RP-HPLC法测定维药白花丹中白花丹醌的含量

孙 宇，卿德刚，张 娟，倪 慧*，贾晓光，李超颖(.新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，乌鲁木齐 83000；.新疆大学生命科学与技术学院，乌鲁木齐 830046)

维吾尔药材白花丹系白花丹科植物白花丹(PlumbagozeylanicaL.)的干燥茎枝，维语名称为夏特然吉印地，是维吾尔医药常用药材之一[1]。维药典籍中记载：其具有消除异常体液、开通湿寒气阻、清音、利咽、止痛、消食、助阳、疗肤等功效；常用于治疗白癜风、牛皮癣、疖疮、死胎、心血管等病症[2-3]。白花丹在新疆地区应用广泛，每年具有很大的使用量，目前主要依靠进口，药材质量参差不齐，价格较贵[4]。因此，制定科学的维吾尔药白花丹的质量标准尤为重要。白花丹醌是白花丹的特性成分之一，具有治疗白血病、抗癌(肝癌)、抗菌、抗生育、祛痰、治疗心血管疾病等多方面的药理作用[5-6]。本文以白花丹醌为检测指标，建立了白花丹药材中白花丹醌含量测定的方法[7-8]；并对新疆和田、喀什、乌鲁木齐及广西南宁、恭城等地收集到的药材进行白花丹醌含量差异比对，为维药白花丹药材的质量控制及标准的提升提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1仪器 岛津LC-2010CHT型高效液相色谱仪，Mettler AE163电子天平。

1.2试药 白花丹醌对照品(批号：P7262)购自Sigma公司；白花丹药材收集于新疆喀什、和田、乌鲁木齐及广西恭城、南宁等地，经新疆维吾尔自治区食品药品检验所刘勇民主任药师鉴定为白花丹科植物白花丹PlumbagozeylanicaL.的不带叶的干燥茎枝；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件 Waters XTerra RPC18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-水(60∶40)为流动相；检测器：紫外检测器；检测波长：270 nm，柱温：25 ℃；色谱软件：岛津 LC solution工作站；进样量：10 μL 。色谱图见图1。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备 精密称取白花丹醌对照品1.43 mg，加25 mL甲醇溶解制成每1 mL含57.2 μg的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备 取白花丹药材粉末(过2号筛)约1.5 g，精密称定，置于100 mL具塞锥形瓶中，加入30 mL甲醇，精密称定质量，超声提取30 min，取出，待冷却后，用甲醇补充减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45 μm滤膜，作为供试品溶液。

图1 HPLC图谱

2.3线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0和8.0 μL，在色谱条件下，依次进样，以对照品进样量(μg)为横坐标、峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y= 6 071 269X-5 039.672，r=0.999 9。结果表明，白花丹醌进样量在0.028 6～0.457 6 μg范围内呈良好的线性关系。

2.4精密度实验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，按2.1项下色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，RSD为0.13%。

2.5重复性实验 取同一批次样品6份，按2.2.2项下制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样，测定白花丹醌的峰面积，结果RSD为1.3%。

2.6稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在制备后0，2，4，8，10，12和24 h进样测定，测定白花丹醌峰面积的RSD值为0.82%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7加样回收率实验 取已知含量的样品1.5 g共6份，精密称定，分别加入质量浓度为69.6 μg·mL-1的对照品溶液适量。按2.2.2项下制备供试品溶液，进行测定，计算回收率。结果见表1。平均加样回收率(n=6)为100.4%，RSD为1.2%。

表1 加样回收率实验结果

2.8样品测定 取12批白花丹样品各1.5 g，精密称定，分别按2.2.2项下制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，外标法计算，每批样品测定3 次，结果见表2。

表2 不同批次样品含量测定结果

3 讨论

据文献报道，白花丹醌的检测波长为213 nm左右[7]和270 nm左右[9]，本实验经双波长考察发现，在213 nm处白花丹样品杂质出峰多，干扰较大，不宜测定，而在270 nm波长处杂质干扰较少，故选择270 nm为检测波长。

从实验数据中可得出，新疆地区收集的白花丹药材白花丹醌含量较低。分析原因可能是由于本地区的白花丹药材主要是从国外进口，受产地及存放时间等多方面因素影响。

由于现有的《中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册》中对维药白花丹制定的质量标准比较简陋，为进一步提升维药白花丹药材的质量标准，本实验采用高效液相色谱法测定了药材中白花丹醌的含量，并建立了白花丹药材中白花丹醌含量测定的方法。实验结果表明，该方法准确，重复性良好，灵敏度高，可为维吾尔药白花丹的质量控制提供科学依据。

参考文献：

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：60卷[M].北京：科学出版社，1999:1-5.

[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药材标准：维吾尔药分册[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999:23.

[3] 宋立人，胡烈，阿不都热依木·卡地尔，等.中华本草:维吾尔药卷[M].上海：上海科学技术出版社，2005：124-125.

[4] 刘勇民.维吾尔药志：下册[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999:192-198.

[5] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，1996:711-712.

[6] 中国药品生物制品检定所.中国民族药志：第二卷[M].北京：人民卫生出版社，1990:152-157.

[7] 刘圆，刘超.RP-HPLC测定不同产地白花丹中白花丹醌的含量[J].中国药学杂志，2007，52(18)：1429-1430.

[8] 孟庆艳，白红进.RP-HPLC法测定罗布麻和大花罗布麻不同部位中槲皮素含量[J].西北药学杂志，2011，26(1)：22-24.

[9] 霍仕霞，闫明，张兰兰，等.白花丹高效液相色谱指纹图谱分离条件优化[J].医药导报，2009，28(11)：1399-1401.