示剂监测灭菌过程；可用生物指示剂如嗜热脂肪芽孢杆菌监测杀伤芽孢的效果。

(6)灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，不能长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。并应加贴标识，标注：名称、配置日期、成分、pH值等信息。

3 培养基质量控制方法

3.1 理化试验方法

3.1.1 培养基物理性检测[2]

外包装密封性应完好，无泄漏等现象；颜色一般为浅色，状态应为干燥粉末，无吸潮结块现象；成品培养基应防止过分失水，还应注意成品培养基如平皿裂纹、充碟不均、溶血(血平板)、冷冻、过多的汽包和斑点、污染，表面凹凸不平等现象，如有上诉缺陷，应做好相应记录，并及时通知供应商，查明原因并加以纠正。

3.1.2 PH值的测定

灭菌前后都应测定其PH值，看是否满足标准要求和灭菌前后PH值的变化差异是否正常，成品培养基是否符合标签要求。注意测量时尽量使培养基温度控制在20℃-25℃。

3.1.3 凝胶强度的测定

凝胶强度表明培养基中琼脂凝固的程度。可用凝胶强度测定仪测试。灭菌条件，特别是PH值会影响凝胶强度。凝胶强度统一使用g/cm2作为标准来表示培养基的硬度。成品干燥培养基的凝胶强度450-650g/cm2之间，半固体培养基的适宜凝胶强度在90g/cm2左右。

3.2 微生物学实验方法[3]

3.2.1 无菌试验

试验用培养基在按标准或使用说明配制成新鲜的产品培养基，应与标本一致的环境条件进行培养，观察培养基应无菌落生长。

3.2.2 稳定性试验

培养基在保质期或有效期内，各项指标都应在保质期内得到保证。不同培养基，保质期不同，具体时间根据实际情况决定。

3.2.3 细菌学质控试验

一般是测试培养基的灵敏度和准确度。是培养基的重要内在质量指标，它是用已知的标准菌株按照规程和检验标准的要求测定培养基的性能是否符合，测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株，应来自国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株。所有培养基在使用前均应进行细菌学质控试验。

3.2.4 固体培养基试验方法

(1)平板涂布法：将试验和对照培养基做成4mm厚的平板并使表面干燥，将试验和对照培养基进行系列稀释度接种，每个稀释度各取4滴，分别加入4个试验和对照培养基；从高稀释度开始涂布，培养平板，并对数量和菌落形态进行评价。

评价方法：PR(生长率)=Ns(试验培养基的菌落数)/N0(对照培养基的菌落数)

根据培养基的不同，是否为选择性培养基等具体情况，查表得出满意率。

(2)划线法：将平板按同一方向划线，开始为涂抹区，然后用火焰对接种针灭菌，经灭菌冷却后的接种针，划过涂抹区引三道线出来至干净的平板，然后继续划线，菌液浓度逐步降低，最终能分离出单个菌落。

评价方法：此法属于半定量，在实际操作中多用于定性质控，检查是否有典型菌落生长。

3.2.5 液体培养基试验方法

一般为目标和非目标微生物的定量稀释法，液体培养基一般为10ml/管待检。不同培养基，根据不同标准接种少量的目标微生物、和大量的非目标微生物到试验肉汤和对照肉汤中培养，每种肉汤接种培养后涂布到非抑制性培养基上。