哈萨克药材黑果越橘质量标准初步研究

刘 冲，董红亚，2，杨伟俊*，满尔哈巴·海如拉，阿斯亚·拜山伯(.新疆维吾尔自治区药物研究所/新疆维吾尔药重点实验室，乌鲁木齐 830004；2.新疆维吾尔自治区中医院，乌鲁木齐 830054)

黑果越橘VacciniummyrtillusLinn.为杜鹃花科越橘属植物[1-2]，其干燥地上部分系哈萨克医习用药材。黑果越橘产于亚洲西南部、北美、前苏联、蒙古以及中国阿尔泰山脉的河谷、旷野、针叶阔叶林下[3]。哈萨克族民间多用该植物的果和叶，黑果越橘的果营养价值极高，可供食用；叶具降糖作用，常用于局部治疗眼、皮肤、口腔感染。近年报道，黑果越橘的叶的醇提取物对遗传性高血脂大鼠显示降脂作用[3-4]。浆果具收敛补益和防腐作用，广泛用于治疗腹泻、痔疮、胃肠道炎症、口腔感染和尿道感染等症[5-7]。目前，黑果越橘药材的质量标准未见报道，针对其药材用药安全、质量标准，本课题组探讨了10个批次黑果越橘药材的共同特征，寻找能表征质量的指标和参数，为制定其全面的质量标准提供基础数据。

1 仪器与试药

1.1仪器 OLYMPUS CX31 型照相显微镜(日本奥林巴斯公司)；BS110S型电子天平(Sartorius)；KQ-5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；YOKO-ZS紫外线分析摄影仪(武汉药科新技术开发公司)；SZ-93型双重纯水蒸馏器(巩义市英峪予华仪器厂)。

1.2试药 实验用药材于2010至2011年采集于新疆维吾尔自治区阿勒泰山区，批号分别为：20100802，20100805，20100808，20100810，20100812，20100813，20100814，20100820，20100821，20110823，经何江副研究员鉴定为黑果越橘VacciniummyrtillusL.的干燥地上部分。熊果酸对照品购自中国药品生物制品检定所(批号110742-200518)；硅胶G预制板(青岛海洋化工厂分厂)；水为蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1药材性状鉴别 本品多分枝，长7～15 cm，幼枝灰绿色，无毛，茎锐棱。叶多数，多以破碎或散生枝上，叶片纸质，卵形，边缘具细锯齿，两面无毛，叶脉纤细，叶面平坦，背面突起；叶柄极短。果实少数，浆果球形，表皮皱缩，直径0.3～0.6 cm，蓝黑色，少数有霜迹。无嗅，味甘甜、涩。

2.2显微鉴别 本品粉末黄绿色。茎表皮细胞类长方形，内含簇晶及方晶；叶气孔不定式。果实中石细胞群多见，长45～120 μm，宽14～39 μm。花粉粒类球型，表面有细密点状雕纹，直径23～46 μm。淀粉粒单粒，层纹不清，脐点棒状或不清。纤维成束状，扁平且中腔较小，螺纹导管众多。见图1。

图1 黑果越橘粉末

茎的横切面：表皮为2～3列薄壁细胞，多角形，壁略增厚；皮层为数列薄壁细胞；韧皮部狭窄；形成层呈环；木质部连接成环；髓部细胞壁薄，内含淀粉粒。见图2。

图2 黑果越橘茎的横切面

2.3薄层色谱鉴别 称取黑果越橘药材粉末5 g，加无水乙醇50 mL，超声提取30 min，过滤，滤液水浴蒸干，残渣用0.5 mL无水乙醇溶解，作为供试品溶液。另精密称取熊果酸对照品0.5 mg，加甲醇制成1 mL溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法按照《中国药典》方法实验[8]，吸取2 种溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(24∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以100 mL·L-1硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热使斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

2.4水分 黑果越橘药材水分测定按照文献方法[8]测定。10 批次供试品，测定结果的平均值为6.29%，最高为6.59%，暂定水分不得超过7.0%。

2.5总灰分 黑果越橘药材灰分测定按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ K测定，10批次供试品测定结果平均灰分为5.04%，最高为6.47%；暂定总灰分不得高于7.00%。

2.6浸出物 黑果越橘植物中主含脂溶性活性成分。本方法以水、乙醇为溶剂进行测定。照《中国药典》方法测定[8]。10批次供试品水溶性冷浸法平均值为23.28%，最低20.26%，暂定不得少于18.00%；醇溶性冷浸法平均值为15.19%，最低13.30%，暂定不得少于11.00%；水溶性热浸法平均值为27.47%，最低25.24%，暂定不得少于23.00%；醇溶性热浸法平均值为22.09%，最低为20.15%，暂定最低不得少于18.00%。植物中主含脂溶性活性成分，因此检查时以醇溶性热浸法为主。

3 讨论

在薄层色谱鉴别中，本实验考察了不同体积分数(乙醇、甲醇) 溶剂对黑果越橘供试品的影响[9-11]，确定无水乙醇作为提取溶剂。超声提取和回流提取之间没有明显的差别，考虑到药材黑果越橘所含的熊果酸对热不稳定，故选用超声提取为供试样品溶液的提取方法。通过比较多种展开剂系统:(1)氯仿-甲醇-乙酸乙酯(4∶1.5∶4)；(2)氯仿-石油醚-甲醇(5∶5∶4)；(3)正丁醇-醋酸-水(5∶2∶1)；(4)甲苯-乙酸乙酯-甲酸(24∶10∶1)，其中展开剂(4)有较好的薄层色谱分离效果，确定为最佳展开剂。

本研究首次对哈萨克药黑果越橘药材进行了质量标准初步研究，实验结果表明，黑果越橘的显微特征：茎表皮细胞类长方形，内含簇晶及方晶；气孔不定式；果实中石细胞群多见。薄层色谱中与对照品(熊果酸)相对应的药材有明显斑点。其参数为控制药材内在质量、进一步开发利用黑果越橘药材资源奠定基础。

参考文献：

[1] 中国植物志编辑委员会.中国植物志:第五十七卷[M].北京:科学出版社，1997:159.

[2] 巴哈尔古丽·黄尔汗，徐新.哈萨克药志：第一卷[M].北京：民族出版社，2009:159.

[3] 吴林，刘海广，刘雅娟，等.越橘叶片组织结构及其与抗寒性的关系[J].吉林农业大学学报，2005，27(1):48-50，54.

[4] 刘淑兰，吕秀莲，王晓军，等.越橘的化学成分与药理活性研究进展[J].中医药学报，2006，34(6) 36-39.

[5] Naomi Katsube，Keiko Iwashita，Tojiro Tsushida，et al.Induction of apoptosis in cancer cells by bilberry(Vacciniummyrtillus) and the anthocyanins[J].J Agric Food Chem，2003，51(1)，68-75.

[6] Laura Jaakola，Anja Hohtola.Activation of flavonoid biosynthesis by solar radiation in bilberry(VacciniummyrtillusL.) leaves[J].Planta，2004，218: 721-728.

[7] Ana Faria，Joana Oliveira，Patrcia Neves，et al.Antioxidant properties of prepared blueberry(Vacciniummyrtillus) extracts [J].Agric Food Chem，2005，53(17)，6896-6902.

[8] 国家药典委员会.中国药典2010年版[S].北京:中国医药科技出版社，2010:附录Ⅵ B.

[9] 罗由萍，邓鹏飞.薄层色谱及其在药用植物研究中的应用[J].安徽农业科学，2011，39(6):3309-3312.

[10] 杨方明，李卫民，高英.九节茶薄层鉴别条件的优化[J].辽宁中医杂志，2008，35(1)，105-106.

[11] 孟艳秋，焉兆凯，夏燕.等.熊果酸衍生物的研究现状和展望[J].化学试剂，2011，33(1)，39-43.