结核感染T细胞斑点试验诊断结核性心包积液的意义

彭勇+陈伟宁

[关键词]结核；T SPOT.TB试验；心包积液

中图分类号：R542.1+2文献标识码：B文章编号：1009_816X（2014）03_0260_02

doi：10.3969/j.issn.1009_816x.2014.03.36结核感染T细胞斑点试验（T_SPOT.TB）通过酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测外周血中经结核菌特异性抗原刺激后释放γ干扰素的T细胞，诊断结核分枝杆菌感染具有较高的敏感性和特异性，本文主要针对我院收治的高度怀疑结核性心包积液患者的外周血液行ELISPOT检测，探讨该方法对结核性心包积液的诊断价值。

1资料与方法

1.1一般资料：选取我院2011年11月至2013年11月住院患者48例，根据以下标准，将患者分为两组：观察组拟诊结核性心包积液组21例，其中男12例，女9例，年龄16～72（38.9±13.5）岁，包括结核杆菌培养阳性、或结核杆菌培养阴性，但临床表现、影像学检查疑似结核，抗结核治疗有效的患者；对照组27例，其中男15例，女12例，年龄14～75（48.3±18.7）岁； 其中7例非结核感染性渗出性心包积液、8例癌性心包积液（肺癌5例、淋巴瘤1例、乳腺癌2例） 、11例与心力衰竭有关、1例与肾上腺功能减退有关。所有病例均排除HIV感染。

1.2方法：

1.2.1T_SPOT.TB检测：根据T_SPOT.TB试剂盒（Oxford Immunotec，Oxford UK）操作。肝素抗凝管采集6ml外周静脉血，样本室温（15～25℃）保存与运输，样本采集后尽早（24小时内）送到杭州市艾迪康医学检验中心。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMCs）。洗涤后进行细胞计数。PBMCs和结核特异性抗原同时加入包被抗体的反应孔中，孵育过夜（37℃，5% CO2），效应T淋巴细胞释放细胞因子，与预包被的抗体结合。洗板，加入二抗，孵育1小时。洗板，加入底物显色液孵育7分钟。蒸馏水终止反应。一个斑点代表一个效应T淋巴细胞。

1.2.2结果判定：根据T SPOT.TB试剂盒使用说明书。结果包括阴性对照、抗原A、抗原B和阳性对照。阳性结果参照以下标准：阴性对照孔斑点数0～5个，且（抗原A或者抗原B）-（阴性对照孔斑点数）≥6 。阴性对照孔斑点数6～10个，且（抗原A或者抗原B）≥2×（阴性对照孔斑点数）。如果上述标准不符合且阳性对照孔正常示检测结果为“阴性”。

1.3评价指标：采用敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、 阴性预测值（NPV）。

1.4统计学处理：应用SPSS 16.0版统计软件，率的比较采用卡方检验，对各组检出阳性率进行统计学分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

在观察组21例可疑结核性心包积液患者中，20例T_SPOT TB试验阳性，阴性1例；在对照组27例中T_SPOT TB试验阳性4例，阴性23例。T_SPOT.TB试验诊断结核性心包积液的敏感性为95.2%，特异性为85.2%，阳性预测值为83.3%，阴性预测值为95.8%。

3讨论

肺外结核是指发生在肺部以外的全身其他脏器的结核感染，结核性心包积液属肺外结核感染导致的渗出性病变。国外资料显示肺外结核约占结核病的20%左右，在中国约占结核病的9.7%～11.8%，病死率占总结核病病死率的14.1%～17.6%[1]。现在诊断肺外结核仍存在一定困难，结核菌素试验（TST）虽然是目前筛查结核感染的主要的辅助手段，但有很多局限性，Madariaga等[2]对47例痰菌阳性的结核患者进行检测，结果表明T_SPOT TB诊断活动性结核比TST的灵敏度高。目前，大量研究证实，T_SPOT TB检测对于潜伏性结核感染及活动性肺结核具有较高的敏感性及特异性。Kim等[3]随诊72例疑诊肺外结核患者的前瞻性研究显示，对于活动性肺外结核，T_SPOT.TB的敏感性为94%，TST敏感性为47%。类似TST，如果T_SPOT.TB的斑点数在短时间内显著增加，则强烈提示体内活动性结核，此时给予预防性治疗十分必要[4]。

本文局限性在于例数较少，若准确评价外周血T_SPOT.TB检测在中国人群诊断心包结核应用价值，尚需要进行大样本、前瞻性队列研究。此外，T_SPOT.TB结果的可靠性、稳定性与各个实验室的质量控制水平有关。

参考文献

[1]Mori T， Sakatani M， Yamagishi F， et al. Specific detection of tuberculosis infection： an interferon_gamma_based assay using new antigens[J]. Am J Respir Crit Care Med，2004，170（1）：59-64.

[2]Madariaga MG， Jalali Z， Swindells S. Clinical utility of interferon gamma assay in the diagnosis of tuberculosis[J]. Am Board Fam Med，2007，20（6）：540-547.

[3]Kim SH， Song KH， Choi SJ. Diagnostic usefulness of a T_cell_based assay for extrapulmonary tuberculosis in immunocompromised patients[J]. Am J Med，2009，122（2）：189-195.

[4]Pai M， Zwerling A， Menzies D. T_cell_based assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection： an update[J]. Ann Intern Med，2008，149（3）：177-184.

（收稿日期：2013_12_26）