HER2和PTEN在膀胱尿路上皮细胞癌组织中的表达及其临床意义

管建云 李军扩

1) 河南安阳市肿瘤医院外三科 安阳 455004 2) 河南安阳市肿瘤医院病理科 安阳 455004

膀胱癌的发生、发展是多基因共同参与的复杂的过程，常伴随着癌基因激活和抑癌基因失活。癌基因HER2 和抑癌基因PTEN 可影响共同的细胞信号转导通路，在多种肿瘤的发生发展中起协同作用［1］。近年来的研究发现两者与膀胱癌的发生也存在密切关系。本研究采用免疫组化方法检测HER2 和PTEN 在膀胱癌组织中的表达，分析其与膀胱癌临床、病理之间的关系以及两者表达的相关性，探讨其在临床应用中的价值，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本组收集2010 -06—2013 -03 间本院开放手术切除并均经病理证实为膀胱尿路上皮细胞癌患者的组织标本62例，男48例，女14例;年龄34～78(57.8 ±6.1)岁。按WHO病理分级标准:III 级16例，II 级24例，I 级22例。临床分期按UICC-TNM 标准:Ta-T1期37例，T2-T4期25例。23例对照组正常膀胱组织取自同期其它膀胱手术患者，男17例，女6例;年龄26～72(55.3 ±7.5)岁。两组患者的年龄、性别等一般情况比较，差异无统计学意义(P ＞0.05)，具有可比性。

1.2 试剂及方法 鼠抗人HER2/neu 单克隆抗体、鼠抗人PTEN单克隆抗体，SP 免疫组化试剂盒及DAB 显色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。所有标本经常规10%福尔马林固定，脱水，包埋，4 m 连续切片，脱蜡。分别作HE 诊断及免疫组化染色。免疫组织化学SP 二步法，操作步骤严格按试剂盒说明书进行。用PBS 代替一抗作阴性对照，用己知阳性片作为阳性对照。

1.3 结果 判定HER2 蛋白阳性表达主要表现为细胞膜棕黄色着色，PTEN 阳性细胞为胞浆或细胞核着色，呈橘黄色或棕黄色颗粒。每张切片随机选取5个高倍视野镜(10 ×40)，根据阳性细胞占全部同类细胞总数的百分比及细胞染色强度作结果判定［1］。着色强度计分:不着色为0 分，浅黄色为1 分。棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。再将按阳性细胞比例评定:阳性细胞数＜10%计为0 分，10%～40%之间为1 分，41%～70%之间为2分，＞70%计为3 分。将上述两种评分结果相加:0～1 分者为(-)，2 分者为(+)，3～4 分者为(+ +)，5～6 分者为(+ + +)。将≥2 分归为阳性作统计学处理。

1.4 统计学方法 使用SPSS 13.0 统计软件进行统计学分析，率的比较采用x2检验，相关性采用Spearman 相关分析方法。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HER2 和PTEN 的表达情况 HER2 蛋白在62 份膀胱癌组织中的阳性表达率为53.2%。在23 份正常膀胱组织中未见表达，其表达率为0。膀胱癌组织中表达率明显高于正常膀胱黏膜组织，差异有统计学意义(P ＜0.05)。PTEN 蛋白在62 份膀胱癌组织标本中阳性表达率为46.7%。在23 份正常膀胱组织中均为阳性表达，阳性表达率为100%。膀胱癌组织中表达率明显低于正常膀胱组织，差异有统计学意义(P ＜0.05)。HER2 和PTEN 的阳性表达分别见图1、图2。

图1 HER2 在膀胱癌组 织中的阳性表达

图2 PTEN 在正常膀胱组织中的阳性表达

2.2 HER2 和PTEN 的表达与膀胱癌临床、病理特征的关系随着膀胱癌病理分级、临床分期的增高，HER2 蛋白阳性表达率增高，组间比较差异有统计学意义(P ＜0.01)。而膀胱癌病理分级、临床分期越高，PTEN 蛋白的阳性表达率越低，组间比较，差异具有统计学意义(P ＜0.05)，见表1。

表1 HER2 和PTEN 的表达与膀胱尿路上皮细胞癌临床、病理之间的关系

2.3 HER2 和PTEN 表达的相关性分析 HER2 阳性者中有20例PTEN 阴性表达。HER2 阴性者中有9例PTEN 阴性表达。两者在膀胱癌组织中的表达呈负相关(r= -0.481，P ＜0.05)。

3 讨论

Her2/neu(又称c -erbB -2)是原癌基因，定位于人染色体17q21，编码一个p185 的跨膜糖蛋白，即HER2。作为受体蛋白，HER2 具有内源性酪氨酸激酶活性，其自身活化后作用于特定的信号蛋白，激活PI3K/AKT、RAS/MAPK 等多种细胞信号转导途径，引发级连式放大反应，促进细胞增殖、分化，加速细胞转化、抑制凋亡，从而致癌变。HER2 在许多恶性肿瘤细胞如乳腺癌、子宫内膜癌、肺癌、膀胱癌、胃癌等中过度表达［2］，而且其表达水平与肿瘤分级、分期及预后关系密切。国内外学者的研究证实［3-4］，HER2 在部分膀胱癌中高度表达，此类肿瘤多是分期和分级较高者，容易发生浸润、转移且预后不佳。有报道［5］显示，HER2 的表达与浸润性膀胱癌相关，是膀胱肿瘤复发及病死率的独立预后因素。本研究结果表明，HER2 在正常膀胱组织无表达，在部分膀胱癌组织中高表达，且与膀胱癌的分级、浸润性相关，其差异有统计学意义，提示HER2 参与了膀胱癌的发生发展，并与恶性生物学行为相关。

目前，已有多种针对HER2 受体的靶向药物应用于肿瘤临床治疗，其中最常用及引人关注的是曲妥珠单抗。它作为抗体能特异性地与HER2 的胞外段结合，从而阻断HER2 的二聚化及活化，抑制HER2 介导的细胞信号转导通路，诱导细胞凋亡，最终抑制肿瘤细胞的生长、增殖。目前，膀胱癌的抗HER2 治疗尚在动物试验及临床试验阶段［6］，这与不同学者的研究结论不一致有关。也表明肿瘤的发生是一个复杂的过程，与多基因的参与有关。

PTEN 是抑癌基因，定位于人染色体10q23.3，编码蛋白称PTEN 蛋白，是一含403个氨基酸的多肽链，具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶活性。与HER2 作用相反，它是细胞信号转导通路的负性调节因子，主要是通过发挥其双特异性磷酸酶活性，脱去PI3K/AKT，RAS/MAPK，FAK(聚集粘连激酶)等信号转导途径中多种关键激酶的磷酸根，使其活性减弱，从而阻断细胞内的信号转导通路。抑制细胞转化，调控细胞周期、促进凋亡，从而对肿瘤发生、发展起负性调控作用［7］。有证据显示，在多种恶性肿瘤组织细胞中发现有PTEN 基因的突变或表达异常［8-9］，且与肿瘤的发生、发展及预后有关。在膀胱癌中PTEN 的表达缺失或低表达也普遍存在［10］，且随着肿瘤细胞病理分级、临床分期的增高，PTEN 的阳性表达率呈下降趋势，它可以作为膀胱癌预后的观察指标［11］。本研究显示，正常膀胱组织中PTEN 蛋白表达率为100%，而在膀胱尿路上皮细胞癌中的表达率仅为46.7%，其差异有统计学意义(P ＜0.05)，而且随着肿瘤病理分级、临床分期的增高，PTEN 的阳性表达率也相应降低，差异均有统计学意义(P ＜0.05)。由此表明，PTEN 低表达或表达缺失在膀胱尿路上皮细胞癌的发生、发展过程中起重要的作用。

本研究对HER2 和PTEN 在膀胱癌组织中的表达进行了相关性分析，发现两者的表达呈负相关，提示HER2 过表达与PTEN 表达缺失可能通过共同的信号转导通路，协同促进了肿瘤的形成及进展，并在治疗中相互影响。有研究表明［12］，对曲妥珠单抗治疗的敏感性差的HER2 阳性乳腺癌患者与PTEN的表达相关。目前曲妥珠单抗尚未应用于抗膀胱癌的治疗，可能与两者表达呈负相关有关。文献报导，甘草苷［13］、吲哚美辛［14］等均可以上调人细胞PTEN 的表达，相信随着研究的不断深入，在膀胱癌的治疗中选择这两种基因为靶点，有可能起到积极作用。

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