卡马西平联合塞来昔布治疗癫痫模型大鼠的不良反应评估

刘帮慧, 戴启荷

(湖北省荆州市中心医院 神经内科, 湖北 荆州, 434022)

癫痫是神经内科较为常见的短暂性脑功能失调综合征，发病率逐年上升，癫痫发作的表现主要以运动、行为、感觉、自主神经等一系列的功能障碍为主，如不及时采取治疗措施，可能会迁延恶化为难治性癫痫，对患者的生命健康与生活质量造成十分大的威胁。抗癫痫药物(AED)是目前控制疾病发作、减少发作次数的主要药物，但是部分AED长期服用可能出现严重的不良反应，损害脏器或认知功能[1-3]，因此，临床应用的AED需要保证有较好的耐受性和安全性。本组建立癫痫大鼠模型，给予卡马西平与塞来昔布联合用药，并设立生理盐水对照组，观察用药后的不良反应，为临床安全用药提供可靠的动物实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级雄性Wistar大鼠90只，购自荆州市中心医院动物实验室，体质量180～250 g, 放在独立、通风的笼盒饲养, 5只/笼，饲养温度19 ℃～25 ℃, 湿度50%～60%, 饲养环境经常消毒，大鼠自由进食，每2 d更换一次垫料。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 实验仪器：微量注射器(上海玻利鸽工贸有限公司)，脑立体定位仪(日本NARISHIGE公司)，OLYMPUS显微镜(日本NARISHIGE公司)，BL-420图像分析系统(成都泰盟软件有限公司)，小型牙钻(韩国DSI公司)。

1.2.2 实验试剂：海仁酸(美国Kainic Acid公司)，大鼠心肌肌钙蛋白T(cTnT)ELISE 试剂盒(德国宝灵曼公司)，NycoPlastin试剂(ISI值=1.19)，CaCl2溶液、苏木素液、伊红染液(上海科兴生物科技有限公司)，卡马西平片(北京诺华制药有限公司)，塞来昔布(美国辉瑞公司)。

1.3 方法

1.3.1 分组方法：随机选出10只大鼠设为假手术组，其余80只设为癫痫模型组。造模过程中假手术组有2只死于麻醉，剩下8只纳入研究；模型组麻醉、手术过程死亡18只，根据脑电图淘汰2只，剩余60只纳入研究，并随机均分为对照组与实验组，各30只。

1.3.2 癫痫模型建立方法：大鼠10%水合氯醛腹腔注射麻醉，俯卧位固定；于头背部中间处剪毛消毒后做长2 cm纵切口，暴露前囟区，于右侧的海马CA3区钻孔，海仁酸1.5 μg(浓度1 μg/μL)缓慢注入该区域，整个注射过程大约10 min, 停针约5 min后缓慢拔出注射器，并在注射区域及额窦置入电极，以502胶固定。缝合切口后外敷青霉素防感染，放回笼后，依照Racine分级办法密切观察大鼠的癫痫发作行为及脑电图。假手术组模型建立方法同上，但在大鼠海马CA3区域注射的是等量生理盐水，术后腹腔注射青霉素防感染。

1.3.3 治疗方法：灌胃给药，假手术组及对照组均给予生理盐水1 mL/d、实验组给予卡马西平125 mg/kg、塞来昔布20 mg/kg，连续治疗28 d后，处死大鼠。

1.4 癫痫点燃标准

本组根据Racine分级标准判断模型癫痫点燃情况：大鼠在术后30 min～6 h内出现Ⅳ级以上的痫性行为，即被认为是癫痫充分点燃或者点燃成功；将痫性行为的发作强度分为6个级别，分别为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级、Ⅴ级、Ⅵ级。

1.5 观察指标

大鼠全部处死后选其肾脏组织、胃窦黏膜制成病理标本，采用光镜检测、观察，分析各组胃窦黏膜的病理学改变；取心脏血检测凝血功能，计算国际标准化比值(INR)，并观察血液中心肌损伤标志物cTnT的表达水平。

2 结 果

2.1 各组大鼠的存活情况

假手术组8只均存活，存活率100%; 对照组存活17只，存活率为56.67%; 试验组存活22只，存活率为73.33%。

2.2 各组大鼠胃窦黏膜病理学改变

假手术组与对照组大鼠胃窦黏膜均未见明显病理学改变，实验组中仅有2例(6.67%)出现病理学改变，其中1例表现为胃窦黏膜炎细胞浸润，另1例表现为胃窦黏膜充血。3组胃窦黏膜病理学改变发生率无显著差异(P>0.05)。3组大鼠的胃窦组织病理切片见图1～3。

2.3 各组大鼠肾脏病理学改变情况

假手术组与对照组受检模型的肾脏组织均无明显的病理学病变，实验组1例(3.33%)出现肾小球细胞水样变性，组间比较无显著差异(P>0.05)。3组大鼠肾脏病理切片见图4～6。

图1 假手术组胃窦黏膜 HE 100倍

图2 对照组胃窦黏膜 HE 100倍

图3 实验组胃窦黏膜 HE 100倍

图4 假手术组肾脏组织 HE 100倍

图5 对照组肾脏组织 HE 100倍

图6 实验组肾脏组织 HE 100倍

2.4 各组INR值及cTnT水平比较

各组治疗后INR 值无显著差异(P>0.05); 对照组及实验组cTnT水平显著高于假手术组(P<0.01), 且实验组显著低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 各组INR值及cTnT水平比较

与假手术组比较，*P<0.05, **P<0.01;与对照组比较, ##P<0.01。

3 讨 论

癫痫是临床常见神经系统疾病，卡马西平是治疗新诊断症状性部分性癫痫的一线药物[4]。研究[5]表明，癫痫的炎性反应与脑内环氧化酶-2(COX-2)激活及前列腺素水平增高等密切相关，因此，COX-2抑制剂被逐渐应用于抗癫痫治疗。大量研究[6-7]表明，COX-2抑制剂可降低痫性发作的频率及癫痫持续状态的病死率。塞来昔布、伐地考昔、罗非昔布等均属于COX-2抑制剂，但由于不同的COX-2抑制剂存在不同的代谢途径、半衰期以及血浆蛋白结合率，因此，在临床应用中可能出现不同的不良反应。当前，塞来昔布是临床应用最普遍的COX-2抑制剂。Kim E[8]等对高血压模型大鼠实施了塞来昔布与罗非昔布的对照试验，结果显示塞来昔布在改善肾小球、肾脏CRP值、系膜硬化、防止巨噬细胞聚集等方面的作用显著优于罗非昔布组，但其在肾脏、凝血功能、心血管等方面的安全性，医学界尚未有统一的意见[9]。

一项纳入11008名关节炎患者的双盲、随机的试验表明，塞来昔布组的胃肠道不良反应率与安慰剂组比较无显著差异，但显著低于萘普生组8倍[10]。本研究中，对3组模型大鼠分别进行不同的治疗，结果表明实验组仅出现1例胃窦黏膜炎细胞浸润、1例胃窦黏膜坏死、1例肾小球细胞水样变性，3组胃肠道及肾脏病理学改变发生率无显著差异(P>0.05)，提示卡马西平与塞来昔布联合治疗癫痫对模型大鼠胃肠道系统及肾脏组织无显著不良影响。

研究表明，长期联用塞来昔布与华法林治疗凝血功能障碍的患者，其INR水平较单用华法林者高，因此，临床实施塞来昔布治疗时，应密切监测患者凝血功能的变化。本组研究中, 3组INR值比较无显著差异[11-13], 表明利用海仁酸点燃方式建立的癫痫模型未采取抗癫痫治疗时大鼠凝血功能无明显改变；马西平联合塞来昔布治疗后也并未对大鼠凝血功能造成显著不良反应[14]。

现阶段，国内外医学界尚未对塞来昔布影响心肌细胞的程度形成统一的结论，但有实验研究[15]表明，低剂量塞来昔布可改善急性心肌缺血家兔的冠状动脉功能。本组研究中，对照组大鼠cTnT水平显著高于假手术组，提示如未能及时对癫痫大鼠进行抗癫痫治疗，大鼠会出现明显的心肌细胞损伤，原因可能是海仁酸点燃操作中，心肌细胞线粒体膜的通透性被极大改变，细胞呼吸作用的电子传递链被阻断，从而出现心肌损害；同时，癫痫的多次反复发作，也可能造成心肌损伤；而实验组治疗后cTnT水平显著降低，提示联合用药后大鼠心肌损伤的程度得到显著改善。

综上所述[16], 对通过海仁酸快速点燃海马建立的癫痫模型给予卡马西平及塞来昔布联合治疗，并未对大鼠的胃肠道、肾脏、血液系统等产生明显不良反应，且可有效降低血液cTnT水平，对心肌具有一定保护作用。但这只是小样本量动物实验结果，其具体作用还需临床筛选大样本病例进一步研究。

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